何曉艷，李小萬(wàn)，邱遠(yuǎn)金，張 晶，石磊嶺*

1吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，長(zhǎng)春 130118；2新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，烏魯木齊 830002；3新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物科技分院，昌吉 83110

狼毒始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其性平，味苦、辛，毒性較大；有祛痰、消積、止痛之功效[1]，主要用于治療水腫腹脹，痰食蟲積，心腹疼痛，慢性氣管炎，淋巴結(jié)核，瘡癬等[2-5]，但在臨床使用中十分混亂，偽品較多，正品為瑞香狼毒[6]。天山假狼毒(Stelleropsistianschanica)為瑞香科的假狼毒屬植物，與瑞香狼毒在種屬上具有一定的親緣關(guān)系，且共有成分較多，在新疆當(dāng)?shù)乇挥米髦兴幚嵌緜纹肥褂肹7]；其高15～30 cm，具有頭狀花序或極短的穗狀花序，根莖木質(zhì)，黃褐色或淡褐色；生長(zhǎng)于海拔1 700～2 000 m的山坡草地，僅分布于我國(guó)新疆昭蘇縣和國(guó)外吉爾吉斯斯坦地區(qū)，由于獨(dú)特的地理環(huán)境和生長(zhǎng)區(qū)域使得人們對(duì)天山假狼毒的功效成分研究偏少[8,9]。如今從中分離得到的化合物主要有木脂素類、黃酮類、萜類和酚類等化學(xué)成分[10-12]，但對(duì)其藥理方面的研究報(bào)道還尚屬空白。因此，為了進(jìn)一步研究天山假狼毒的物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分研究，并對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行細(xì)胞毒活性測(cè)試，為天山假狼毒的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Bruker Avance III 600型核磁共振波譜儀(德國(guó)Bruker公司)；賽默飛世(Thermo Fisher)LTQ-ObitrapX液質(zhì)聯(lián)用儀(美國(guó)Thermo Fisher公司)；Lumtch-K-501半制備液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒有限公司)；ZF-5型手提紫外分析儀(上海勤科分析儀器有限公司)；RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；DLSB-5/10低溫冷卻液循環(huán)泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；柱色譜硅膠和薄層色譜用硅膠G、H、GF254(青島海洋化工有限公司)；HW-40C凝膠(Toyopearl公司)；MCI(日本三菱化學(xué)公司)；反相硅膠Lichroprep Rp-18(40～63 μm)(日本Daiso有限公司)；常規(guī)試劑均為分析純；娃哈哈水；人胃癌細(xì)胞株HGC-27(中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞研究所)；RPMI.1640培養(yǎng)基(江蘇凱基生物技術(shù)有限公司)；胎牛血清(美國(guó)Hyclone公司)；MTT試劑盒(費(fèi)德生物)。10%磷酸緩沖鹽溶液(PBS)、0.25%胰蛋白酶-DETA消化液(北京索萊寶科技有限公司)；細(xì)胞培養(yǎng)瓶、15 mL離心管(美國(guó)CORNING公司)。

天山假狼毒采于新疆昭蘇縣，經(jīng)新疆中藥民族藥研究所賈曉光研究員鑒定為天山假狼毒StelleropsistianschanicaPobed.，憑證標(biāo)本(20201022)保存在新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所標(biāo)本室。

