劉志歡,孫恒昌,黃建華（中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院,廣東 廣州 510630）

華支睪吸蟲(chóng)病（Clonorchiasis）又稱(chēng)肝吸蟲(chóng)病，是華支睪吸蟲(chóng)（Clonorchis sinensis）成蟲(chóng)寄生在人體肝膽管，成蟲(chóng)堵塞膽管及代謝產(chǎn)物、分泌物等刺激膽管產(chǎn)生炎癥，又迫使肝臟出現(xiàn)脂肪變性、萎縮壞死等現(xiàn)象的一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲(chóng)病。主要流行于我國(guó)廣東、廣西、黑龍江、吉林等省份（自治區(qū)）[1]，其中廣東省是我國(guó)發(fā)現(xiàn)最早、感染最嚴(yán)重的省份，感染率達(dá)5.56%；順德區(qū)、番禺區(qū)、勒流區(qū)居民感染率更是達(dá)到了18.52%、22.30%、39.98%，為高流行區(qū)[2-3]。生食淡水魚(yú)行為是華支睪吸蟲(chóng)病感染的主要途徑；居民的喜食淡水魚(yú)生習(xí)慣、生熟砧板混用等不良衛(wèi)生行為使得大眾感染率持續(xù)上升[3]。由于華支睪吸蟲(chóng)病前中期感染臨床癥狀不突出，容易與其他胃腸疾病或肝炎混淆，常常出現(xiàn)因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)不及時(shí)，而錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)的狀況。糞便顯微鏡檢查蟲(chóng)卵是診斷華支睪吸蟲(chóng)的金標(biāo)準(zhǔn)。目前，改良加藤厚涂片法是臨床運(yùn)用的主要方法之一，但是該方法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，檢測(cè)結(jié)果受檢驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)技術(shù)的影響等，難以滿(mǎn)足臨床快速檢測(cè)的需求。因而，探索糞便華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵快速檢測(cè)技術(shù)具有重要意義。全自動(dòng)糞便分析儀能自動(dòng)識(shí)別糞便中的蟲(chóng)卵，具有簡(jiǎn)便快速、便于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，但是常規(guī)儀器檢測(cè)模式下容易造成蟲(chóng)卵漏檢。本文通過(guò)改變?nèi)詣?dòng)糞便分析儀的參數(shù)等提高儀器法華支睪吸蟲(chóng)的檢出率，并與傳統(tǒng)方法的檢測(cè)效果相比較，具體報(bào)告如下。

1 一般資料與方法

1.1 選取2020年5月-2020年9月中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科華支睪吸蟲(chóng)感染的門(mén)診和住院患者糞便標(biāo)本137例，每份糞便量5-10g。分別應(yīng)用改良加藤厚涂片法（Kato-Katz）和全自動(dòng)糞便分析儀（KU-F20，珠海科域股份有限公司）進(jìn)行華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)步驟 改良加藤厚涂片法的檢測(cè)采用《第四版全國(guó)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》中的流程，由經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員進(jìn)行檢測(cè)，一式三份，包括基本操作方法、采樣標(biāo)準(zhǔn)、鏡檢標(biāo)準(zhǔn)和結(jié)果判讀計(jì)算。三張片全片計(jì)算華支睪吸蟲(chóng)總數(shù)除以3再乘100，即總數(shù)/3×100個(gè)/g為每克糞便華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵數(shù)。

改良全自動(dòng)糞便分析儀肝吸蟲(chóng)卵檢測(cè)法流程，包括基本操作方法、采樣標(biāo)準(zhǔn)、鏡檢標(biāo)準(zhǔn)和結(jié)果判讀計(jì)算。按儀器KU-F20糞便分析儀糞便采集流程收集標(biāo)本，一式兩份；對(duì)儀器拍攝參數(shù)進(jìn)行以下設(shè)置，儀器拍照參數(shù)設(shè)置A組（10倍鏡拍攝）：共20組，B組（40倍鏡拍攝）：共24組；每組拍4個(gè)視野，每個(gè)視野有4張圖片，共176個(gè)視野，704張圖片/標(biāo)本。設(shè)置儀器鏡檢完成自動(dòng)識(shí)別所拍攝圖片中的華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵，人工對(duì)儀器識(shí)別的蟲(chóng)卵進(jìn)行二次判讀確認(rèn)。

1.3 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析 本研究用改良加藤厚涂片（Kato-Katz）法作為標(biāo)準(zhǔn)法，分析改良糞便分析儀華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵檢測(cè)法的檢測(cè)效力，主要包括以下評(píng)價(jià)指標(biāo)：靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等，糞便華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵檢測(cè)靈敏度特異性的差異（P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。Kappa檢驗(yàn)評(píng)價(jià)兩種方法的一致性，Kappa值＜0：一致性極差；0-0.2：微弱；＞0.2-0.4：弱；＞0.4-0.6：中度；＞0.6-0.8：高度；＞0.8-1.0：極強(qiáng)。

2 結(jié)果

2.1 改良加藤法華支睪吸蟲(chóng)檢測(cè)結(jié)果137例標(biāo)本中陽(yáng)性69例，陽(yáng)性率50.36%；改良糞便分析儀法華支睪吸蟲(chóng)檢測(cè)結(jié)果137例標(biāo)本中陽(yáng)性73例，陽(yáng)性率53.28%。兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較見(jiàn)表1。

表1 改良加藤法與改良全自動(dòng)糞便分析儀檢測(cè)糞便中華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵的檢測(cè)結(jié)果

