骨軟組織肉瘤是一組起源于間葉組織的高度惡性腫瘤，骨腫瘤和軟組織肉瘤各占 15% 和 85%

。原發(fā)性骨腫瘤以骨肉瘤最常見，自 20 世紀 70 年代化療聯(lián)合手術成為骨肉瘤的標準治療后，其 5 年生存率從低于 20% 上升至 60% 左右；但仍有 20%～30% 的患者于 3 年內(nèi)復發(fā)或轉移，轉移患者 5 年的生存率僅為 20%

。軟組織肉瘤的治療主要以手術切除為主，部分需要輔助放化療，約 16% 患者會發(fā)生轉移，轉移患者中位生存期約 1 年，3 年生存率僅為 20%～25%

。但目前除化療、抗血管生成藥物和少數(shù)特異性靶向藥物外，晚期骨軟組織肉瘤的患者仍缺乏有效治療措施，因此早期診斷、探索預后指標并予精準治療對改善患者生存具有重要意義。

是一種 Ⅰ 型跨膜糖蛋白，屬于去整合素金屬蛋白酶 (A Disintegrin And Metalloproteinase，ADAM) 家族，通常包括胞外段、跨膜段和胞內(nèi)段，其胞外段由前肽、金屬蛋白酶、去整合素、富含半胱氨酸和表皮樣生長因子 (epidermal growth factor，EGF) 樣結構域組成

。研究表明

在骨、軟骨、肌肉、脂肪等多種正常組織中表達，參與受精、細胞黏附、融合、轉移、細胞外基質水解和細胞信號傳導等多個生理過程。

在乳腺癌、膀胱癌、肺腺癌和結直腸癌等多種腫瘤組織中表達會明顯升高，其表達與腫瘤預后負相關

。

Georges 等

發(fā)現(xiàn)敲低

可以抑制注射了骨肉瘤細胞 K7M2 的小鼠腫瘤生長，并進一步明確其機制與

促進腫瘤誘導的骨溶解有關，該研究提示

與肉瘤的發(fā)生發(fā)展可能密切相關。但迄今為止，

與骨軟組織肉瘤的臨床預后關系及分子機制尚無深入研究。本研究基于癌癥基因組圖譜 (the cancer genome altas，TCGA)，基因表達數(shù)據(jù)庫 (gene expression omnibus，GEO) 等腫瘤公共數(shù)據(jù)，運用 UALCAN、GEPIA2.0 和 Kaplan-Meier Plotter 數(shù)據(jù)庫分析

在骨軟組織肉瘤中的表達及其與預后的關系；使用 LinkedOmics、Metascape和 STRING 數(shù)據(jù)庫篩選獲得

共表達基因及相互作用蛋白，并富集分析相關生物學功能。本研究旨在通過生物信息學分析

作為骨軟組織肉瘤預后生物標志物的潛力并探究其可能機制。

依據(jù)文章上述的內(nèi)容可以得知，行為心理在建筑空間設計中所占據(jù)的地位極高。行為心理十分的復雜，建筑空間的設計內(nèi)容以及涉及到的層面也比較廣泛，設計的操作環(huán)節(jié)難度會比較高。無論是行為心理還是建筑空間的設計，其二者都存在著極強的客觀性，在客觀性的影響下，其之間的關系變得越發(fā)的復雜起來，其所產(chǎn)生的影響效應也十分的顯著。想要真正的創(chuàng)設出優(yōu)秀的設計作品，建筑設計人員需要以分析人們心理行為為基準，在其基礎上創(chuàng)新建筑空間設計。

資料與方法

一、使用 2 個數(shù)據(jù)庫分析 ADAM12 在骨軟組織肉瘤的表達

UALCAN 數(shù)據(jù)庫 (http://ualcan.path.uab.edu/index.html) 可在線對 TCGA 數(shù)據(jù)庫中一系列蛋白、miRNA和 lincRNA 編碼基因的表達和患者生存信息進行分析和挖掘