1.2 實(shí)驗(yàn)與方法

1.2.1 提取分離

取天山假狼毒根部10 kg，陰干，粉碎，用10倍量95%甲醇加熱回流提取3次，每次3 h，合并提取液，回收溶劑，濃縮后得總浸膏2 861 g?？偨嘤盟稚⒑?，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯各萃取3次，萃取液減壓濃縮至干。最終得到二氯甲烷部位85 g，乙酸乙酯238 g，取二氯甲烷部位85 g經(jīng)硅膠(100～200 目)柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(1∶0→0∶1)梯度洗脫得5個(gè)流分Fr.1～5。Fr.4(4.7 g)用反相硅膠Lichroprep Rp-18(40～63 μm)柱色譜分離，甲醇-水(50%→100%甲醇)梯度洗脫得到5個(gè)組分Fr.4-1～Fr.4-5。Fr.4-2(2.3 g)再經(jīng)反相材料柱色譜分離，洗脫液得到5個(gè)組分Fr.4-2-1～Fr.4-2-5。Fr.4-2-5(0.33 g)經(jīng)HPLC(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，80%甲醇)分離純化得化合物1(2.7 mg，tR=27 min)、2(4.2 mg，tR=31 min)。Fr.5(13.4 g)進(jìn)行硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇(1∶0→0∶1)梯度洗脫得5個(gè)組分Fr.5-1～5-5。Fr.5-1(0.1 g)析出黃色針狀結(jié)晶化合物3(3.7 mg)。Fr.5-2(3.6 g)經(jīng)HW-40C凝膠柱色譜分離，得到6個(gè)組分Fr.5-2-1～Fr.5-2-6。Fr.5-2-6(0.8 g)析出白色沉淀為化合物4(4.7 mg)，F(xiàn)r.5-2-2(0.68 g)經(jīng)HPLC(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，80%甲醇)分離純化得化合物5(5.3 mg，tR= 13 min)。Fr.5-2-3(0.45 g)經(jīng)HPLC(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，45%甲醇)分離純化得化合物6(2.1 mg，tR= 18 min)、7(1.8 mg，tR= 24 min)、8(3.7 mg，tR= 33 min)、9(3.2 mg，tR= 38 min)。Fr.5-3(4.3 g)經(jīng)HW-40C凝膠柱色譜分離，得到5個(gè)組分Fr.5-3-1～Fr.5-3-5。Fr.5-3-2(0.38 g)，經(jīng)HPLC(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，80%甲醇)分離純化得化合物10(7.2 mg，tR= 30 min)。Fr.5-3-3(0.62 g)，經(jīng)HPLC(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，35%甲醇)分離純化得化合物11(4.3 mg，tR= 10.6 min)、12(2.6 mg，tR= 19 min)、13(3.8 mg，tR= 26 min)。Fr.5-4(2.6 g)經(jīng)HW-40C凝膠柱色譜分離，得到4個(gè)組分Fr.5-4-1～Fr.5-4-4。Fr.5-4-3(0.41 g)，經(jīng)HPLC(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，33%甲醇)分離純化得化合物14(4.3 mg，tR= 12 min)、15(2.6 mg，tR= 46 min)。

1.2.2 細(xì)胞毒活性篩選

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HGC-27胃癌細(xì)胞，PBS洗去培養(yǎng)液，用0.25%胰酶消化細(xì)胞1.5～2 min，終止消化，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)后，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個(gè)/mL，然后每孔取100 μL接種于96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)箱中恒溫過(guò)夜，加入配置好的化合物1～15和陽(yáng)性藥DDP溶液繼續(xù)培養(yǎng)48 h。然后每孔再加入配置好的MTT溶液(濃度為5 mg/mL)，置于CO2培養(yǎng)箱37 ℃孵育，孵育4 h后棄去上清液。最后每孔加入150 μL DMSO，避光振蕩10 min，用酶標(biāo)儀檢測(cè)。在570 nm檢測(cè)波長(zhǎng)下測(cè)定每個(gè)孔的OD值，計(jì)算不同濃度的藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率，平行重復(fù)3次。抑制率的計(jì)算公式為：抑制率=(OD對(duì)照-OD給藥)/OD對(duì)照×100%。IC50值用Excel軟件計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色無(wú)定形粉末；10%濃硫酸-乙醇顯紅棕色；ESI-MS：m/z529.28[M+H]，分子式為C30H40O8。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.65(1H，s，H-1)，6.70(1H，dd，J=10.8，4.8 Hz，H-3′)，6.06(1H，dd，J=10.8，4.2 Hz，H-4′)，5.85(1H，m，H-2′)，5.72(1H，d，J=15.6 Hz，H-5′)，5.03(1H，s，H-16a)，4.92(1H，t，J=1.2 Hz，H-16b)，4.43(1H，d，J=3.0 Hz，H-14)，4.26(1H，s，H-5)，3.89(1H，s，H-10)，3.77～3.84(2H，m，H-20)，3.46(1H，s，H-7)，2.95(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，2.50(1H，m，H-11)，2.24(2H，m，H-12)，2.09(2H，m，H-6′)，1.81(3H，q，J=1.2 Hz，H-19)，1.80(3H，s，H-17)，1.38(2H，m，H-7′)，1.20(3H，d，J=7.2 Hz，H-18)，1.25～1.28(4H，m，H-8′、9′)，0.88(3H，t，J=7.2 Hz，H-10′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：161.1(C-1)，136.7(C-2)，209.5(C-3)，72.2(C-4)，72.1(C-5)，60.3(C-6)，65.0(C-7)，36.7(C-8)，79.5(C-9)，48.0(C-10)，34.9(C-11)，36.4(C-12)，84.4(C-13)，81.9(C-14)，146.1(C-15)，111.4(C-16)，19.0(C-17)，20.4(C-18)，10.0(C-19)，65.6(C-20)，116.4(C-1′)，122.7(C-2′)，134.8(C-3′)，128.8(C-4′)，139.0(C-5′)，32.7(C-6′)，28.7(C-7′)，31.3(C-8′)，22.5(C-9′)，14.1(C-10′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，故鑒定化合物1為excoecariatoxin。

