李金州

(蘇州華測安評技術(shù)服務(wù)有限公司，江蘇 蘇州，215000)

2007年農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所出版的《農(nóng)藥登記殘留田間試驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》，為國內(nèi)開展農(nóng)藥殘留田間試驗的主要標(biāo)準(zhǔn)。到2014年，在農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所的推動下，國內(nèi)農(nóng)藥殘留田間試驗的良好實驗室規(guī)范(GLP)才得以真正開展，這對于規(guī)范農(nóng)藥登記殘留田間試驗起到了至關(guān)重要的作用。

筆者通過近幾年農(nóng)藥殘留田間試驗的實踐和觀察，對農(nóng)藥殘留田間試驗提出一些個人看法，以期為國內(nèi)農(nóng)藥殘留田間試驗提供一些技術(shù)參考。

1 對試驗單位人員的要求

試驗單位所有人員應(yīng)為簽訂勞動合同的長期工作人員，并應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力。試驗單位所有人員不能同時在兩家及以上農(nóng)藥登記試驗認(rèn)定單位任職。各單位所承擔(dān)的試驗項目應(yīng)與人員數(shù)量匹配，當(dāng)出現(xiàn)人員較少或其他特殊情形時，人員可以兼職，一般只能兼職1項，但關(guān)鍵崗位不能相互兼職，QA不能參加自己負(fù)責(zé)審核的項目。農(nóng)藥登記試驗認(rèn)定單位關(guān)鍵崗位指機構(gòu)負(fù)責(zé)人、質(zhì)量保證部門負(fù)責(zé)人(含質(zhì)量保證部門人員)、試驗項目負(fù)責(zé)人、檔案管理員、樣品管理員。

2 主計劃表

試驗主計劃表反映了試驗的進(jìn)展情況、工作量以及時間安排等信息總匯，用于統(tǒng)籌安排下一步的試驗內(nèi)容和計劃，需要記錄試驗當(dāng)前進(jìn)展、被試物、專題編號、樣品編號、委托方信息、試驗類型、施藥日期、采樣日期、試驗項目啟動和完成日期、試驗項目負(fù)責(zé)人、注意事項等，該表用于指導(dǎo)農(nóng)藥殘留試驗的開展情況。

3 試驗點的選擇

試驗點的選擇對于試驗的合理性有著重要的作用；試驗點的選擇需要結(jié)合《農(nóng)藥登記殘留試驗區(qū)域指南》、優(yōu)先安排在作物主產(chǎn)區(qū)，綜合考慮作物的種植方式、品種、土壤類型、栽培方式、生態(tài)和氣候等條件的差異對農(nóng)藥殘留的影響；對于多個省(區(qū)、市)種植的作物，應(yīng)在不同生態(tài)類型的省(區(qū)、市)開展試驗；特色小宗作物只在1～2個省(區(qū)、市)局部種植的作物，可以在同一省(區(qū)、市)的不同區(qū)域開展試驗。另外，有一些作物的種植區(qū)域比較集中，如陜西蘋果、江西柑橘、四川洋蔥種植面積較大；農(nóng)藥殘留試驗的登記單位也比較集中，3區(qū)、4區(qū)、5區(qū)農(nóng)藥殘留登記的單位較多，而2區(qū)、7區(qū)、8區(qū)相對單位較少，如陜西、新疆、江西、四川、福建目前沒有農(nóng)藥殘留登記單位。因此，選擇試驗點時要特別注意試驗點之間的距離，比如蘋果、春大豆、柑橘種植區(qū)域比較集中，要確保相同的耕作方式下試驗點距離應(yīng)在200km以上，盡量做到分布均勻合理。對于栽培方式，需要設(shè)施栽培半數(shù)的作物包括韭菜、菠菜、普通白菜、芹菜、番茄、辣椒、茄子、黃瓜、西葫蘆；需要全部設(shè)施栽培的作物有草莓。

表1 距離不足200km的部分試驗點

4 試驗時間的要求

了解當(dāng)?shù)刈魑锏姆N植時間、栽培方式、生育期、防治對象的發(fā)生規(guī)律，并以此為依據(jù)，確定適宜的施藥日期和樣品采集日期。由于目前的農(nóng)藥登記政策中并未強調(diào)農(nóng)作物殘留試驗的完成時限，很多公司根據(jù)委托方要求在1年之內(nèi)完成試驗，為趕進(jìn)度而不按照農(nóng)作物生長規(guī)律，脫離生產(chǎn)實際，盲目的進(jìn)行農(nóng)藥登記試驗，違背了農(nóng)作物殘留試驗的基本原則，所獲得的實驗數(shù)據(jù)不應(yīng)該被認(rèn)可。