，本研究設置篩選條件為：(1) Gene symbol：

；(2) TCGA dataset：Sarcoma。

GEPIA2.0 數(shù)據(jù)庫 (http://gepia2.cancer-pku.cn/#index) 基于 TCGA 和 GTEx 數(shù)據(jù)庫構建，囊括9736 個腫瘤樣本和 8587 個健康樣本 RNA 序列，可對樣本進行基因表達分析，本研究設置篩選條件為：(1) Gene：

；(2) p-value Cutoff：0.05；(3) Datasets：SARC。

通過上述兩個數(shù)據(jù)庫篩選，以了解

在正常組織及腫瘤組織中的表達水平，基因表達分析采用 TPM (transcript per million) 進行標準化校正。

二、使用 3 個數(shù)據(jù)庫中分析 ADAM12 表達與骨軟組織肉瘤的預后關系

《辦法》將逃避追繳欠稅納入重大稅收違法失信案件的標準由“欠繳稅款金額100萬元以上”下調(diào)為“欠繳稅款金額10萬元以上”。換句話說，就是逃避追繳欠稅10萬元以上，稅務部門便可列為重大稅收違法失信案件，即“黑名單”，向社會公布相關信息，并將信息通報相關部門，共同實施嚴格監(jiān)管和聯(lián)合懲戒。

打退了鬼子的第二輪進攻，渾身是血的夏國忠命令各排檢查統(tǒng)計傷亡情況。統(tǒng)計上來的結果讓夏國忠非常痛心。這一仗，他們犧牲了一個排長，被飛機和大炮炸死炸傷了二十多名戰(zhàn)士，和鬼子拼殺戰(zhàn)死了二十多名戰(zhàn)士。還有十幾個戰(zhàn)士活不見人，死不見尸，估計是在轟炸時被活埋在了泥土里?，F(xiàn)在，他的連隊還剩下七十多人，差不多損失了三分之一。

GEPIA2.0 數(shù)據(jù)庫生存分析模塊的設置篩選條件為：(1) Gene：

；(2) Methods：Overall survival；(3) Group Cutoff：Quartile；(4) Datasets：SARC。通過以上三個數(shù)據(jù)庫分析以獲得骨軟組織肉瘤患者

表達水平與總生存 (overall survival，OS) 的關系。

三、ADAM12 在骨軟組織肉瘤中的共表達基因分析及通路富集

為充分驗證

表達水平與骨軟組織肉瘤的預后關系，本研究在 3 個數(shù)據(jù)庫中對

表達水平和患者 OS 的相關性進行了分析。UALCAN 數(shù)據(jù)庫結果提示

高表達與骨軟組織肉瘤的不良預后存在正相關 (

= 0.021) (圖3a)。Kaplan

Meier Plotter 數(shù)據(jù)庫結果提示骨軟組織肉瘤組織中

低表達患者的 OS 優(yōu)于

高表達患者 (

=1.75，95%

為 1.1～2.78，

= 0.016) (圖3b)，計算顯示

高表達患者的中位生存時間為 60.8個月，而

低表達患者的中位生存時間為89.8 個月。以上結論在 GEPIA2.0 數(shù)據(jù)庫中得到了同樣驗證 (

= 1.9，

= 0.039) (圖3c)。

閱讀方法有二：一是博覽（面），快餐式閱讀，迅速獲得大量信息；二是精研（點），挖井式閱讀，深入理解書中的概念和體系。二者有機結合。

現(xiàn)代書法理論史上，較早、較深入系統(tǒng)地探討書藝本質的王一川先生曾非常精辟地預見道：“對書法的審美根源，特別是審美心理根源的探討，還有許多工作要做。不僅應當從書法創(chuàng)作和鑒賞的實際審美經(jīng)驗中引出結論，而且應當從美學、一般藝術學和書法學三者結合的高度上尋求解決途徑?！保?］

Kaplan-Meier Plotter 數(shù)據(jù)庫 (http://kmplot.com/analysis/) 整合了來源 GEO、EGA 和 TCGA 等多個數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)，可有效評估超過 54 000 個基因對21 種腫瘤的生存影響

。本研究選取泛癌研究模塊，設置篩選條件為：(1) Gene symbol：

；(2) Split patients by：auto select best cutoff；(3)Survival：OS；(4) Datasets：Sarcoma；(5) Follow up threshold：All。