化合物2白色無(wú)定形粉末；10%濃硫酸-乙醇顯紅棕色；ESI-MS：m/z545.27[M+H]，分子式為C30H40O9。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.60(1H，q，J=1.2 Hz，H-1)，6.65(1H，dd，J=10.8，4.8 Hz，H-3′)，6.03(1H，m，H-4′)，5.84(1H，m，H-2′)，5.65(1H，d，J=1.2 Hz，H-5′)，5.11(1H，s，H-16a)，5.09(1H，s，H-16b)，4.73(1H，d，J=2.4 Hz，H-14)，4.25(1H，s，H-5)，3.90(2H，s，H-20)，3.83(1H，d，J=3.0 Hz，H-10)，3.78(1H，m，H-7)，3.73(1H，d，J=2.4 Hz，H-12)，3.53(1H，s，H-8)，2.49(1H，m，H-11)，2.10(2H，m，H-6′)，1.88(3H，s，H-17)，1.81(3H，s，H-19)，1.38(2H，m，H-7′)，1.25～1.28(4H，m，H-8′，9′)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-18)，0.88(3H，t，J=6.6 Hz，H-10′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：160.9(C-1)，136.6(C-2)，209.8(C-3)，72.2(C-4)，72.1(C-5)，60.4(C-6)，64.3(C-7)，44.6(C-8)，78.4(C-9)，47.6(C-10)，34.9(C-11)，77.1(C-12)，85.2(C-13)，80.7(C-14)，145.0(C-15)，112.8(C-16)，18.7(C-17)，19.0(C-18)，10.0(C-19)，65.0(C-20)，116.8(C-1′)，128.6(C-2′)，134.9(C-3′)，131.0(C-4′)，139.2(C-5′)，32.7(C-6′)，28.8(C-7′)，31.3(C-8′)，22.5(C-9′)，14.1(C-10′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14-15]，故鑒定化合物2為12-羥基瑞香毒素。

化合物3黃色針狀晶體；ESI-MS：m/z169.05[M+H]，分子式為C8H8O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.86(1H，s，H-3，6)，3.83(3H，s，2×OMe)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：187.1(C-1)，157.3(C-2)，107.5(C-3)，56.6(2×OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，故鑒定化合物3為2，5-二甲氧基對(duì)苯醌。

化合物4白色粉末；在紫外燈光下顯藍(lán)色熒光；ESI-MS：m/z353.08[M+H]，分子式為C19H12O7。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.68(1H，d，J=9.6 Hz，H-4′)，7.46(1H，d，J=9.0 Hz，H-4)，7.42(1H，s，H-5′)，7.00(2H，m，H-6′，8′)，6.96(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.84(1H，s，H-5)，6.35(1H，d，J=9.0 Hz，H-3′)，3.97(3H，s，OMe)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：160.6(C-2)，137.4(C-3)，129.3(C-4)，104.9(C-5)，144.6(C-6)，149.0(C-7)，107.2(C-8)，110.8(C-9)，147.8(C-10)，159.4(C-2′)，114.8(C-3′)，143.0(C-4′)，129.2(C-5′)，113.8(C-6′)，157.3(C-7′)，103.2(C-8′)，114.9(C-9′)，155.4(C-10′)，56.5(C-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]，故鑒定化合物4為rutamontine。

化合物5黃色針狀結(jié)晶；ESI-MS：m/z284.09[M+H]，分子式為C16H13NO4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：9.42(1H，s，H-1)，7.82(1H，s，H-4)，7.44(1H，d，J=2.4 Hz，H-5)，6.85(1H，d，J=2.4 Hz，H-7)，4.03(3H，s，H-16)，4.00(3H，s，H-17)，2.75(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：149.7(C-1)，164.2(C-3)，117.4(C-4)，103.4(C-5)，164.9(C-6)，105.4(C-7)，162.7(C-8)，180.5(C-9)，183.4(C-10)，136.9(C-11)，115.6(C-12)，137.5(C-13)，125.4(C-14)，25.0(C-15)，56.1(C-16)，56.6(C-17)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[18]，故鑒定化合物5為scorpinone。

