趙云堂，李慶華，夏桂林

（1.云南省麗江市永勝縣六德鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，云南 永勝 674213；2.云南省麗江市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 麗江 674100；3.云南省麗江市永勝縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 永勝 674200）

他留烏骨雞主產(chǎn)于麗江市永勝縣，中心產(chǎn)區(qū)為永勝縣六德傈僳族彝族鄉(xiāng)，2010年1月15日，他留烏骨雞被列入國家畜禽遺傳資源名錄，2011年錄入《中國畜禽遺傳資源志·家禽志》，屬肉蛋兼用型品種。2014年起永勝縣開展了他留烏骨雞保種基地建設(shè)，在六德鄉(xiāng)建設(shè)了保種場，保種場在新城疫和高致病性禽流感的防控工作中雖然按照縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供的免疫程序開展預(yù)防免疫，但由于防控不當(dāng)，死雞、淘汰雞現(xiàn)象普遍，制訂適合保種場的免疫程序已刻不容緩。因此，2016年4～8月我們在六德鄉(xiāng)他留文化產(chǎn)業(yè)公司保種場開展了雞新城疫和高致病性禽流感H9抗體檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)及動(dòng)物選擇試驗(yàn)地點(diǎn)在六德鄉(xiāng)他留文化產(chǎn)業(yè)公司保種場，該場位于云南省麗江市永勝縣六德鄉(xiāng)營山村委會(huì)，雞場位于遠(yuǎn)離村莊的荒山中，距主干公路5km，占地面積240畝，衛(wèi)生防疫制度，飼養(yǎng)管理制度建全，執(zhí)行良好，試驗(yàn)開始時(shí)存欄他留烏骨雞28000羽。

試驗(yàn)動(dòng)物選擇該場2016年4月10日孵化出殼的2000羽他留烏骨雞。按如下免疫程序接種（見表1）。

表1 他留烏骨雞種保種場現(xiàn)行免疫程序

1.2 試驗(yàn)材料雞新城疫病毒血凝抑制試驗(yàn)（HI）抗原、陽性血清購自青島易幫生物工程有限公司，批號(hào)2016002；禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗(yàn)（HI）抗原、陽性血清購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，批號(hào)2016003。

1.3 試驗(yàn)方法及檢測標(biāo)準(zhǔn)對2016年4月10日剛出殼的雛雞中隨機(jī)選擇200羽單獨(dú)飼養(yǎng)組成試驗(yàn)組，在1、5、10、15、21、28、35、42、56、64、91、120、180日齡隨機(jī)抽取32羽從翅靜脈采血，分離血清后冷凍，送縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，采用血凝（HA）與血凝抑制試驗(yàn)（HI）分別開展新城疫抗體檢測和高致病性禽流感H9抗體檢測。檢測標(biāo)準(zhǔn)分別為新城疫診斷技術(shù)GB/T16550-2008和高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T18936-2003。

1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析在檢測結(jié)果中去掉一個(gè)最大值和一個(gè)最小值，要求最大值和最小值差≥3時(shí)方可進(jìn)行最大差異化處理，試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用EXCEL進(jìn)行分析，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

在雞場實(shí)施現(xiàn)行免疫程序情況下，不同日齡雞新城疫和禽流感H9抗體監(jiān)測結(jié)果（見表2）。

表2 他留烏骨雞種保種場雞新城疫、禽流感H9抗體檢測結(jié)果

2.1 不同日齡雞新城疫抗體監(jiān)測結(jié)果監(jiān)測結(jié)果表明：在雛雞階段（1～28日齡）1日齡為6.12log2、5日齡為6.69log2、10日齡為5.66log2、15日齡為4.97log2、21日齡為4.69log2，說明該批他留烏骨雞1～7日齡雞新城疫母源抗體較高，保種場母雞群雞新城疫免疫效果好。但7日齡以后至21日齡雞新城疫抗體均為下降趨勢，證實(shí)7日齡免疫后沒有產(chǎn)生足夠的抗體，分析原因7日齡使用新支二聯(lián)苗滴鼻或滴眼免疫是通過黏膜免疫而起作用，但體液內(nèi)的抗體檢測效果卻不好；另外，新支+禽流感H9+法氏囊病油苗免疫后抗體產(chǎn)生緩慢，有較長時(shí)間的空白期。21日齡使用雞新城疫活疫苗免疫7d后抗體隨即上升，并能長時(shí)間維持較高水平，此后，使用聯(lián)苗點(diǎn)眼也能保持較高水平，這可能得益于7日齡免疫時(shí)細(xì)胞產(chǎn)生的記憶作用。對1～180日齡雞新城疫抗體檢測結(jié)果表明：21日齡進(jìn)行雞新城疫加強(qiáng)免疫是必須的。