5 試驗作物的要求

5.1 試驗作物的品種要求 對于試驗作物，要求以主栽品種為主，并說明具體的作物類型，比如普通玉米、鮮食玉米、秈稻、粳稻、雜交稻等；筆者經(jīng)常遇到除草劑的農(nóng)藥登記，委托方未說明是普通玉米還是鮮食玉米，而很多除草劑在甜玉米、糯玉米上存在明顯的藥害，而且影響作物的生長，對于農(nóng)藥殘留試驗的準(zhǔn)確性是有影響的，這樣登記的農(nóng)藥對農(nóng)戶是不負(fù)責(zé)的。目前，缺少作物品種和殘留量關(guān)系的研究，比如普通玉米和鮮食玉米，秈稻、粳稻、雜交稻等殘留量的差異。

5.2 需要做反轉(zhuǎn)試驗的作物 對于成熟期比較短，需要一次性收獲的作物，如玉米、小麥、水稻、油菜，后期施藥需要做反轉(zhuǎn)試驗。以玉米后期施藥的殺蟲劑為例，消解+終殘試驗一般需要設(shè)計11個小區(qū)，其中5個小區(qū)采集鮮食玉米和青秸稈，5個小區(qū)采集玉米籽粒和秸稈，1個小區(qū)作為對照；當(dāng)采收間隔期相近時，適當(dāng)可以減少小區(qū)數(shù)目。

5.3 需要做標(biāo)記的作物 如果研究農(nóng)藥的消解動態(tài)規(guī)律，而且施藥時果實已經(jīng)形成，需要對施藥的果實做標(biāo)記，如黃瓜、葡萄、番茄、豇豆、蘑菇、草莓、獼猴桃等。

5.4 施藥時需要處理的作物 對于西瓜，需要扒開葉片進(jìn)行施藥。

6 施藥的注意事項

6.1 小區(qū)的設(shè)置和規(guī)劃圖 試驗小區(qū)的布置需要考慮風(fēng)向、水流方向、施藥次數(shù)等，并按照用藥量由低到高的順序排列，避免施藥的漂移而造成小區(qū)之間交叉污染，小區(qū)不能隨機排列；同時，澆水時不能串灌。試驗必須設(shè)對照小區(qū)，并與處理區(qū)設(shè)置有效的隔離帶，避免漂移、揮發(fā)和淋溶污染。在畫小區(qū)規(guī)劃圖時，需要提供試驗地點的經(jīng)緯度，附近的永久性標(biāo)志物(建筑或道路)，風(fēng)向、水流方向、方位，便于追蹤試驗點信息[1]。田間試驗標(biāo)簽要防水、不褪色、醒目、牢固，并注明項目名稱、專題編號、小區(qū)編號、施藥日期等信息。

對于水稻插秧前后施藥、水芹、茭白[2]、蓮藕、芡實(雞頭米)、茨菰(慈菇)、荸薺、莼菜、菱角等作物，需要小區(qū)之間做田埂，保證不同小區(qū)之間的有效隔離，避免處理和對照的相互污染。

6.2 噴霧器和步數(shù)的校準(zhǔn) 對于使用的噴霧器，首先要對噴霧器進(jìn)行校準(zhǔn)，保證小區(qū)內(nèi)施藥霧滴的均勻性和噴霧器的壓力恒定，而且試驗小區(qū)只能噴藥1遍。在施藥時，我們經(jīng)常會遇到以下問題：

第一，小區(qū)藥液量不夠，導(dǎo)致無法完成小區(qū)面積的施藥；

第二，噴霧器剩余一部分無效體積的藥液，無法完全施入小區(qū)；

第三，噴霧器中的剩余藥液量變少，噴霧器壓力變小，有藥液滴出，導(dǎo)致小區(qū)局部濃度偏高而引起噴霧不均勻。對于這些問題，需要保證藥液量必須富余，一般而言，供試品和用水量同比增加1.1倍或1.2倍，保證藥液富余，以便于解決上述的施藥問題[3]。

對于步數(shù)的校準(zhǔn)，需要先把小區(qū)進(jìn)行規(guī)劃，計算每小區(qū)的施藥時間、行走的次數(shù)、單程施藥的時間，盡量做到均勻施藥。

6.3 施藥方法 包括噴霧法、瓶甩法、甩施法、藥土法、撒施法、溝施法、穴施法、灌根、種子處理和包衣等。

6.4 施藥次數(shù) 土壤處理劑、種子處理劑 (拌種劑) 、除草劑或部分植物生長調(diào)節(jié)劑等，只施藥1次。

6.5 用水量(或用土量) 根據(jù)作物大小、施藥方式等確定用水量(或用土量)，如果增加用水量，則用水量和用藥量需要同比增加，確保藥液濃度不變。一些公司沒有規(guī)定用水量，這樣是不規(guī)范的。

