張建強(qiáng)，Abdramane salah zene，王江來，李佳佳，張曉夢(mèng)，吳康莉，田永強(qiáng)

(1.阿壩師范學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院，四川阿壩 624000；2.蘭州交通大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，蘭州 730070；3.甘肅省植物源生物農(nóng)藥工程技術(shù)研究中心，蘭州 730070)

0 引 言

【研究意義】芹菜(Apiumgraveolens)屬傘形科芹屬。近年來，甘肅地區(qū)芹菜種植因連年重茬，使得芹菜病害加重，尤其葉斑病發(fā)生嚴(yán)重，芹菜產(chǎn)量和品質(zhì)受到影響。芹菜葉斑病主要危害葉片，也可危害莖。芹菜葉斑病發(fā)生高峰期在7月中旬, 此時(shí)正值高溫季節(jié), 防治難度加大。 芹菜葉斑病的防治措施很多, 除了栽培抗性品種和生物防治，目前種植過程當(dāng)中主要以化學(xué)防治為主，由于引起葉斑病的病原菌不同而給田間防治帶來困難，篩選出對(duì)特定病原菌有最佳效果的藥劑對(duì)滿足生產(chǎn)需求具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】引起葉斑病的致病菌種類很多，不同病原菌對(duì)不同的藥劑敏感性存在差異，如引起芹菜葉斑病的病菌有芹菜尾孢菌(Cercosporaapii)[1]，鏈格孢(Alternariaspp.)[2]，芹菜殼針孢(Septoriaapiicola)[3]和假單胞桿菌屬(Pseudomonas)[4]。目前鏈格孢屬引起的農(nóng)作物病害的防治主要以化學(xué)農(nóng)藥為主，如申玉香等[5]研究發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑可有效防治芹菜葉斑??；馮連榮等[6]研究表明，10%的多抗霉素對(duì)鏈格孢菌(Alternariaalternata)毒力最強(qiáng)，EC50值為0.035 1 mg/mL；王媛媛等[7]研究表明，異菌脲對(duì)病菌的毒力作用最強(qiáng)，EC50值為0.36 5 mg/L，霜·錳鋅、咪鮮胺錳鹽等藥劑對(duì)玉米鏈格孢病菌也具有較好的抑制效果。金程凡[8]以10%苯醚甲環(huán)唑和40%氟硅唑?qū)κ|薹鏈格孢(A.brassicae)進(jìn)行抑制試驗(yàn)，其EC50分別為0.480 2和0.942 1 mg/L；徐太東等[9]以10%苯醚甲環(huán)唑、40%氟硅唑、50%福美雙、70%代森錳鋅對(duì)多隔鏈格孢菌進(jìn)行防治，其EC50分別為17.89、3.41、44.27、42.34 μg/mL，用50%嘧菌酯、43%戊唑醇、40%腈菌唑?qū)湘湼矜哌M(jìn)行防治，其EC50分別為3.45、21.35、5.21 μg/mL；Chang Shu等[10]用烏索酸對(duì)鏈格孢的防治具有非常好的效果?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】葉斑病對(duì)芹菜生長的危害及造成的產(chǎn)量損失，是目前芹菜種植過程當(dāng)中主要的問題之一。細(xì)極鏈格孢引起的芹菜葉斑病目前尚未有報(bào)道，在甘肅部分地區(qū)芹菜葉斑病的防治一些常見的老品種殺菌劑防治效果并不理想。研究篩選對(duì)芹菜葉斑病(病菌為：細(xì)極鏈格孢Alternariatenuissima)具有良好防治作用的藥劑?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用菌絲生長速率法和瓊脂片法分別用14種藥劑，測(cè)定細(xì)極鏈格孢菌絲和孢子萌發(fā)做室內(nèi)毒力，運(yùn)用田間試驗(yàn)篩選出對(duì)細(xì)極鏈格孢引起的葉斑病防治效果最佳的殺菌劑，為芹菜葉斑病的科學(xué)防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試病原菌

2019年9月采集甘肅省定西市栽培地典型染病芹菜葉片，經(jīng)前期分離得到致病菌為細(xì)極鏈格孢(A.tenuissima)[11]。

1.1.2 供試藥劑

50%多菌靈、43%戊唑醇、25%嘧菌酯、25%腈菌唑、30%琥膠肥酸銅、3%甲霜惡霉靈、40%嘧霉胺、66.5%霜霉威鹽酸鹽、10%苯醚甲環(huán)唑、72%霜脲錳鋅、22.5%啶氧菌酯、52.5%噁酮霜脲氰、30%氟環(huán)咪鮮胺；14種藥劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定。表1

1.1.3 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基選用PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18 g)；試驗(yàn)主要儀器為超凈工作臺(tái)、滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱等。

