李青，丁振宇，魏于全（四川大學(xué)華西醫(yī)院 生物治療國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，腫瘤中心 生物治療科，四川 成都 610041）

T細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成成分之一，被認(rèn)為是殺傷腫瘤細(xì)胞的主要效應(yīng)細(xì)胞。因此，將腫瘤患者自身的T 細(xì)胞經(jīng)體外激活、擴(kuò)增或修飾后，再回輸至患者體內(nèi)治療腫瘤的過繼性細(xì)胞輸注（adoptive cell transfer,ACT）療法已得到了廣泛的關(guān)注和深入研究[1]。決定T細(xì)胞ACT治療是否能產(chǎn)生顯著抗腫瘤效果的一個關(guān)鍵因素是輸注的T 細(xì)胞能否“精準(zhǔn)”識別腫瘤。通過T 細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）基因修飾T（TCR-T）細(xì)胞或嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）基因修飾T（CAR-T）細(xì)胞可使T 細(xì)胞獲得腫瘤特異靶向性，是目前腫瘤免疫治療研究領(lǐng)域的前沿和熱點(diǎn)之一。然而，由于實(shí)體腫瘤缺乏高表達(dá)的共享抗原，基于TCR或CAR 的“現(xiàn)成的活體藥物”在實(shí)體腫瘤中的應(yīng)用受到限制[2]。近年來，腫瘤新抗原（neoantigen）掀開了精準(zhǔn)免疫治療的新篇章。篩選或設(shè)計(jì)新抗原特異性T細(xì)胞進(jìn)行ACT治療是目前基于新抗原個體化免疫治療的重要研究方向之一，并已在部分實(shí)體腫瘤治療中取得成功，展現(xiàn)了良好的應(yīng)用前景[3-7]。然而，機(jī)遇與挑戰(zhàn)并存，新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療作為一種新興的治療方法尚未成熟，其發(fā)展道路上還存在著諸多障礙和挑戰(zhàn)。本文基于新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療的研發(fā)策略、臨床轉(zhuǎn)化和應(yīng)用現(xiàn)狀，對新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療所面臨的困境和挑戰(zhàn)以及未來研究方向進(jìn)行分析。

1 新抗原特異性T細(xì)胞是發(fā)揮抗腫瘤作用的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞

腫瘤新抗原是指由腫瘤細(xì)胞基因組突變產(chǎn)生、能夠被加工和提呈，并進(jìn)一步引起特異性免疫應(yīng)答的突變蛋白[8]（圖1）。不同于腫瘤相關(guān)抗原（tumor associated antigen，TAA），腫瘤新抗原是在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中形成的，不表達(dá)于正常組織，是真正的腫瘤特異性抗原（tumor specific antigen，TSA）[8]。因此，腫瘤新抗原誘導(dǎo)的T 細(xì)胞免疫反應(yīng)不會受到中樞免疫耐受的影響，也不會導(dǎo)致自身免疫性疾病，具有高效的腫瘤殺傷特性和良好的安全性[9-10]。

越來越多的研究[11-16]發(fā)現(xiàn)，免疫檢查點(diǎn)抑制劑（immune checkpoint inhibitor，ICI）治療后新抗原特異性T 細(xì)胞的激活和擴(kuò)增是患者獲得臨床療效的關(guān)鍵。2013 年，VAN ROOIJ 等[11]通過對1 例伊匹單抗（ipilimumab）治療后腫瘤消退的晚期黑色素瘤患者進(jìn)行外顯子測序發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞對兩種新抗原的識別是伊匹單抗產(chǎn)生臨床療效的關(guān)鍵。2014 年發(fā)表在Nature上的一項(xiàng)研究[12]通過基因組學(xué)和生物信息學(xué)的方法也證實(shí)：腫瘤特異性突變抗原是CTLA-4 和PD-1 抗體治療中T細(xì)胞的作用靶點(diǎn)，新抗原特異性T細(xì)胞是發(fā)揮抗腫瘤作用的主要細(xì)胞。后續(xù)相關(guān)的多項(xiàng)研究[13-16]也得出了類似的結(jié)論。還有研究[17-21]發(fā)現(xiàn)，腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）過繼回輸后，新抗原特異性T 細(xì)胞在獲得長期完全緩解的患者中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，而腫瘤新抗原是TIL的主要作用靶點(diǎn)。因此，直接篩選或設(shè)計(jì)靶向腫瘤新抗原的T 細(xì)胞用于ACT 治療是理想的免疫治療方式之一，極具臨床潛力[22]。