6.6 施藥時間和生產(chǎn)實際的關(guān)系 施藥時間根據(jù)作物生長期、試驗需要來推算，施藥時間不強求與實際防治的施藥時期相一致。另外，對于需要用樣品采收時間反推施藥時間的試驗，需要了解作物的正常成熟時間，如黃淮海和東北的玉米，黃淮海夏玉米一般在每年的9月底至10月初收獲，而東北春玉米正常采收是10月上中旬，但有的農(nóng)戶為了等市場價抬高，東北春玉米可以推遲到12月份采收，根據(jù)這個收獲時間反推的施藥日期，所測定的農(nóng)藥殘留量肯定不是實際的情況。

目前尚缺少作物播種時間和殘留量的關(guān)系研究，比如水稻分為單季稻和雙季稻，黑龍江、遼寧、吉林、江蘇為單季稻，而廣東、廣西為雙季稻，對于雙季稻種植區(qū)域，選擇哪一個季節(jié)的水稻農(nóng)藥殘留量更高哪？這是我們需要研究的地方。

6.7 施藥的照片和要求 施藥過程要及時拍照，記錄儀器校準(zhǔn)過程、施藥過程、作物的整體和局部生長狀況。

6.8 施藥時作物的生長狀態(tài)和BBCH 使用統(tǒng)一規(guī)范的施藥時作物生長狀態(tài)和BBCH，對于準(zhǔn)確確定施藥時間顯著至關(guān)重要。目前有2001年Uwe Meier發(fā)布的第二版《Growth stages of mono-and dicotyledonous plants BBCH Monograph》[4]，該標(biāo)準(zhǔn)包含了通用作物和其他大部分農(nóng)作物。如果該標(biāo)準(zhǔn)沒有登記作物，可采用通用作物(如煙草)或類似作物。另外，煙草也可以參考2019年國際煙草科學(xué)研究合作中心(https：//www.coresta.org/)發(fā)布的《A Scale For Coding Growth Stages in Tobacco Crops》[5]標(biāo)準(zhǔn)。

6.9 施藥的有效性 施藥的有效性是評價施藥成功的關(guān)鍵，具體包括噴霧器是否異常、噴霧器流速和行走速度的校準(zhǔn)、施藥時行走速度和施藥時間是否控制好、施藥時環(huán)境條件是否符合施藥要求(風(fēng)速﹤3m/s、溫度﹤40℃)、剩余藥液量是否控制在誤差允許范圍(﹤10%)之內(nèi)、藥液是否正常施于小區(qū)(藥液有無翻倒)、施藥后有無災(zāi)害性天氣、施藥前后2h有無降雨、小區(qū)施藥前后有無灌溉、小區(qū)有無使用其他影響試驗的農(nóng)藥等。

7 樣品的采收和制備

7.1 采收間隔期的設(shè)置 采收間隔期是與殘留量相關(guān)性最顯著的因素，是制定PHI的重要依據(jù)，需要根據(jù)農(nóng)作物病、蟲、草害防治的實際情況以及農(nóng)產(chǎn)品采收適期設(shè)置采收間隔期。對于特定生長期施用的農(nóng)藥，如苗期除草劑、種子包衣劑等，施藥到收獲的間隔即采收間隔期。對于要求標(biāo)注安全間隔期的農(nóng)藥，一般設(shè)2個采收間隔期測定最終殘留量。當(dāng)作物可食用部位形成后施用的農(nóng)藥，應(yīng)進(jìn)行殘留消解試驗，以研究農(nóng)藥在農(nóng)作物的殘留量變化規(guī)律；不推薦安全間隔期的不需要進(jìn)行消解試驗(種子處理劑、除草劑等作物生長前期使用)。除最終殘留試驗設(shè)置的采收間隔期外，消解試驗應(yīng)在推薦的安全間隔期前后至少再設(shè)3個采樣時間點，對于消解較快的農(nóng)藥，采收間隔期時間應(yīng)以小時計；對于生長期較短、鮮嫩時采摘的作物，如葉菜類蔬菜、黃瓜、番茄、豇豆、草莓、茶葉等，可以設(shè)置0d(2h)、1d、3d、5d、7d、10d、14d；對于生長期較長的作物，如蘋果、柑橘、棉花、糧食作物，可以設(shè)置0d(2h)、7d、14d、21d、28d、30d、40d。