1.2 方 法

1.2.1 14種殺菌劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌的毒力測(cè)定

采用菌絲生長速率法[12]測(cè)定14種殺菌劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌細(xì)極鏈格孢的抑菌情況；將芹菜葉斑病病菌置于PDA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)7 d，用直徑8 mm的打孔器打取菌餅備用；將滅菌后的PDA培養(yǎng)基待冷卻到45℃時(shí)加入相應(yīng)稀釋倍數(shù)的殺菌劑的量，每種藥劑分別設(shè)置5個(gè)濃度梯度，制成系列不同濃度的平板待平板冷凝后，將菌餅接種于含不同稀釋倍數(shù)殺菌劑的PDA培養(yǎng)基中央，每處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)，以不加藥劑的PDA平板為對(duì)照，25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待空白對(duì)照長滿平板后，用十字交叉法[13]測(cè)量菌落直徑，并計(jì)算菌絲生長抑制率，抑菌率=(對(duì)照組菌落直徑-處理組菌落直徑)/對(duì)照組菌落直徑×100%。采用生物統(tǒng)計(jì)方法建立病原菌菌絲生長抑制率與藥劑濃度對(duì)數(shù)的毒力回歸方程。以殺菌劑濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)(x)，生長抑制率對(duì)應(yīng)的幾率值為縱坐標(biāo)(y)繪制毒力回歸曲線，求得毒力回歸方程y=a+bx，相關(guān)系數(shù)r，并以毒力回歸方程計(jì)算EC50。比較每種藥劑毒力的大小，評(píng)價(jià)不同殺菌劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌細(xì)極鏈格孢的抑制效果，篩選出抑制效果最好的殺菌劑[14]。

1.2.2 14種殺菌劑對(duì)細(xì)極鏈格孢孢子萌發(fā)的毒力測(cè)定

采用瓊脂培養(yǎng)法[15]，并做改進(jìn)，在潔凈無菌的載玻片上滴加含有不同濃度殺菌劑的1.5%水瓊脂培養(yǎng)基，待水瓊脂凝成薄層后，將有瓊脂培養(yǎng)基的一面朝上，平放在培養(yǎng)皿中的“U”形玻棒上，再吸取10 μL濃度為1.5×105的細(xì)極鏈格孢分生孢子懸浮液均勻涂抹在水瓊脂平面上，平板底部加浸水的濾紙片保溫培養(yǎng)，置于25℃溫度下，培養(yǎng)48 h，每個(gè)處理重復(fù)3次。并以不加殺菌劑為對(duì)照。在光學(xué)顯微鏡下觀察，每次鏡檢100個(gè)孢子，統(tǒng)計(jì)細(xì)極鏈格孢孢子萌發(fā)情況。萌發(fā)抑制率(%)=(對(duì)照萌發(fā)率-處理萌發(fā)率)/對(duì)照萌發(fā)率×100%[16]。求得毒力回歸方程y=a+bx，相關(guān)系數(shù)r，并以毒力回歸方程計(jì)算EC50。

1.2.3 田間藥效試驗(yàn)

在定西市內(nèi)官營鎮(zhèn)芹菜種植基地進(jìn)行，該種植區(qū)往年芹菜葉斑病發(fā)病較重。選擇對(duì)病原菌菌絲和孢子抑制效果最好的5種藥劑(3%甲霜惡霉靈、5%香芹酚、10%苯醚甲環(huán)唑、25%嘧菌酯、43%戊唑醇)進(jìn)行田間試驗(yàn)，藥劑噴施按照廠家說明書，清水作為對(duì)照。試驗(yàn)小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每小區(qū)重復(fù)3次，小區(qū)面積30 m2，于發(fā)病初期(6月)噴藥，共施藥3次，間隔10 d。第3次施藥后15 d調(diào)查發(fā)病情況，并計(jì)算發(fā)病率、防效。計(jì)算公式為：

發(fā)病率=發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%；

防效=(對(duì)照發(fā)病率-處理發(fā)病率)/對(duì)照發(fā)病率×100%。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel2003和DPS 7.05數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并應(yīng)用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌菌絲的抑菌效果

研究表明，不同濃度梯度對(duì)芹菜葉斑病病原菌菌絲生長均有不同程度的抑制作用，濃度與抑制率呈正相關(guān)；14種供試藥劑中抑菌作用最差的為25%嘧菌酯和50%多菌靈，最高濃度下抑菌率分別為9.9%和30.1%，其余12種藥劑均有較好的抑制效果，其中72%霜脲錳鋅抑菌效果最好，最高濃度下抑菌率為85.6%，其次為5%香芹酚，最高濃度下抑菌率為83.9%。表2