2 新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療應(yīng)用策略

目前，基于新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療常用的策略是從TIL中鑒定出新抗原特異性T細(xì)胞，大量擴(kuò)增后回輸患者。這一方法被ROSENBERG 研究團(tuán)隊(duì)稱為“標(biāo)準(zhǔn)TIL 篩選方法”[23]（圖2）。簡而言之，對腫瘤組織與正常組織進(jìn)行全外顯子測序（whole-exome sequencing，WES），通過數(shù)據(jù)比對篩選出體細(xì)胞非同義突變，同時鑒定患者的人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）分型；對每個腫瘤樣本進(jìn)行RNA 測序，以確定突變的表達(dá)狀態(tài)；隨后通過HLA親和力評分、突變表位和相對應(yīng)的野生表位與HLA親和力對比、腫瘤變異等位基因分?jǐn)?shù)與表達(dá)水平等條件逐步過濾后，篩選出候選新抗原表位合成多肽或串聯(lián)微基因（tandem minigene，TMG）。與此同時，將獲得的腫瘤組織剪切為1～2 mm3的小碎塊，在體外用大劑量的白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）對其進(jìn)行刺激，獲得TIL。將TIL 與負(fù)載多肽或TMG 的抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cell，APC）共培養(yǎng)，通過檢測T 細(xì)胞的活化標(biāo)志物，如OX-40、4-1BB、CD107a 及IFN-γ 的表達(dá)情況篩選出新抗原特異性T細(xì)胞，在體外大量擴(kuò)增后回輸給患者。

3 新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療臨床應(yīng)用現(xiàn)狀

采用“標(biāo)準(zhǔn)TIL篩選方法”篩選出新抗原特異性T細(xì)胞后進(jìn)行ACT 治療已在多種實(shí)體腫瘤中獲得顯著療效[3-7]。2014 年，ROSENBERG 研究團(tuán)隊(duì)的TRAN 等[3]通過對1例轉(zhuǎn)移性膽管癌患者回輸特異性靶向ErbB2相互作用蛋白（ErbB2 interacting protein，ERBB2IP）的CD4+TIL，使患者腫瘤靶病灶縮小并實(shí)現(xiàn)了疾病的長期穩(wěn)定。2016年，該研究團(tuán)隊(duì)從1例轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌患者的TIL 中鑒定出靶向KRAS G12D 的CD8+T 細(xì)胞，將其擴(kuò)增、回輸患者，經(jīng)治療后患者的腫瘤消退[5]。2018年，他們從TIL中篩選出的新抗原特異性T 細(xì)胞聯(lián)合ICI 治療，使1 例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的病灶持久完全消退[7]。這些研究結(jié)果的報道，使人們認(rèn)識到新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療的巨大潛力。

目前，基于新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療的臨床試驗(yàn)正在如火如荼地開展。截至2022年3月1日，在國際臨床試驗(yàn)注冊平臺（http://www.clinicaltrials.gov）上注冊的新抗原特異性T細(xì)胞治療實(shí)體瘤相關(guān)的臨床試驗(yàn)共計(jì)16 項(xiàng)（關(guān)鍵詞：neoantigen，T cells）。其中，美國共開展了9項(xiàng)，位居首位；中國開展了5 項(xiàng)，位列第二。這些臨床研究涵蓋了常見的實(shí)體腫瘤，絕大部分是針對標(biāo)準(zhǔn)治療方案失敗的晚期腫瘤。其中有7 項(xiàng)研究在新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合使用ICI。然而這些臨床研究仍處于Ⅰ期或Ⅱ期，尚無進(jìn)入Ⅲ期的臨床研究報道。