2.2 不同日齡雞禽流感H9抗體檢測結(jié)果檢測結(jié)果表明：1日齡出殼雞禽流感H9抗體最高為7.75log2，5日齡為7.71log2，此后至35日齡禽流感H9抗體一直處于下降階段，7日齡使用新支+禽流感H9+法氏囊病油苗免疫基本沒有產(chǎn)生免疫應(yīng)答，35日齡使用新城疫+禽流感H9二聯(lián)油苗免疫后又開始緩慢上升，50日齡采用禽流感H5+H9二價(jià)活疫苗第3次加強(qiáng)免疫后抗體很快升高，并長時(shí)間維持上升趨勢，到120日齡時(shí)最高為7.78log2，180日齡時(shí)仍達(dá)7.57log2。因此建議禽流感免疫最好使用二價(jià)活疫苗。

3 討論與小結(jié)

3.1 試驗(yàn)證實(shí)雛雞出殼后不論是雞新城疫還是禽流感H9母源抗體都在10日齡前維持較好水平，隨雛雞日齡的增大，母源抗體的水平也逐漸下降，雞新城疫、禽流感H9亞型母源抗體水平35日齡已基本消失。因此，雞場確定免疫程序的首免日齡，既要避開母源抗體的高峰期，又不能遲于母源抗體保護(hù)臨界值。

3.2 從試驗(yàn)結(jié)果看出雛雞新城疫抗體1～5日齡逐漸升高，這與雛雞吸收卵黃囊內(nèi)抗體有關(guān)。隨著卵黃囊的消失，母源抗體逐漸下降，而7日齡免疫后沒有產(chǎn)生足夠的抗體，21日齡降到4.69log2，所以雞新城疫二次免疫在21日齡為佳。21日齡免疫后抗體持續(xù)上升，期間35日齡使用新城疫+禽流感H9二聯(lián)油苗免疫、110日齡使用新支二聯(lián)活苗（ND7+IB120)、新支減三聯(lián)油苗免疫均對雞新城疫抗體的影響不大，到120日齡后又呈下降趨勢。因此，120～130日齡進(jìn)行第三次免疫能獲得長時(shí)間保護(hù)，到180日齡時(shí)抗體水平還可達(dá)到7.46log2，進(jìn)入下次免疫周期。

禽流感H9抗體在7日齡免疫后有1周的上升期，此后15～35日齡逐漸下降，到基本消失，因此，應(yīng)在14日齡時(shí)開展首次免疫。35日齡、50日齡2次免疫后呈連續(xù)上升趨勢，到120日齡仍能維持高峰，180日齡時(shí)保持在7.57log2，所以120～130日齡使用新城疫、禽流感（H9亞型）二聯(lián)活疫苗免疫即可順利進(jìn)入下次免疫周期。

3.3 根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果結(jié)合當(dāng)?shù)厮魹豕请u保種場現(xiàn)有防疫工作實(shí)際，推薦適合的免疫程序（見表3）。

表3 他留烏骨雞保種場推存免疫程序

使用疫苗接種應(yīng)充分考慮雞場的生物安全措施，只有完善的生物安全措施，才能使雞群獲得更長的免疫保護(hù)期。

3.4 臨床監(jiān)測抗體是確定免疫時(shí)間最可靠、最直接的依據(jù)建議他留烏骨雞種保種場每年要定期開展免疫抗體監(jiān)測，適時(shí)調(diào)整免疫程序，科學(xué)、合理做好防控，逐步開展疫病凈化，達(dá)到凈化示范場目標(biāo)。