彭 澤 胡明文 廖芳芳 朱文超 蘇 丹 張愛(ài)民

（貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院辣椒研究所， 貴陽(yáng) 550006）

前言

辣椒炭疽?。ǎ┡c辣椒疫病（）、辣椒病毒病被稱(chēng)為辣椒（L.）上的3大病害。辣椒炭疽病由炭疽菌引起，主要危害辣椒果實(shí)，造成采收前后果實(shí)的腐爛、減產(chǎn)從而造成經(jīng)濟(jì)損失。長(zhǎng)期種植單一類(lèi)型品種，易使品種抗病性下降，同時(shí)田間清潔與管理措施不到位，栽植密度過(guò)大，長(zhǎng)期連作，且貴州辣椒主產(chǎn)區(qū)雨熱同季、高溫高濕，導(dǎo)致辣椒炭疽病多發(fā)。目前炭疽病已成為辣椒優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的主要障礙之一。

防治辣椒炭疽病的途徑主要有化學(xué)防治、生物防治、農(nóng)業(yè)防治和應(yīng)用抗病品種。但辣椒由于種植面積大，病害發(fā)生普遍，化學(xué)、生物等病蟲(chóng)害綜合防控措施及關(guān)鍵藥劑施用技術(shù)的操作要求較高，田間措施又往往延后，造成辣椒病害難以控制和產(chǎn)量損失。推廣和應(yīng)用抗病品種是防治辣椒炭疽病最經(jīng)濟(jì)有效的方法之一。目前生產(chǎn)上極度缺乏抗炭疽病的辣椒品種，且不同辣椒品種對(duì)炭疽病的抗性也不相同。因此開(kāi)展辣椒抗炭疽病資源的篩選、育種研究非常必要。呂玲玲等通過(guò)離體果實(shí)接菌篩選鑒定，得到表現(xiàn)為抗病以上的種質(zhì)資源共10份，可運(yùn)用于炭疽病抗性品種選育。賀字典等采用田間自然發(fā)病方式測(cè)定了10個(gè)主栽品種的抗病性程度，并調(diào)查兩地不同種植模式下辣椒炭疽病發(fā)病率情況。Ro等采用噴霧和針刺接種方法，對(duì)辣椒資源進(jìn)行了抗炭疽病篩選，并利用酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列（CAPS）和高分辨率熔融曲線(xiàn)（HRM）技術(shù)對(duì)所篩抗炭疽病辣椒材料進(jìn)行了驗(yàn)證。

本文采用離體果實(shí)噴霧接菌法對(duì)38份優(yōu)異辣椒種質(zhì)資源高代自交系和雜交組合（品種）開(kāi)展室內(nèi)炭疽病抗性鑒定與篩選，并對(duì)篩選出來(lái)的抗性材料開(kāi)展田間鑒定，以期發(fā)掘出具有較強(qiáng)炭疽病抗性的種質(zhì)資源，為辣椒抗炭疽病育種、分子標(biāo)記輔助育種提供材料支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料及菌種

供試的38份辣椒資源來(lái)自貴州省辣椒研究所，供試菌種為貴州省辣椒研究所栽培課題組自行分離純化得到的膠孢炭疽菌（，編號(hào)：LJ17091501-01-02）。

1.2 離體果實(shí)室內(nèi)接種鑒定

參照亞蔬中心林世雯離體果實(shí)噴霧接種方法略作修改：采集綠色健康成熟果15個(gè)，經(jīng)表面消毒后，采用噴霧接菌法，將配制的孢子懸浮液均勻噴灑在辣椒果實(shí)表面，將其放置于鋪有濕潤(rùn)濾紙的保鮮盒中保濕培養(yǎng)，溫度在25～28 ℃之間，每天12 h光照，相對(duì)濕度保持90%以上，每個(gè)材料進(jìn)行3次重復(fù)。培養(yǎng)7 d后調(diào)查發(fā)病情況。觀察記錄果實(shí)發(fā)病情況，病斑直徑≥1 mm的視為發(fā)病，以病斑面積占整個(gè)果實(shí)面積的百分率來(lái)分級(jí)。

1.3 抗炭疽病資源田間鑒定試驗(yàn)