4 新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療面臨的挑戰(zhàn)

4.1 腫瘤新抗原預(yù)測

目前，腫瘤新抗原的預(yù)測主要依賴于二代測序（next-generation sequencing，NGS）技術(shù)和生物信息學(xué)分析技術(shù)。隨著測序技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，腫瘤新抗原的預(yù)測在實(shí)踐中不斷完善，然而仍有一些問題尚未解決：（1）對于除黑色素瘤以外的大多數(shù)上皮源性腫瘤，用于測序的腫瘤標(biāo)本通常通過穿刺或切除轉(zhuǎn)移灶獲得。在穿刺或切除前，很難評估腫瘤病灶中基質(zhì)細(xì)胞、血管、壞死組織所占比例和存在部位，而這些因素都會影響用于測序的腫瘤DNA和RNA的質(zhì)量和純度，可能導(dǎo)致新抗原預(yù)測失敗。（2）對于大部分實(shí)體腫瘤患者，通常只能獲得極少的腫瘤標(biāo)本進(jìn)行新抗原的預(yù)測。由于腫瘤具有異質(zhì)性，用于新抗原預(yù)測的腫瘤標(biāo)本可能無法反映腫瘤患者完整的基因突變信息[24]。（3）目前常用的測序技術(shù)僅對單核苷酸突變的測定較為準(zhǔn)確，而對插入、缺失、剪接位點(diǎn)突變、基因融合等突變的檢測能力有限[25-26]。（4）現(xiàn)有的預(yù)測算法和模型尚不成熟，準(zhǔn)確性相對較低[27-28]，如只能預(yù)測部分HLA-Ⅰ類抗原，難以預(yù)測HLA-Ⅱ類抗原[9,29]；現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫容量不足，僅有部分HLA等位基因的親和力數(shù)據(jù)；基于HLA親和力表位預(yù)測方法無法納入肽加工、提呈等影響免疫原性的因素[9]。（5）不同的技術(shù)平臺有各自的算法，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)及大規(guī)模臨床研究的驗(yàn)證等。

4.2 新抗原特異性T細(xì)胞篩選

盡管已有大量研究致力于探索新的方法，以期從TIL[30-33]或外周血淋巴細(xì)胞（peripheral blood lymphocyte，PBL）[34-39]中篩選新抗原特異性T 細(xì)胞用于ACT治療，然而新抗原特異性T細(xì)胞的篩選仍具挑戰(zhàn)。影響新抗原特異性T 細(xì)胞篩選及ACT 治療效果的因素主要包括以下幾個方面：（1）對于除黑色素瘤以外的大多數(shù)上皮源性腫瘤，腫瘤突變負(fù)荷較低，新抗原特異性T細(xì)胞數(shù)量較少，篩選新抗原特異性T細(xì)胞難度較大[40-41]，從PBL 中篩選新抗原特異性細(xì)胞則更具挑戰(zhàn)性[35,42]。（2）由于腫瘤微環(huán)境的免疫抑制狀態(tài)，腫瘤患者體內(nèi)可自發(fā)識別新抗原的T 細(xì)胞有限，導(dǎo)致新抗原特異性T 細(xì)胞篩選困難及ACT 治療效果欠佳[43-44]。（3）由于腫瘤異質(zhì)性，某些新抗原僅在腫瘤中亞克隆表達(dá)，如未能篩選到靶向這些新抗原的T細(xì)胞，則可能導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸[45-46]?？傮w上，對于新抗原特異性T 細(xì)胞的篩選，目前尚缺乏高效、便捷的方法，也缺乏相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化體系。