表2 不同濃度藥劑下病原菌菌絲的抑制率變化

續(xù)表2 不同濃度藥劑下病原菌菌絲的抑制率變化

2.2 14種藥劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌的室內(nèi)毒力

研究表明，抑菌率與質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)值的相關(guān)系數(shù)達(dá)顯著水平，存在線性相關(guān)。14種供試藥劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌菌絲生長抑制效果差別較大，抑制效果最好的依次為3%甲霜惡霉靈、5%香芹酚、10%苯醚甲環(huán)唑，其EC50值分別為10.8、19.9 、26.2 μg/mL；25%嘧菌酯和50%多菌靈幾乎對(duì)芹菜葉斑病病原菌無抑制效果，其EC50值均大于1 mg/L。表3

表3 不同殺菌劑下芹菜病原菌菌絲的室內(nèi)毒力變化

2.3 14種藥劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌孢子的抑菌效果

研究表明，不同濃度梯度對(duì)芹菜葉斑病病原菌孢子萌發(fā)均有不同程度的抑制作用，濃度與抑制率呈正相關(guān)；14種供試藥劑中抑菌作用最好的為50%多菌靈和43%戊唑醇，最高濃度下抑菌率分別為98%和95.5%；抑菌作用最差的為52.5%噁酮霜脲氰和30%氟環(huán)咪鮮胺，最高濃度下抑菌率分別為40.0%和37.4%。表4

表4 不同濃度藥劑下病原菌孢子的抑制率變化

續(xù)表4 不同濃度藥劑下病原菌孢子的抑制率變化

2.4 14種藥劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌孢子的室內(nèi)毒力

研究表明，抑菌率與藥劑質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)值的相關(guān)系數(shù)達(dá)顯著水平，存在線性相關(guān)。14種供試藥劑對(duì)芹菜葉斑病病原菌孢子萌發(fā)抑制效果差別較大，抑制效果最好的依次為3%甲霜惡霉靈、25%嘧菌酯、43%戊唑醇，其EC50值分別為15.7、29.5、38.7 μg/mL；其中5%香芹酚、10%苯醚甲環(huán)唑、30%氟環(huán)咪鮮等也有較好的抑制效果，66.5%霜霉威鹽酸鹽幾乎對(duì)病原菌孢子無抑制效果，其EC50值均大于1 mg/L。表5

表5 不同殺菌劑下芹菜病原菌孢子的室內(nèi)毒力變化

2.5 田間防效

研究表明，5種供試藥劑對(duì)芹菜葉斑病均具一定防效，但是其防治效果差異明顯，其中，3%甲霜惡霉靈水劑250 g/667m2處理的防效最高，為96.3%；其次是5%香芹酚水劑100 mL/667m2處理和10%苯醚甲環(huán)唑微乳劑80 mL/667m2處理，防效分別為83.9%和78.9%，其余2個(gè)處理防效間無顯著差異，防效顯著低于甲霜惡霉靈處理。表6

表6 5種殺菌劑下芹菜葉斑病的防效

3 討 論

蔬菜鏈格孢葉斑病病原菌多樣性研究表明[17]，全國14個(gè)省份蔬菜主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)，鏈格孢屬的8個(gè)種能夠侵染包括茄科、葫蘆科、十字花科和百合科的32種寄主，具有非常廣泛的寄主。

近年來，芹菜在甘肅種植地區(qū)分布范圍較廣、規(guī)模較大、播種重茬多，再加上大棚的高溫高濕環(huán)境，發(fā)病率也有所上升，導(dǎo)致芹菜的產(chǎn)量與品質(zhì)受到了嚴(yán)重的影響。在芹菜種植中對(duì)葉斑病的防治目前主要以化學(xué)農(nóng)藥為主，但對(duì)細(xì)極鏈格孢引起的葉斑病防治未有報(bào)道，目前僅有張錚等[18]對(duì)三葉木通葉斑病病原菌細(xì)極鏈格孢進(jìn)行過研究，藥劑篩選表明戊唑醇對(duì)該病原菌菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制力最強(qiáng)。申玉香等[5]藥劑篩選表明苯醚甲環(huán)唑可有效防治芹菜葉斑病，防效隨著用量的增加而提高，但是未能說明引起葉斑病的具體病菌。

4 結(jié) 論

14種殺菌劑中對(duì)病原菌菌絲抑制效果最好的分別為3%甲霜惡霉靈、5%香芹酚、10%苯醚甲環(huán)唑、其EC50分別為10.8、19.9、26.2 μg/mL。對(duì)孢子萌發(fā)抑制效果最好的分別為3%甲霜惡霉靈、25%嘧菌酯、43%戊唑醇，其EC50分別為15.7、29.5、38.7 μg/mL。只有3%甲霜惡霉靈對(duì)菌絲和孢子同時(shí)具有最佳的防治效果，不僅能抑制菌絲的生長還能抑制孢子進(jìn)一步對(duì)植物的擴(kuò)大侵染。3%甲霜惡霉靈田間防治效果最佳，防效高達(dá)96.3%。