供試品種：室內(nèi)接種篩選所獲得的抗病材料、易感病材料。

試驗(yàn)地點(diǎn)：貴州省辣椒研究所遵義試驗(yàn)基地，屬于近3年炭疽病多發(fā)地。

試驗(yàn)于2020年4月4日在遵義市新蒲新區(qū)試驗(yàn)基地進(jìn)行漂浮育苗技術(shù)育苗，2020年5月29日定植。采用高畦覆膜方式栽培、畦上雙行單株定植，株距35 cm，行距40 cm，進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，各個(gè)品種重復(fù)3次，每個(gè)小區(qū)種200株，小區(qū)面積為45 m，露地栽培。定植后進(jìn)行常規(guī)管理，在辣椒生長(zhǎng)期間遵照“預(yù)防為主、綜合防治”的原則，炭疽病之外的其余病蟲(chóng)害可使用吡蟲(chóng)啉、阿維菌素、高效氯氰菊酯、寧南霉素等藥劑防治，但整個(gè)生育期不使用任何防治炭疽病的藥品。盛果期開(kāi)始調(diào)查發(fā)病情況，包括發(fā)病率和病情等級(jí)。從2020年8月11日開(kāi)始調(diào)查發(fā)病率，連續(xù)調(diào)查3次，間隔期為7 d，每個(gè)小區(qū)隨機(jī)調(diào)查30株辣椒。在2020年8月25日進(jìn)行病情指數(shù)調(diào)查，隨機(jī)調(diào)查每小區(qū)3株辣椒的所有果實(shí)，以病斑面積占整個(gè)果實(shí)面積的百分率來(lái)分級(jí)，重復(fù)3次。

1.4 調(diào)查方法及品種資源抗病性劃分標(biāo)準(zhǔn)

調(diào)查方法及病情等級(jí)劃分參照GB/T 17980.33—2000《農(nóng)藥 田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(一)殺菌劑防治辣椒炭疽病》執(zhí)行。

發(fā)病率計(jì)算：發(fā)病率/%＝發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100

病情指數(shù)計(jì)算及抗性劃分：

免疫(I)：病情指數(shù)= 0；高抗(HR)：0 <病情指數(shù)≤5；抗病(R)：5 <病情指數(shù)≤20；中抗(MR)：20<病情指數(shù)≤40；感病(S)：病情指數(shù)> 40。

等級(jí)劃分（以病斑面積占整個(gè)果實(shí)面積的百分率）：

0級(jí)：無(wú)病斑；

1級(jí)：病斑面積占果實(shí)面積的2%以下；

3級(jí)：病斑面積占果實(shí)面積的3%～8%；

5級(jí)：病斑面積占果實(shí)面積的9%～15%；

7級(jí)：病斑面積占果實(shí)面積的16%～25%；

9級(jí)：病斑面積占果實(shí)面積的25%以上。

每次調(diào)查時(shí)要查病果率（包括落果）。

病情指數(shù)計(jì)算公式：

2 結(jié)果與分析

2.1 辣椒種質(zhì)資源離體果實(shí)對(duì)炭疽病的抗性鑒定

對(duì)38份辣椒品種（材料）的離體果實(shí)接種病菌，進(jìn)行抗炭疽病菌鑒定（表1），發(fā)現(xiàn)其病情指數(shù)介于17.4～81.0之間，平均病情指數(shù)為54.28。結(jié)果表明，抗病種質(zhì)資源（圖1 a）有3份：X-3-2、紅辣螺絲椒和辣研12號(hào)，占7.9%；中抗病種質(zhì)資源（圖1 b）有9份：GJH2010-3、3A×GJH17-13、

表1 38份辣椒資源名稱(chēng)及抗病性

GJH18-17、GJH18-44、GJH-4-2①、GJH18-41、GJH18-22、7A×GJH2-2①和GJH18-15，占23.7%。對(duì)炭疽病感病的種質(zhì)資源（圖1 c）居多，有26份，占68.4%。

圖1 不同炭疽病抗性的辣椒材料

2.2 辣椒資源對(duì)炭疽病抗性田間鑒定

對(duì)室內(nèi)離體果實(shí)接種篩選出的抗病材料（品種）X-3-2、紅辣螺絲椒和辣研12號(hào)進(jìn)行抗炭疽病田間鑒定，并以易感病材料y185-1作對(duì)照。田間鑒定結(jié)果（表2）與離體果實(shí)接種篩選結(jié)果一致，根據(jù)品種抗病性標(biāo)準(zhǔn)判定，所鑒定的4個(gè)辣椒品種（材料）中X-3-2、紅辣螺絲椒和辣研12號(hào)均為抗病材料，病情指數(shù)介于12.39～17.41之間，y185-1為易感病材料，病情指數(shù)為54.44。將田間病情指數(shù)與室內(nèi)離體果實(shí)接種病情指數(shù)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，二者呈極顯著相關(guān)，相關(guān)性系數(shù)達(dá)0.992，表明室內(nèi)離體果實(shí)接種篩選能很好體現(xiàn)材料在田間的炭疽病真實(shí)抗性。根據(jù)第3次發(fā)病率調(diào)查和田間病情指數(shù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示，X-3-2發(fā)病率和抗病指數(shù)最低，y185-1的發(fā)病率和抗病指數(shù)最高，分別相差2.83倍和3.39倍，X-3-2呈現(xiàn)出更強(qiáng)的抗病性。第1次發(fā)病率調(diào)查顯示，抗病材料X-3-2、紅辣螺絲椒和辣研12號(hào)發(fā)病率為0，易感病材料y185-1發(fā)病率達(dá)到16.67%；而在第2次發(fā)病率調(diào)查中3個(gè)抗病材料才出現(xiàn)了發(fā)病情況，說(shuō)明抗病材料的炭疽病發(fā)病時(shí)間較晚，其抵抗炭疽病病菌的能力更強(qiáng)。