4.3 新抗原特異性T細(xì)胞擴(kuò)增

由于腫瘤微環(huán)境中持續(xù)的抗原暴露與免疫抑制因素的影響，來源于TIL的新抗原特異性T細(xì)胞多是高分化或終末效應(yīng)T細(xì)胞，表達(dá)抑制性或耗竭相關(guān)的分子[47-49]。與分化程度較低的新抗原特異性T 細(xì)胞相比，這些高分化、“衰老”的新抗原特異性T 細(xì)胞過繼回輸后抗腫瘤療效有限[50-52]。另外，這些高分化的T 細(xì)胞增殖潛能受限，在體外擴(kuò)增足夠數(shù)量的T 細(xì)胞用于治療時，由于“年輕”的非腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞過度增殖，新抗原特異性T 細(xì)胞的比例會顯著下降，影響最終療效[33]。此外，擴(kuò)增的新抗原特異性T細(xì)胞在回輸患者前，通常沒有進(jìn)行充分檢測，而在最后的快速擴(kuò)增培養(yǎng)過程中，經(jīng)常出現(xiàn)新抗原特異性T細(xì)胞的丟失現(xiàn)象[53]。因此，臨床醫(yī)生并不知曉輸注的細(xì)胞中到底有多少新抗原特異性T 細(xì)胞，給新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療帶來了不確定性。

4.4 新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療生產(chǎn)周期與成本

新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療的個體化程度很高，其制備流程從腫瘤標(biāo)本采集、測序、生物信息學(xué)分析、多肽或TMG 合成、TIL 培養(yǎng)、新抗原特異性T 細(xì)胞篩選及擴(kuò)增，一般需要3～4 個月，很多晚期腫瘤患者在等待過程中可能失去治療機(jī)會。因此，招募合適的腫瘤患者接受ACT治療并進(jìn)一步縮短個體化ACT治療的新抗原特異性T 細(xì)胞制備周期是其亟待解決的問題。此外，高度個體化的新抗原特異性T 細(xì)胞ACT治療其制備成本十分高昂，對腫瘤患者家庭和國家衛(wèi)生系統(tǒng)來說都是一個巨大的挑戰(zhàn)。目前，已有數(shù)款同樣屬于個體化治療的CAR-T 細(xì)胞療法獲批上市，其定價多超過200萬元。個體化的新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療的成本遠(yuǎn)高于CAR-T 細(xì)胞療法，其市場價格將會是另一“天文數(shù)字”。漫長的制備周期和高昂的成本將會在很大程度上限制個體化新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療的臨床應(yīng)用。

5 未來研究方向

5.1 優(yōu)化新抗原預(yù)測

腫瘤新抗原預(yù)測的優(yōu)化和改進(jìn)可增加輸注T 細(xì)胞靶向腫瘤細(xì)胞的機(jī)會。作為一種依賴于NGS 和生物信息學(xué)分析，尤其是預(yù)測算法和模型的新技術(shù)，新抗原預(yù)測還有很大的進(jìn)步空間。優(yōu)化測序技術(shù)可檢測出基因融合、剪接變體、缺失、插入等突變類型，增加可靶向的新抗原數(shù)量，這對于突變負(fù)荷較低的腫瘤尤為重要[54]。在新抗原的預(yù)測算法中，整合內(nèi)源性肽的加工和提呈的影響因素有助于更精確地預(yù)測出最有可能通過MHCⅠ類分子提呈在細(xì)胞表面的新表位[9]。質(zhì)譜法（mass spectrometry，MS）的使用使得優(yōu)化新抗原的預(yù)測算法成為可能[55]。使用特定單等位基因HLA 表達(dá)細(xì)胞系提呈的肽訓(xùn)練的算法更好地整合了內(nèi)源性抗原加工和提呈過程[56-57]。通過增加訓(xùn)練的HLA等位基因的數(shù)量，還可以進(jìn)一步優(yōu)化這些基于MS的算法[58]。其他影響預(yù)測表位免疫原性的因素包括基因表達(dá)的總體模式、RNA 剪接、蛋白酶體加工等[59]。通過進(jìn)一步研究加深對這些因素的理解，對基于新抗原的療法中的免疫原性優(yōu)化非常重要，而將這些變量納入預(yù)測算法將使設(shè)計(jì)更有效的治療方法成為可能。