四、ADAM12 蛋白相互作用網(wǎng)絡分析及通路富集

利用 STRING 數(shù)據(jù)庫檢索

相互作用的蛋白分析得到

的蛋白交互作用網(wǎng)絡 (圖5)，該網(wǎng)絡總共包括 10 個存在相互作用的蛋白，即SRC、SDC4、EGF、SH3PXD2A、ITGB1、DLL1、ITGA9、PRKCA、PRKCB、GRB2，蛋白交互作用網(wǎng)絡的富集

= 0.000 282。這些蛋白共同參與表皮生長因子受體 2 即 ERRB2 信號通路及組織形態(tài)改變、血管生成等生物學行為，影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展 (表1)。

結 果

一、ADAM12 在骨軟組織肉瘤中的表達

首先，分別在 UALCAN 數(shù)據(jù)庫和 GEPIA2.0 數(shù)據(jù)庫中對多種腫瘤組織中

的表達情況進行了分析。結果顯示，

在乳腺癌、骨軟組織肉瘤、肺鱗狀細胞癌等 26 種腫瘤組織中高表達，在卵巢漿液性囊腺癌、宮頸鱗狀細胞癌、腎嗜鉻細胞癌等 5 種腫瘤組織中低表達，骨軟組織肉瘤中的

表達量在所有瘤種中排第二，僅次于乳腺癌 (圖1)。

對于影響工程質量問題的行為，堅持自己的原則，要求施工單位必須進行改正。比如說建筑材料不合格、肢解工程、不按規(guī)范施工、偷工減料等問題。這種原則性問題，應該無視施工單位的客觀因素，監(jiān)理工程師絕對不能妥協(xié)。在進行協(xié)調(diào)的過程中，監(jiān)理工程師應該規(guī)范自己的行為，不能“吃拿卡要”，在監(jiān)理過程中不能刻意刁難，對問題應該客觀公正的進行處理，如此協(xié)調(diào)工作才會更有說服力。

其次，分析了

在骨軟組織肉瘤組織與正常組織的表達，結果顯示：骨軟組織肉瘤中的

表達較正常組織顯著增高 (

＜ 0.05)；UALCAN 數(shù)據(jù)庫中正常組織和腫瘤組織

的表達 -TPM 中位值分別為 2.708 和 28.239 (圖2)。

UALCAN 數(shù)據(jù)庫設置篩選條件為：(1) Gene symbol：

；(2) TCGA dataset：Sarcoma。

二、ADAM12 表達與骨軟組織肉瘤的預后關系

LinkedOmics 數(shù)據(jù)庫 (http://www.linkedomics.org/)是一種基于 TCGA 的在線分析平臺，可分析和比較同一類型或多種類型腫瘤的癌癥多組學數(shù)據(jù)

。本研究設置檢索條件為：(1) Cancer Cohort：= TCGA_SARC；(2) Search Dataset：TCGA_SARC Rnaseq；(3) Search Dataset Attribution：

；(4) Target dataset：TCGA_SARC Rnaseq；(5) Statistical Method：Pearson Correlation test。

Metascape 數(shù)據(jù)庫 (http://metascape.org) 提供了全面的基因列表功能注釋和通路分析功能，可實現(xiàn)對基因或蛋白功能的認知

。本研究將 LinkedOmics數(shù)據(jù)庫中分析所得的所有表達基因進行篩選，篩選出“Pearson 相關系數(shù)絕對值 ＞ 0.5”且“

＜ 0.05”的基因并輸入 Metascape 數(shù)據(jù)庫中，通過 Metascape數(shù)據(jù)庫自帶算法在種屬“人類”(“H.sapiens”)中，對共表達基因進行 GO 功能注釋和 KEGG 通路功能富集的自動分析。

