髙 翊

（深圳市鹽田區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東深圳 518081）

實驗室參加能力驗證計劃是為了確定實驗室從事特定測試活動（校準(zhǔn)/檢測）的技術(shù)能力[1]；識別實驗室存在的問題并制定措施整改、預(yù)防問題重現(xiàn)；確定建立或采用的新方法的有效性和可比性；識別實驗室間的差異；達(dá)成實驗室間結(jié)果互相承認(rèn)，維持國際相互協(xié)議（Mutual Responsibility Agreement，MRA）[2]；驗證項目質(zhì)量控制措施的有效性；保證實驗室按質(zhì)量管理體系要求運行等[3]。

鹽田疾控實驗室因業(yè)務(wù)需要認(rèn)證了較多類型和檢測項目，部分項目由于各種原因不常開展，維持項目檢測能力成為實驗室必須解決的問題。項目能力維護(hù)采用的最優(yōu)技術(shù)手段是參加能力驗證，實驗室間比對或測量審核即“一對一”的能力驗證計劃[4]。

2020 年6 月實驗室參加醬油中總酸和氯化鈉的測定能力驗證計劃，反饋結(jié)果為不滿意。暫停項目后質(zhì)量管理及實驗人員按國家標(biāo)準(zhǔn)方法、依照管理體系質(zhì)量控制要求，重做實驗室測試發(fā)現(xiàn)易出錯的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，采用正確測試方法得到滿意結(jié)果，分析檢測方法操作細(xì)節(jié)，掌握檢測獲得正確結(jié)果的技術(shù)規(guī)范，保證項目檢測能力的維持和提高。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

CFAPA-922 計劃樣品，166 號和178 號共2 瓶（500 mL/瓶，大連中食國實檢測技術(shù)有限公司）；超純水；氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（cNaOH）=0.102 4 mol/L；硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（cAgNO3）=0.100 4 mol/L；混合磷酸鹽和硼砂（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；鉻酸鉀溶液（50 g/L）。

1.2 儀器與設(shè)備

臺面式pH/ISE 測試儀（奧利龍ORION，美國熱電），帶溫度檢測電極，pH 電極；磁力攪拌器；1.00 mL 和2.00 mL 刻度移液管；Milli-Q 純水儀（美國millipore）。

1.3 實驗方法

按照《醬油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分析方法》（GB/T 5009.39—2003）中4.3[食鹽（以氯化鈉計）]和4.4（總酸）標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定方法檢測醬油中的氯化鈉和總酸含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 能力驗證原檢測結(jié)果

實驗室完成能力驗證檢測，上報結(jié)果后收到的反饋為總酸樣品編號166、178 的Z 比分?jǐn)?shù)為18.41、9.85；氯化鈉樣品編號166、178 的Z 比分?jǐn)?shù)為0.50、6.30。實驗室對樣品2 個項目的測定值除氯化鈉項目中樣品編號166 這1 項滿意外，都與指定值有顯著差異，結(jié)果都不滿意。

2.2 原因分析

質(zhì)量管理與實驗人員分析發(fā)現(xiàn)能力驗證檢測結(jié)果不滿意的原因有以下幾點。①常年未開展這兩個檢測項目，對酸度計關(guān)鍵部件pH 電極維護(hù)不規(guī)范，飽和氯化鉀溶液已干枯未進(jìn)行復(fù)活活化。②酸度計用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)的校準(zhǔn)曲線不理想。③氯化鈉滴定終點判斷有顏色干擾，掌握不準(zhǔn)確。④樣品稀釋度、總酸的空白測定、氯化鈉錐形瓶背景以及顏色參考溶液等條件沒有控制好。

2.3 實驗驗證

2.3.1 總酸項目

醬油中總酸含量測定方法需優(yōu)化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)如下。

（1）酸度計常用含參比電極的pH 復(fù)合電極。電極不用時要浸泡在≥3.0 mol/L 的氯化鉀溶液中，忌干枯或用蒸餾水等其他溶液浸泡[5]。由于該檢測項目常年未開展導(dǎo)致電極精度差、響應(yīng)鈍化，嚴(yán)重影響了測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，此次檢測使用新購入并適當(dāng)保存的pH 復(fù)合電極。

（2）酸度計在使用前須用標(biāo)準(zhǔn)pH 緩沖液校準(zhǔn)，因滴定終點pH=8.2 是堿性范圍，故采用pH=6.86 及pH=9.18 兩點進(jìn)行校準(zhǔn)[6]。采用新配制標(biāo)準(zhǔn)pH 緩沖液多次校準(zhǔn)得到穩(wěn)定的斜率為96.8%校準(zhǔn)曲線，在滿意范圍內(nèi)。能力驗證實驗中校準(zhǔn)斜率僅為90.1%，未確認(rèn)好電極性能是能力驗證測定結(jié)果偏高的主要原因。