由于肽與HLAⅡ類分子結(jié)合的混雜程度相對較高，現(xiàn)有的預(yù)測算法多針對HLAⅠ類分子抗原[60]。然而，CD4+T細(xì)胞對于記憶性CD8+T細(xì)胞的形成必不可少[61]，且CD4+T 細(xì)胞在新抗原誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)中具有重要作用[62-65]，因此，已有大量的研究致力于開發(fā)新的工具預(yù)測HLAⅡ類抗原。自2019年以來，伴隨著新的預(yù)測算法的開發(fā)，如MAPTAC[66]、MixMHC2pred[67]以及NetMHCⅡpan 算法的更新[68]，HLAⅡ類新抗原預(yù)測取得了長足進(jìn)步。此外，組學(xué)大數(shù)據(jù)、腫瘤免疫大數(shù)據(jù)和人工智能算法的應(yīng)用，將極大地推動腫瘤新抗原預(yù)測的發(fā)展，是未來研究的重要方向。

5.2 增加新抗原特異性T細(xì)胞數(shù)量和多樣性

理論上，篩選到數(shù)量更多、種類更豐富的新抗原特異性T細(xì)胞進(jìn)行ACT治療可改善ACT治療效果。然而，目前尚缺乏通過改善新抗原特異性T細(xì)胞篩選效率來增強(qiáng)ACT 治療效果的相關(guān)研究。研究[27,69-74]顯示，新抗原疫苗或腫瘤裂解物疫苗可誘導(dǎo)新抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)，疫苗免疫后不僅能增加原有的新抗原特異性T細(xì)胞，還能誘發(fā)新的新抗原特異性T細(xì)胞（圖3）。最近，還發(fā)現(xiàn)疫苗免疫后可誘導(dǎo)表位擴(kuò)散，新抗原特異性T 細(xì)胞出現(xiàn)克隆的多樣化（圖3）[75-76]。這些臨床研究不僅展示了基于新抗原個體化免疫治療的巨大潛力，也提示了發(fā)現(xiàn)新抗原特異性T細(xì)胞篩選及ACT治療的新思路：使用新抗原疫苗或腫瘤裂解物疫苗免疫后，從外周血中篩選新抗原特異T細(xì)胞用于ACT治療。相對于新抗原疫苗，腫瘤裂解物疫苗不僅制備快速、簡便，含有更多的免疫原表位，還可促進(jìn)并確保CD4+T和CD8+T細(xì)胞的平衡激活[77]。

基于篩選新抗原特異性T 細(xì)胞所面臨的困境以及上述臨床研究結(jié)果的啟發(fā)，筆者提出了使用腫瘤裂解物疫苗免疫后從外周血中篩選新抗原特異性T細(xì)胞用于ACT治療這一研究設(shè)想（圖4）。采用上述研究設(shè)想，理論上可通過改善新抗原特異性T細(xì)胞篩選效率來增強(qiáng)ACT 治療效果：（1）預(yù)先使用腫瘤裂解物疫苗免疫，可改善患者的免疫抑制狀態(tài)，增加已有的新抗原特異性T 細(xì)胞并誘導(dǎo)新的新抗原特異性T 細(xì)胞，不僅有利于高效、便捷地篩選出新抗原特異性T細(xì)胞，還能篩選出更多的新抗原特異性T 細(xì)胞用于ACT治療，防止腫瘤免疫逃逸，提高ACT治療效果；（2）腫瘤裂解物疫苗制備簡便、快捷，預(yù)先使用疫苗免疫，患者能盡早接受疫苗治療，為后續(xù)新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療贏得時間；（3）使用腫瘤裂解物疫苗免疫后從外周血中篩選新抗原特異T 細(xì)胞用于ACT 治療這一研究策略，實(shí)質(zhì)是疫苗和ACT兩種治療方式的聯(lián)合，患者更有可能從中獲益。目前，筆者所在課題組已開展相關(guān)研究以驗(yàn)證這一研究設(shè)想，既可改善新抗原特異性T 細(xì)胞篩選效率從而進(jìn)一步提高ACT治療效果，又可最大程度為腫瘤患者縮短制備和治療周期，贏得治療先機(jī)，為后續(xù)臨床試驗(yàn)的開展奠定基礎(chǔ)。