以加藤法為標(biāo)準(zhǔn)方法，全自動(dòng)糞便分析儀法檢測(cè)華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵的敏感性為86.96%，特異性為80.88%。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值75.95%，陰性預(yù)測(cè)值85.93%。兩種方法符合率為83.9%，一致性檢驗(yàn)顯示儀器法的檢測(cè)結(jié)果與加藤法高度一致。

3 討論

目前用于診斷華支睪吸蟲(chóng)病的方法主要有病原學(xué)診斷方法、免疫學(xué)診斷方法、分子生物學(xué)診斷方法。免疫學(xué)診斷方法中主要是ELISA和免疫膠體金技術(shù)，但其敏感性和特異性不高，使用改良加藤厚涂片法與ELISA聯(lián)合檢測(cè)，檢出率更高；分子生物診斷方法主要是PCR法，前景比較好，但是現(xiàn)階段技術(shù)要求上尚未達(dá)到比較理想水平，且分子生物學(xué)和免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)對(duì)儀器設(shè)備、人員素質(zhì)等要求較高，不適合基層檢測(cè)機(jī)構(gòu)推廣使用[4-8]。改良加藤厚涂片法，是現(xiàn)在各臨床實(shí)驗(yàn)室主要應(yīng)用的檢測(cè)方法，但是該方法處理復(fù)雜，操作步驟多、耗時(shí)長(zhǎng)、氣味難聞，生物安全性較低，且臨床結(jié)果報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)，往往難以滿(mǎn)足臨床快速檢測(cè)的需求。因此，探索糞便華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的快速檢測(cè)方案具有重要的臨床意義。

全自動(dòng)糞便分析儀在進(jìn)行糞便常規(guī)檢測(cè)的時(shí)候，標(biāo)本為全封閉狀態(tài)下，多點(diǎn)抓取，通過(guò)對(duì)糞便樣本進(jìn)行稀釋、過(guò)濾大的殘?jiān)笸科?。在顯微鏡下，利用顯微攝像技術(shù)采集糞便涂片的多個(gè)視野圖像，繼而將圖片中識(shí)別的特征性物質(zhì)與儀器數(shù)據(jù)圖片庫(kù)中細(xì)胞、脂肪球、寄生蟲(chóng)卵等的形態(tài)進(jìn)行比對(duì)，從而實(shí)現(xiàn)糞便中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、脂肪球、蟲(chóng)卵等的識(shí)別檢測(cè)。已有研究對(duì)比了人工鏡檢和全自動(dòng)糞便分析儀對(duì)寄生蟲(chóng)的檢測(cè)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)糞便分析儀檢測(cè)寄生蟲(chóng)與人工鏡檢的結(jié)果一致性達(dá)到98.9%[9]。但是筆者發(fā)現(xiàn)KU-F20全自動(dòng)糞便分析儀器推薦的糞便常規(guī)檢測(cè)拍攝視野和每個(gè)視野拍攝數(shù)量較少，因此可能導(dǎo)致肝吸蟲(chóng)卵的漏檢。筆者推測(cè)儀器拍攝的視野數(shù)量和每個(gè)視野拍攝的圖片數(shù)量越多，糞便中蟲(chóng)卵被檢測(cè)出的幾率越高，敏感性也就越高，因此對(duì)拍攝參數(shù)進(jìn)行改進(jìn)也許能提升華支睪吸蟲(chóng)的檢測(cè)率。

本文通過(guò)調(diào)整設(shè)置KU-F20全自動(dòng)糞便分析儀的糞便沉渣拍攝參數(shù)，即增加每份糞便樣本中的拍攝視野和每個(gè)視野拍攝數(shù)量，并且同一份糞便標(biāo)本重復(fù)兩次進(jìn)行檢測(cè)。改良后的儀器法檢測(cè)肝吸蟲(chóng)的敏感性和特異性分別達(dá)到86.96%和 80.88%。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值75.95%，陰性預(yù)測(cè)值85.93%。且一致性分析顯示，全自動(dòng)糞便分析儀法與加藤法結(jié)果高度一致。此外，儀器檢測(cè)法極大縮短了糞便肝吸蟲(chóng)檢測(cè)的報(bào)告時(shí)間，提高了檢測(cè)效率。且自動(dòng)化程度高，檢測(cè)過(guò)程為全封閉狀態(tài)下進(jìn)行，自動(dòng)化程度和生物安全性高，減少人為誤差。

傳統(tǒng)形態(tài)的顯微鏡觀察在檢驗(yàn)過(guò)程中仍屬于金標(biāo)準(zhǔn)，但是單一的顯微鏡觀察容易使檢驗(yàn)人員產(chǎn)生視覺(jué)疲勞，影響結(jié)果判讀，甚至容易產(chǎn)生漏檢，儀器法有望在一定程度上代替這一單一的鏡檢工作；其次儀器法的檢驗(yàn)圖片可以保留，圖片的保留不僅便于教學(xué)[10]，也有利于在醫(yī)生或患者對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果有疑問(wèn)時(shí)，作為檢驗(yàn)結(jié)果的可靠證據(jù)。所以在不影響檢驗(yàn)結(jié)果甚至在準(zhǔn)確性能更優(yōu)的情況下，用儀器法代替人工計(jì)數(shù)，使得檢驗(yàn)人員能更好地對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，完成更多的臨床檢驗(yàn)任務(wù)及教學(xué)任務(wù)，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。