（3）使用濃度為0.102 4 mol/L NaOH 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，為保障終點滴定的精度和方便數(shù)據(jù)讀取將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋5 倍；為使滴定刻度讀數(shù)精確采用1.0 mL刻度移液管；為使滴定溶液用量適中每次只取國家標(biāo)準(zhǔn)方法中要求的5 mL 樣品的40%，即2 mL 樣品稀釋后測定。能力驗證實驗中NaOH 滴定標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.101 0 mol/L，取5 mL 樣品的20%稀釋后滴定，標(biāo)準(zhǔn)溶液用量過低易過量不準(zhǔn)。

（4）純水空白測定對滴定值校準(zhǔn)。能力驗證實驗用純水瓶中雖加入了新鮮制純水，但分析發(fā)現(xiàn)此瓶所用瓶口移液器曾用于移取濃酸液，雖經(jīng)清洗但仍有殘留使純水受到污染影響了檢測結(jié)果。因此，此次測定稀釋樣品的純水不再使用此移液器。

（5）其他細(xì)節(jié)。測定不同樣品時，電極需使用純水清洗和用濾紙吸干表面，用1.00 mL 移液管滴定保證精度，臨終點用小半滴慢滴定，酸度計顯示數(shù)據(jù)穩(wěn)定再進(jìn)行讀數(shù)。

對醬油中總酸測定方法進(jìn)行優(yōu)化后取得滿意的檢測結(jié)果，見表1。

2.3.2 氯化鈉項目

樣品醬油呈黑褐色，樣品稀釋50 倍進(jìn)行測定，加入黃色鉻酸鉀指示劑后溶液為暗黃色，醬油顏色會干擾滴定終點判斷。兩個樣品能力驗證實驗測定結(jié)果只有1 個在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)說明終點顏色變化不明顯，判斷易出現(xiàn)偏差造成判讀準(zhǔn)確性和一致性不好。其優(yōu)化方法如下。

（1）醬油本身顏色干擾終點顏色變化造成判斷延遲而滴定過量為能力驗證實驗測定結(jié)果偏高的重要原因[7]。故滴定時確保光線良好并在錐形瓶底墊白紙，近終點時半滴地緩慢加入并用空白滴定終點的桔紅色調(diào)和未滴定的樣液顏色作對照，邊搖動邊觀察溶液顏色變化直至突變出現(xiàn)。此點若未控制好易造成測定數(shù)值偏大。

（2）滴定中需及時充分搖勻使AgCl 沉淀吸附的Cl-解吸出來以免桔紅色Ag2CrO4過早出現(xiàn)而誤認(rèn)終點，同時要做空白試驗加以校正[8]。稀釋用新鮮制備的純水為空白溶液，滴定終點明顯，終點是鮮亮桔紅色，消耗0.05 mL AgNO3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，空白重復(fù)測定值一致即為正常。

（3）醬油黏稠性大，移取時易黏附在管壁上，操作若不注意會造成結(jié)果偏低或誤差大[7]。故移液時采用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液槍和內(nèi)壁光滑的移液槍吸頭，樣品打入錐形瓶中的按壓次數(shù)和?？抗鼙跁r間要保持一致，保證樣品溶液進(jìn)入錐形瓶的量準(zhǔn)確相同。

（4）硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.100 4 mol/L，不再進(jìn)行稀釋并采用精度更高的2.0 mL 刻度移液管，保證滴定消耗量在適合體積范圍有利于終點判斷。

優(yōu)化測定操作方法后測定結(jié)果準(zhǔn)確性和一致性都較滿意，見表1。

表1 能力驗證樣品總酸和氯化鈉檢測結(jié)果

2.4 測量審核

為進(jìn)一步驗證操作方法的改進(jìn)效果，實驗室參加了一次測量審核，測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，通過分析測定方法的關(guān)鍵點精細(xì)化操作和改進(jìn)技術(shù)取得良好的檢測效果。

表2 醬油中總酸和氯化鈉質(zhì)控樣品測定結(jié)果

3 結(jié)論

本文通過分析實驗室參加能力驗證不滿意結(jié)果全面考察測定方法的各項技術(shù)細(xì)節(jié)。其中總酸項目的技術(shù)關(guān)鍵是pH 電極的維護(hù)、酸度計的校準(zhǔn)、標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液的稀釋度、滴定管選擇及實驗用水空白測定等；氯化鈉項目的技術(shù)關(guān)鍵是滴定終點判斷方式和參考對照溶液，此外還有樣品移取操作、標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋度選擇、滴定保障措施等關(guān)鍵點。明確并重視這些技術(shù)細(xì)節(jié)能保證各測定條件得到滿足并處于最優(yōu)，將之編寫成作業(yè)指導(dǎo)書，實驗室這兩個項目的檢測能力將能得到較好地保持和提升。因此，能力驗證對項目檢測方法關(guān)鍵環(huán)節(jié)的識別和能力維持及提高發(fā)揮了重要作用。