化合物6無(wú)色油狀物；ESI-MS：m/z213.12[M+H]，分子式為C11H16O4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.43(2H，s，H-2，6)，3.88(6H，s，2×OMe)，3.69(2H，q，J=5.4 Hz，H-9)，2.65(2H，t，J=7.8 Hz，H-7)，1.88(2H，m，H-8)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：132.9(C-1)，146.9(C-3，5)，132.7(C-4)，104.9(C-2，6)，32.2(C-7)，34.75(C-8)，62.3(C-9)，56.5(2×OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[19]，故鑒定化合物6為dihydrosyringenin。

化合物7白色粉末；ESI-MS：m/z164.09[M+H]，分子式為C10H13NO。1H NMR(600MHz，CDCl3)δ：7.31～7.34(2H，t，J=7.8 Hz，H-2，6)，7.23～7.25(1H，d，J=7.2 Hz，H-4)，7.19～7.21(3H，d，J=7.2 Hz，H-3，5)，3.52(2H，q，J=6.0 Hz，H-8)，2.82(2H，t，J=6.6 Hz，H-7)，1.95(3H，s，H-2′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：173.9(C=O)，138.9(C-1)，128.8(C-3，5)，126.6(C-4)，128.6(C-2，6)，35.6(C-7)，40.6(C-8)，23.4(C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20]，故鑒定化合物7為N-苯乙基乙酰胺。

化合物8棕色油狀物；ESI-MS：m/z359.16[M+H]，分子式為C20H22O6。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.90(2H，s，H-2，2′)，6.89(2H，s，H-5，5′)，6.83(2H，dd，J=1.2，7.8 Hz，H-6，6′)，5.61(2H，s，4，4′-OH)，4.74(2H，d，J=4.2 Hz，H-7，7′)，4.25(2H，m，H-9α，9′α)，3.91(3H，s，2×OMe)，3.87(2H，dd，J=3.6，9.0 Hz，H-9b，9′b)，3.11(2H，m，H-8，8′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：132.9(C-1，1′)，108.5(C-2，2′)，146.6(C-3，3′)，145.2(C-4，4′)，114.2(C-5，5′)，119.0(C-6，6′)，85.9(C-7，7′)，54.2(C-8，8′)，71.7(C-9，9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[21]，故鑒定化合物8為松脂醇。

化合物9黃色油狀物；ESI-MS：m/z359.14[M+H]，分子式為C20H22O6。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.83(2H，dd，J=4.2，7.8 Hz，H-5，5′)，6.61(2H，m，H-2，2′)，6.52(1H，dd，J=1.8，6.0 Hz，H-6)，6.41(1H，d，J=1.2 Hz，H-6′)，4.16(1H，dd，J=1.2，7.8 Hz，H-9′α)，3.91(1H，dd，J=1.2，7.8 Hz，H-9′b)，3.82(6H，d，OMe)，2.97(2H，q，J=9.0 Hz，H-7)，2.45～2.63(4H，m，H-7′，8，8′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：129.8(C-1)，111.4(C-2)，146.7(C-3)，144.5(C-4)，114.4(C-5)，122.1(C-6)，34.6(C-7)，46.6(C-8)，178.8(C-9)，129.5(C-1′)，110.9(C-2′)，146.5(C-3′)，144.3(C-4′)，114.0(C-5′)，121.3(C-6′)，38.3(C-7′)，41.0(C-8′)，71.4(C-9′)，55.8，55.7(2×OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[22]，故鑒定化合物9為馬臺(tái)樹脂醇。

化合物10白色無(wú)定形粉末；10%濃硫酸-乙醇顯紅棕色；ESI-MS：m/z547.29[M+H]，分子式為C30H42O9。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.66(1H，s，H-1)，7.44(1H，m，H-3′)，7.32(1H，dd，J=9.6，5.4 Hz，H-4′)，6.21(1H，s，H-5′)，5.92(1H，d，J=15 Hz，H-2′)，5.13(1H，s，H-16a)，5.08(1H，s，H-16b)，4.26(1H，s，H-5)，3.89(1H，m，H-14)，3.79～3.89(2H，m，H-20)，3.79(1H，d，J=1.2 Hz，H-7)，3.65(1H，s，H-10)，3.16(1H，s，H-8)，2.51(1H，m，H-11)，2.20(3H m，H-12a，6′)，2.13(1H，m，H-12b)，1.89(3H，s，H-17)，1.78(3H，s，H-19)，1.44(2H，m，H-7′)，1.13(4H，m，H-8′，9′)，1.05(3H，d，J=6.6 Hz，H-18)，0.90(3H，s，H-10′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：162.3(C-1)，134.7(C-2)，209.5(C-3)，79.5(C-4)，70.5(C-5)，62.0(C-6)，63.5(C-7)，37.5(C-8)，72.4(C-9)，49.8(C-10)，39.1(C-11)，37.7(C-12)，74.0(C-13)，77.8(C-14)，145.7(C-15)，114.1(C-16)，9.9(C-17)，18.2(C-18)，19.0(C-19)，65.2(C-20)，167.5(C-1′)，117.7(C-2′)，147.4(C-3′)，128.1(C-4′)，146.8(C-5′)，22.5(C-6′)，33.1(C-7′)，28.3(C-8′)，31.3(C-9′)，14.0(C-10′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[23]，故鑒定化合物10為vesiculosin。