5.3 防止新抗原特異性T細(xì)胞過度分化或死亡

篩選出新抗原特異性的T細(xì)胞后，通過鑒定新抗原特異性T 細(xì)胞的TCR，轉(zhuǎn)染患者自身的外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）進(jìn)行ACT治療，可有效改善在體外大量擴(kuò)增TIL時非腫瘤反應(yīng)性T 細(xì)胞對新抗原特異性T 細(xì)胞的影響。目前，ROSENBERG團(tuán)隊(duì)已開展相關(guān)的臨床研究進(jìn)行探索（NCT03412877）。同時，采用基因工程策略，使研究者可選擇所需的T細(xì)胞類型，避免輸入高分化或調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而影響療效。

另外，還可通過誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cell，iPSC）來產(chǎn)生分化程度較低的新抗原特異性T細(xì)胞[78-79]?！癥amanaka因子”的瞬時表達(dá)可以從新抗原特異性TIL 中產(chǎn)生iPSC 克隆，這些iPSC 克隆可以無限擴(kuò)增，也可分化為保留原始抗原特異性的未成熟T 細(xì)胞（CD3+CD4+CD8-或CD3+CD4-CD8+淋巴細(xì)胞）[2]。VIZCARDO 等[79]開發(fā)了一種新型的三維胸腺器官培養(yǎng)系統(tǒng)，能夠使iPSC 衍生的未成熟T 細(xì)胞系進(jìn)一步分化為新抗原特異性T 細(xì)胞，這些T 細(xì)胞與幼稚T 細(xì)胞有相似之處，并在小鼠腫瘤模型中顯示出良好的抗腫瘤作用。YAMAMOTO等[80]發(fā)現(xiàn)，ACT 治療時輸注的T 細(xì)胞所表達(dá)的Fas 會與腫瘤細(xì)胞表面的FasL 相互作用，介導(dǎo)T 細(xì)胞分化和凋亡，從而影響療效。他們通過利用過表達(dá)Fas突變體充當(dāng)顯性負(fù)受體（dominant negative receptor，DNR）的方式破壞Fas-FasL 相互作用，使T細(xì)胞免受破壞從而提高ACT治療效果。然而，上述兩種方法僅在臨床前研究中取得突破，尚未在臨床研究中開展。

5.4 縮短生產(chǎn)周期和降低生產(chǎn)成本

目前，新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療多在標(biāo)準(zhǔn)治療失敗的晚期腫瘤患者中開展。由于新抗原特異性T 細(xì)胞制備工藝復(fù)雜、耗時長，部分腫瘤患者在等待過程中即出現(xiàn)疾病進(jìn)展甚至死亡，失去治療機(jī)會。招募早期腫瘤患者參加基于新抗原特異性T 細(xì)胞的ACT療法或許可以改善患者預(yù)后。患者診斷明確后，即獲取腫瘤組織進(jìn)行新抗原預(yù)測及新抗原特異性T細(xì)胞/TCR 鑒定，一旦需要進(jìn)行T 細(xì)胞ACT 治療時，能夠盡快為患者制備可用的細(xì)胞產(chǎn)品。另外，由于化療、放療和ICI 的使用可能導(dǎo)致T 細(xì)胞過度分化，在腫瘤診斷初期分離自體T 細(xì)胞或TIL 可以獲得質(zhì)量高、分化程度較低的T 細(xì)胞。研究[81]表明，應(yīng)在實(shí)施ICI或其他免疫療法之前招募患者，以確保在腫瘤切除之前TCR庫不會被耗盡。