三、ADAM12 共表達基因的富集分析

本研究使用 LinkedOmics 數(shù)據(jù)庫篩選出

的共表達基因。前 50 個正相關基因包括

、

、

等 (圖4a)；前 50 個負相關基因包括

、

、

等 (圖4b)。

通過限定“Pearson 相關系數(shù)絕對值 ＞ 0.5”且“

＜ 0.05”這兩個條件，進一步從 LinkedOmics 數(shù)據(jù)庫分析得到的共表達基因中篩選出 164 個具有強相關性的共表達基因，借助 Metascape 數(shù)據(jù)庫對這164 個基因進行 GO 注釋和 KEGG 通路分析，結果顯示

共表達基因主要參與細胞外基質重塑、血管發(fā)育、骨化等多個功能密切相關 (圖4c)。

四、ADAM12 的蛋白相互作用網(wǎng)絡分析

STRING 數(shù)據(jù)庫 (https://string-b.org/) 可分析蛋白質間相互作用

，本研究設置檢索條件為：(1) Protein name：

；(2) Organism：Homosapiens，對和

存在相互作用的上下游蛋白進行分析。

討 論

骨軟組織肉瘤是一類發(fā)病率低、治療手段相對有限且預后極差的腫瘤，缺乏有效的預后生物標志物。既往研究提示

不僅密切參與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程，且與腫瘤的不良預后存在關聯(lián)

。

本研究基于 UALCAN 和 GEPIA2.0 數(shù)據(jù)庫，首先對

在多種腫瘤中的表達進行分析，結果提示

在多種腫瘤中存在高表達，表達水平前兩位分別是乳腺癌和骨軟組織肉瘤。進一步使用UALCAN 數(shù)據(jù)庫及 GEPIA2.0 數(shù)據(jù)庫對骨軟組織肉瘤組織及正常組織中

表達進行了分析，兩個數(shù)據(jù)庫的分析結果一致，均表明

在骨軟組織肉瘤組織中的表達水平顯著高于正常組織，腫瘤組織中的表達水平約為正常組織的 10 倍。

為了解

的表達與預后之間的聯(lián)系，通過 UALCAN 數(shù)據(jù)庫、GEPIA2.0 數(shù)據(jù)庫和 Kaplan-Meier Plotter 數(shù)據(jù)庫對骨軟組織肉瘤患者

表達水平及 OS 進行分析，發(fā)現(xiàn)高表達

的患者較低表達

的患者 OS 更短，

低表達的患者中位生存時間 89.8 個月顯著高于

高表達患者中位生存時間 60.8 個月。以上結果提示，

的表達水平可能可以預測骨軟組織肉瘤的預后。

總之，音樂作為是一種特殊的藝術語言，能對交感神經(jīng)產(chǎn)生作用，可以引起患者的共鳴，分散患者注意力，從而達到干預個人情緒的作用［29-31］。目前，音樂療法在臨床應用還有限，但隨著音樂療法基礎研究的開展，對其原理的進一步闡明，將更加有助于這種非藥物療法在臨床抗焦慮方面的廣泛應用［32-33］。

為進一步明確

導致骨軟組織肉瘤不良預后的可能機制，本研究借助 LinkedOmics、Metascape 和 STRING 數(shù)據(jù)庫對與

可能存在相互作用的基因和蛋白進行了分析。LinckedOmics的預測結果顯示，前 50 名正相關基因位列前 3 位的是

、

、

。既往研究顯示

上調(diào)可促進腫瘤細胞轉移和上皮間質轉化，且

高表達與骨肉瘤的不良預后相關

；

在肺癌組織中高表達，下調(diào)