表2 辣椒品種（材料）炭疽病田間鑒定發(fā)病率和病情指數(shù)

3 討論與結(jié)論

目前，辣椒抗炭疽病品種（材料）較少，針對(duì)相關(guān)抗炭疽病種質(zhì)資源的挖掘還不夠，所以對(duì)辣椒抗炭疽病資源的鑒別與篩選具有重要意義。不同地區(qū)的辣椒炭疽病菌種類(lèi)并不相同，目前報(bào)道的辣椒炭疽病病菌主要為黑色炭疽菌（）、黑點(diǎn)炭疽菌（）、膠孢炭疽菌（）、尖孢炭疽菌（）等4種。并且辣椒炭疽病菌種類(lèi)多樣性豐富且病菌還在不斷的分化，想要高效地防治該病害，不僅要選種抗病品種，還要采取生態(tài)調(diào)控措施、合理施肥，化學(xué)藥劑等一系列措施，為辣椒生長(zhǎng)創(chuàng)造適宜的環(huán)境條件，減少病害的發(fā)生。因此在病害發(fā)生初期準(zhǔn)確鑒定病害種類(lèi)，充分掌握病原菌侵染傳播規(guī)律，結(jié)合制定綜合防治措施，才能更好地利用抗病品種，減小炭疽病對(duì)辣椒生產(chǎn)上的危害。

據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，辣椒炭疽病菌易在高溫高濕條件下危害成熟椒果，因此本次試驗(yàn)主要對(duì)以采收成熟果為主的品種（材料）進(jìn)行離體果實(shí)接種抗病篩選，并將抗性較好的3個(gè)品種（材料）進(jìn)行田間抗性鑒定，取得了較好效果。室內(nèi)接種抗性鑒定與田間抗性鑒定結(jié)合則能綜合評(píng)價(jià)、篩選辣椒抗炭疽種質(zhì)資源，張世才等就采用室內(nèi)果實(shí)離體接種結(jié)合田間病圃鑒定出40008和30163兩份抗尖孢炭疽菌的材料。一些研究也表明開(kāi)展室內(nèi)抗性鑒定試驗(yàn)，可獲得穩(wěn)定抗病資源。本研究結(jié)果表明田間鑒定與室內(nèi)離體果實(shí)接種鑒選結(jié)果基本一致，這與吳慶麗等的研究結(jié)果相符，證明室內(nèi)離體果實(shí)接種的方法可較好地對(duì)辣椒種質(zhì)進(jìn)行抗炭疽病鑒定。目前，辣椒炭疽病抗性的遺傳和精細(xì)定位作為縮小種質(zhì)篩選周期、提高鑒別效率的有效方法，也有很多研究報(bào)道。通過(guò)離體果實(shí)接種與田間鑒定的方法綜合篩選種質(zhì)資源，與開(kāi)發(fā)出的抗炭疽病分子標(biāo)記結(jié)合進(jìn)行檢驗(yàn)，能準(zhǔn)確、高效的篩選出抗炭疽病辣椒材料。本文鑒定出的3份抗病種質(zhì)資源也進(jìn)一步豐富了辣椒對(duì)膠孢炭疽菌抗性遺傳的材料基礎(chǔ)，可助推辣椒炭疽病抗性遺傳和精細(xì)定位研究。

綜上所述，離體果實(shí)接種鑒定與田間鑒定結(jié)合對(duì)辣椒炭疽病抗性材料具有良好的鑒定效果。本文通過(guò)室內(nèi)離體果實(shí)接種鑒定，篩選出抗病品種（材料）3份，中抗病品種（材料）9份。結(jié)合田間鑒定，進(jìn)一步驗(yàn)證了3份抗病材料的炭疽病抗性，研究成果可為辣椒生產(chǎn)、炭疽病抗病育種與分子標(biāo)記輔助育種提供材料支撐。