盡管驅(qū)動突變很少產(chǎn)生腫瘤新抗原，但驅(qū)動突變產(chǎn)生的腫瘤新抗原是免疫治療最理想的靶點(diǎn)[8]。因?yàn)轵?qū)動突變產(chǎn)生的新抗原在腫瘤細(xì)胞中克隆性表達(dá)，設(shè)計(jì)靶向這種新抗原的T細(xì)胞并對患者行過繼輸注，有可能實(shí)現(xiàn)完全清除腫瘤細(xì)胞，防止腫瘤免疫逃逸。KRAS G12D突變能夠產(chǎn)生與HLA*08：02以高親和力結(jié)合的抗原[82]。TRAN 等[5]從1 例轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌患者的TIL 中篩選出靶向KRAS G12D 的CD8+T 細(xì)胞，將其體外擴(kuò)增后回輸患者，發(fā)現(xiàn)患者肺部轉(zhuǎn)移病灶全部消失。研究[42]發(fā)現(xiàn)，KRAS G12D突變產(chǎn)生的新抗原并非僅出現(xiàn)在個別患者體內(nèi)，而會出現(xiàn)在不同患者體內(nèi)。因此，通過設(shè)計(jì)靶向KRAS G12D的“貨架產(chǎn)品”TCR 轉(zhuǎn)染自體T 細(xì)胞后行過繼回輸，可顯著縮短制備時間和降低成本，給KRAS G12D突變的患者提供快速有效的治療方案?？傊?，開發(fā)靶向驅(qū)動突變產(chǎn)生的新抗原T 細(xì)胞ACT 治療可能成為未來發(fā)展的一個重要方向。

5.5 探索聯(lián)合治療方式

將其他療法（如ICI、腫瘤疫苗等）與個體化新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療進(jìn)行聯(lián)合也是未來ACT治療發(fā)展的重要方向之一[2]。如前所述，來源于TIL 的新抗原特異性T 細(xì)胞大部分是“耗竭”T 細(xì)胞，這些T 細(xì)胞高表達(dá)PD-1、CTLA-4、LAG3 和TIM3 等抑制性分子[83]。ICI聯(lián)合新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療可保護(hù)輸注的T細(xì)胞免受腫瘤微環(huán)境中抑制性信號的影響。ZACHARAKIS 等[7]采用靶向腫瘤新抗原的TIL 聯(lián)合帕博利珠單抗（pembrolizumab）方案治療1例多線治療失敗的晚期乳腺癌患者，使患者獲得了長期完全緩解。在目前開展的基于新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療的16項(xiàng)臨床研究中，有7項(xiàng)研究在新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合使用ICI。

作為個體化免疫治療的另一重要研究方向，新抗原疫苗或腫瘤裂解物疫苗在部分實(shí)體腫瘤中取得顯著療效，并顯示出良好的安全性[84-85]。疫苗免疫除可增加TIL和PBL中新抗原特異性T細(xì)胞的數(shù)量和種類[27,69-74]，有利于新抗原特異性T細(xì)胞篩選，還可增強(qiáng)T細(xì)胞對腫瘤抗原的識別，避免因?yàn)樾驴乖慕徊嫣岢什患鸦蛞蚰[瘤細(xì)胞缺乏抗原加工、提呈的能力，從而導(dǎo)致輸注的T細(xì)胞無法有效識別腫瘤。理論上，將個體化腫瘤疫苗和新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療以及ICI進(jìn)行聯(lián)合是理想的治療方式，可以形象地理解聯(lián)合治療為提供了腫瘤靶標(biāo)，增多、增強(qiáng)了抗腫瘤士兵，同時阻斷了抑制信號，可使輸注的T 細(xì)胞更好地發(fā)揮抗腫瘤作用（圖5）。

6 結(jié)語

新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 治療的研發(fā)和應(yīng)用還存在諸多的挑戰(zhàn)，目前仍需有效的策略來提高新抗原預(yù)測準(zhǔn)確性、改善新抗原特異性T 細(xì)胞的篩選效率、減少輸注T細(xì)胞的耗竭及規(guī)避免疫抑制因素的影響等。隨著對腫瘤免疫的深入理解，對新抗原預(yù)測研究的持續(xù)深入，臨床研究數(shù)據(jù)的不斷累積，特別是新的技術(shù)、新的免疫治療方法的不斷出現(xiàn)，新抗原特異性T細(xì)胞ACT治療的研發(fā)腳步正在不斷加快，預(yù)計(jì)未來幾年將是新抗原特異性T 細(xì)胞產(chǎn)品上市的重要時期。新抗原特異性T 細(xì)胞ACT 的使用很可能成為轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤治愈性治療的“圣杯”，切實(shí)為廣大腫瘤患者帶來福音。