可通過抑制 Ras / Raf / MEK / ERK 通路抑制肺癌細胞增殖并促進細胞凋亡

；

則可通過調(diào)節(jié)膠原重塑促進骨肉瘤轉移

。結合上述研究和本研究結果提示

及其共表達基因可能參與骨軟組織肉瘤的增殖、轉移等病理過程。

除了基因層面以外，本研究還進一步從蛋白相互作用的角度對

導致骨軟組織肉瘤不良預后的可能機制進行探索。STRING 數(shù)據(jù)庫顯示

與 SRC、SDC4、EGF 等蛋白間存在較強的相互作用。SRC 在最新的研究發(fā)現(xiàn)被

激活，并共同參與 MMP 介導的細胞外基質降解及重塑，顯著增強腫瘤侵襲轉移能力

。蛋白相互作用網(wǎng)絡顯示與

存在密切相互作用的蛋白SDC4 被證實可以通過調(diào)節(jié)細胞及基質之間的黏附作用，促進腫瘤細胞侵襲性生長及遷移，但尚無直接針對

與 SDC4 相互作用的研究報道

。

EGF 與 EGFR 特異性結合后進一步誘導酪氨酸磷酸化和受體二聚化，最終通過一系列信號通路的激活使得腫瘤細胞無序增殖，EGFR 現(xiàn)已成為公認的抗腫瘤靶點

。Díaz 等

研究發(fā)現(xiàn)，在缺氧的情況下，

的活性以 Notch 信號通路依賴的方式增強，并通過促進 EGFR 配體例如 HB-EGF 的胞外域脫落來激活 EGFR 通路最終調(diào)節(jié)細胞增殖和分化。此外，

還可通過 EGFR 通路促進三陰性乳腺癌細胞表達癌癥干細胞標記物

。

不僅直接作用于腫瘤細胞，還對腫瘤微環(huán)境中產(chǎn)生影響。腫瘤細胞中的

通過激活EGFR / STAT3 / Akt 信號通路，導致腫瘤微環(huán)境中促血管生成因子和抗血管生成因子的表達失調(diào)，最終促進腫瘤新生血管形成

。本研究采用 STRING 數(shù)據(jù)庫進行蛋白相互作用網(wǎng)絡分析，結果顯示 EGF 與

之間的相互作用也極為強烈，提示 EGF 在骨軟組織肉瘤的進展中可能發(fā)揮重要作用。

更重要的是，本研究借助 LinkedOmics 和Metascape 數(shù)據(jù)庫所獲得的

共表達基因和借助 STRING 數(shù)據(jù)庫所獲得的相互作用蛋白網(wǎng)絡在通路富集上的結果高度吻合，均提示

基因參與細胞外基質重塑、血管發(fā)育等生物學功能，從而可能促進腫瘤轉移。

綜上所述，本研究利用生物信息學數(shù)據(jù)庫和工具分析

在骨軟組織肉瘤中的表達和預后的關系并進一步探索了其可能機制，可有效避免樣本不足及抽樣誤差帶來的偏倚；結果提示

可能成為骨軟組織肉瘤預后生物標記物，但尚需體內(nèi)外實驗的驗證。

[1]Fletcher CDM, Hogendoorn P, Mertens F.WHO Classification of Tumors of Soft Tissue and Bone[M].Lyon: IARC Press,2013: 321-324.

[2]Crompton JG, Ogura K, Bernthal NM, et al.Local control of soft tissue and bone sarcomas[J].J Clin Oncol, 2018,36(2):111-117.DOI: 10.1200/JCO.2017.75.2717.

[3]Ritter J, Bielack SS.Osteosarcoma[J].Annals of Oncology,2010, 21:vii320-vii325.DOI: 10.1093/annonc/mdq276.

[4]Meyer M, Seetharam M.First-line therapy for metastatic soft tissue sarcoma[J].Curr Treat Options Oncol, 2019, 20(1):6.DOI: 10.1007/s11864-019-0606-9.

[5]Nyren-Erickson EK, Jones JM, Srivastava DK, et al.A disintegrin and metalloproteinase-12 (ADAM12): function,roles in disease progression, and clinical implications[J].Biochim Biophys Acta, 2013, 1830(10):4445-4455.DOI:10.1016/j.bbagen.2013.05.011.

[6]Georges S, Chesneau J, Hervouet S, et al.A disintegrin and metalloproteinase 12 produced by tumour cells accelerates osteosarcoma tumour progression and associated osteolysis[J].Eur J Cancer, 2013, 49(9):2253-2263.DOI: 10.1016/j.ejca.2013.02.020.

[7]Chandrashekar DS, Bashel B, Balasubramanya SAH,et al.UALCAN: a portal for facilitating tumor subgroup gene expression and survival analyses[J].Neoplasia, 2017,19(8):649-658.DOI: 10.1016/j.neo.2017.05.002.