7.2 樣品的采收、制備、保存和運輸 樣品的采收要有照片記錄作物的整體和局部生長狀況，并記錄相應(yīng)的采樣生長狀態(tài)和BBCH。在所選的采樣點上有選擇地采樣，應(yīng)避免采有病蟲害、過小或未成熟的樣品。采集果樹樣品時，需在植株各部位(上、下、內(nèi)、外、向陽和背陰面)采樣[6]，果實密集的部位相對多采，果實稀少的部位少采樣。同時避免在地頭或邊沿采樣(留0.5m邊緣)，按規(guī)定采集所有可食用部分，注意盡可能符合農(nóng)產(chǎn)品采收實際要求。樣品的采集和制備順序相同，按照對照小區(qū)、采收間隔期長的小區(qū)、采收間隔短的順序完成，避免造成樣品污染，并戴一次性手套，每采集一個處理的樣品后，應(yīng)更換一次手套，防止樣品間污染。一旦在對照小區(qū)的作物中檢出目標(biāo)化合物，則本試驗點的所有數(shù)據(jù)均不能使用。

對于樣品的保存，原始記錄需要體現(xiàn)存放地點，冰箱或冷庫的編號與溫度記錄，便于追溯樣品保存情況。

對于樣品的運輸，消解動態(tài)試驗的樣品要在4h內(nèi)運到實驗室，超過4h樣品應(yīng)放在有冰袋的保溫桶內(nèi)運送。發(fā)貨時，盡量采取冷鏈運輸?shù)姆绞?如沒有冷鏈運輸，盡量多放置冰塊)，并向委托方提供樣品清單、運輸日期、快遞單號以及樣品接收回執(zhí)，樣品標(biāo)簽最好是防水的，避免運輸過程中冰塊融化導(dǎo)致標(biāo)簽?zāi)：?，同時樣品標(biāo)簽要注明公司名稱、專題編號、供試品名稱、試驗地點、作物和相應(yīng)的基質(zhì)、樣品類型、室內(nèi)編號、采收間隔期，室內(nèi)編號盡量按照主包方公司的方案執(zhí)行。

7.3 基質(zhì)的注意事項 需要測定鮮樣和干樣的作物[7]：黃花菜、茶、啤酒花、菊花、玫瑰花、葉類調(diào)味料(芫荽、薄荷、羅勒、紫蘇)、根莖類藥用作物(人參、三七、天麻、甘草、半夏、白術(shù)、麥冬)、花及果實類藥用作物(金銀花)、煙草。

需要測定多種基質(zhì)的作物[8]：玉米(鮮食玉米、青秸稈、玉米籽粒、秸稈)、大蒜(蒜苗、蒜薹、蒜頭)、大豆(青秸稈、青豆帶莢、秸稈、大豆籽粒)、蓮藕(蓮葉、蓮子、蓮藕)、香蕉(全果和果肉)、柑橘(全果和果肉)。

需要測定含水量的作物：玉米秸稈、小麥秸稈、水稻秸稈、櫻桃果肉、大豆秸稈、花生秸稈。

需要測定比重的作物：稻類(稻谷中糙米和稻殼)、水果類(測定果肉和籽粒，果肉和果核，如仁果類的山楂，核果類的桃、棗、油桃、杏、枇杷、李子、櫻桃，楊梅，小型果的荔枝、龍眼、黃皮、紅毛丹，中型果的芒果、鱷梨、石榴、番荔枝、西榴蓮、山竹，大型果椰子，帶刺果的菠蘿蜜、榴蓮)。

8 特殊事故和偏離現(xiàn)象

田間試驗過程中，如遇到天氣和人為的影響，如暴雨、倒伏、試驗材料被偷等特殊事故，要及時記錄，并和委托方溝通，討論是否重新開展試驗。

如遇到同一個小區(qū)第2次施藥降雨，藥液翻倒等導(dǎo)致田間試驗的偏離現(xiàn)象，要及時記錄偏離的原因、結(jié)果、補救措施等，并由懸浮種衣劑評估上述偏離現(xiàn)象對試驗項目的影響和補救措施，保證試驗的完整性和準(zhǔn)確性。

9 前景展望

隨著轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的科研投入，其農(nóng)藥殘留試驗需要提前布局，這就需要我們考慮是否有開展轉(zhuǎn)基因試驗的單位資質(zhì)、農(nóng)業(yè)部門的報備審批、試驗地塊的選擇要和大田作物有相對的隔離帶、殘留試驗樣品的焚燒處理、樣品追蹤機制、是否配備有焚燒爐等設(shè)備，并保證轉(zhuǎn)基因玉米和大豆不能隨便流入市場。但是，目前很多農(nóng)藥殘留單位沒有轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的資質(zhì)，這就勢必造成轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的農(nóng)藥登記審批的延后。如果農(nóng)藥殘留單位和有資質(zhì)的轉(zhuǎn)基因玉米和大豆單位合作，勢必增加成本，比如土地租用、樣品處理、農(nóng)業(yè)部門的報備審批等。因此，筆者建議先在一些農(nóng)業(yè)院校開展轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的農(nóng)藥登記，隨后在慢慢普及到各個公司，這樣有利于保證試驗材料不會隨意流入市場，同時確保我國的轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的農(nóng)藥登記不至于延后。