[8]Gy?rffy B.Survival analysis across the entire transcriptome identifies biomarkers with the highest prognostic power in breast cancer[J].Comput Struct Biotechnol J, 2021, 19:4101-4109.DOI: 10.1016/j.csbj.2021.07.014.

[9]Vasaikar SV, Straub P, Wang J, et al.Linked omics: analyzing multi-omics data within and across 32 cancer types[J].Nucleic Acids Res, 2018, 46(D1):D956-D963.DOI: 10.1093/nar/gkx1090.

[10]Zhou Y, Zhou B, Pache L, et al.Metascape provides a biologistoriented resource for the analysis of systems-level datasets[J].Nat Commun, 2019, 10(1):1523.DOI: 10.1038/s41467-019-09234-6.

[11]Szklarczyk D, Gable AL, Nastou KC, et al.The STRING database in 2021: customizable protein-protein networks,and functional characterization of user-uploaded gene /measurement sets[J].Nucleic Acids Res, 2021, 49(D1):D605-D612.DOI: 10.1093/nar/gkaa1074.

[12]Chen K, Pan G.Dysregulation of microRNA-106a-5p-RUNX1 axis associates with clinical progression and prognosis of osteosarcoma patients[J].Pathol Res Pract, 2019,215(12):152686.DOI: 10.1016/j.prp.2019.152686.

[13]Hong D, Fritz AJ, Gordon JA, et al.RUNX1-dependent mechanisms in biological control and dysregulation in cancer[J].J Cell Physiol, 2019, 234(6):8597-8609.DOI:10.1002/jcp.27841.

[14]Wen Z, Jiang R, Huang Y, et al.Inhibition of lung cancer cells and Ras / Raf / MEK / ERK signal transduction by ectonucleoside triphosphate phosphohydrolase-7 (ENTPD7)[J].Respir Res, 2019, 20(1):194.DOI: 10.1186/s12931-019-1165-0.

[15]Wang S, Zhong L, Li Y, et al.Up-regulation of PCOLCE by TWIST1 promotes metastasis in osteosarcoma[J].Theranostics,2019, 9(15):4342-4353.DOI: 10.7150/thno.34090.

[16]Wei Z, Chen L, Meng L, et al.LncRNA HOTAIR promotes the growth and metastasis of gastric cancer by sponging miR-1277-5p and upregulating COL5A1[J].Gastric Cancer,2020, 23(6):1018-1032.DOI: 10.1007/s10120-020-01091-3.

[17]Ogawa K, Lin Q, Li L, et al.Aspartate β-hydroxylase promotes pancreatic ductal adenocarcinoma metastasis through activation of SRC signaling pathway[J].J Hematol Oncol, 2019,12(1):144.DOI: 10.1186/s13045-019-0837-z.

[18]Keller-Pinter A, Gyulai-Nagy S, Becsky D, et al.Syndecan-4 in tumor cell motility[J].Cancers (Basel), 2021, 13(13):3322.DOI: 10.3390/cancers13133322.

[19]Tomas A, Futter CE, Eden ER.EGF receptor trafficking:consequences for signaling and cancer[J].Trends Cell Biol,2014, 24(1):26-34.DOI: 10.1016/j.tcb.2013.11.002.

[20]Díaz B, Yuen A, Iizuka S, et al.Notch increases the shedding of HB-EGF by ADAM12 to potentiate invadopodia formation in hypoxia[J].J Cell Biol, 2013, 201(2):279-292.DOI: 10.1083/jcb.201209151.

[21]Duhachek-Muggy S, Qi Y, Wise R, et al.Metalloproteasedisintegrin ADAM12 actively promotes the stem cell-like phenotype in claudin-low breast cancer[J].Mol Cancer, 2017,16(1):32.DOI: 10.1186/s12943-017-0599-6.

[22]Roy R, Dagher A, Butterfield C, et al.ADAM12 is a novel regulator of tumor angiogenesis via STAT3 signaling[J].Mol Cancer Res, 2017, 15(11):1608-1622.DOI: 10.1158/1541-7786.MCR-17-0188.