化合物11無(wú)色油狀；ESI-MS：m/z259.10[M+H]，分子式為C12H18O6。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.55(2H，s，H-2，6)，4.10(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，3.90(6H，s，3-OMe，5-OMe)，3.72(1H，m，H-8)，3.55(1H，d，J=9.6 Hz，H-9a)，3.35(1H，m，H-9b)，3.27(3H，s，7-OMe)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：128.7(C-1)，103.9(C-2，6)，147.2(C-3，5)，134.6(C-4)，84.5(C-7)，75.6(C-8)，62.4(C-9)，56.4(3-OMe，5-OMe)，56.7(7-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[23]，故鑒定化合物11為threo-8S-7-methoxysyringylglycerol。

化合物12白色粉末；ESI-MS：m/z211.15[M+H]，分子式為C11H18N2O2。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.75(1H，br s，NH)，4.13(1H，t，J=7.8 Hz，H-9)，4.02(1H，dd，J=3.6，6.0 Hz，H-6)，3.57(2H，m，H-3)，1.01(3H，d，J=6.6 Hz，H-12)，0.96(3H，d，J=6.6 Hz，H-13)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：170.0(C-1)，45.5(C-3)，22.8(C-4)，28.1(C-5)，59.0(C-6)，166.1(C-7)，53.3(C-9)，38.6(C-10)，24.7(C-11)，21.2(C-12)，23.4(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[24]，故鑒定化合物12為cyclo(D)-pro-(D)-leu。

化合物13白色無(wú)定形粉末；ESI-MS：m/z273.15[M+H]，分子式為C13H20O6。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.56(2H，s，H-2′，6′)，4.21(1H，d，J=8.4 Hz，H-3)，3.90(6H，s，2×OMe)，3.70(2H，m，H-1)，3.59(1H，m，H-2)，3.37(2H，m，H-1")，1.09(3H，m，H-2")；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：62.4(C-1)，75.4(C-2)，82.6(C-3)，129.4(C-1′)，103.8(C-2′，6′)，147.2(C-3′，5′)，134.5(C-4′)，56.4(C-7′，8′)，64.4(C-1")，15.3(C-2")。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[25]，故鑒定化合物13為threo-3-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-ethoxypropane-1,2-diol。

化合物14白色無(wú)定形粉末；ESI-MS：m/z419.17[M+H]，分子式為C22H26O8。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：6.69(4H，m，H-2′，6′)，4.71(2H，d，J=5.4 Hz，H-2，6)，4.32(2H，dd，J=4.2，9.6 Hz，H-4b，8b)，3.94(2H，m，H-4α，8α)，3.74(12H，d，J=3.0 Hz，4×OMe)，2.63(2H，m，H-1，5)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：56.0(C-1，5)，84.1(C-2，6)，65.0(C-4，8)，56.4(4×OMe)，129.0(C-1′)，107.2(C-2′，6′)，148.2(C-3′，5′)，133.6(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[26]，故鑒定化合物14為(-)-丁香素脂酚。

化合物15黃色油狀物；ESI-MS：m/z377.17[M+H]，分子式為C20H24O7。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：8.05(1H，br s，Ar-OH)，7.05(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.98(2H，m，H-2′，5′)，6.87(1H，dd，J=1.8，6.6 Hz，H-6)，6.76(1H，dd，J=1.8，6.6 Hz，H-5)，6.70(1H，d，J=8.4 Hz，H-6′)，6.45(1H，d，J=15.0 Hz，H-7′)，6.26(1H，m，H-8′)，5.32(1H，d，J=3.6 Hz，OH)，4.85(1H，t，J=4.2 Hz，OH)，4.72(1H，m，H-7)，4.69(1H，m，OH)，4.26(1H，m，H-8)，4.10(2H，m，H-9′)，3.80(3H，s，OMe)，3.73(3H，s，OMe)，3.58(1H，m，H-9b)，3.24(1H，m，H-9a)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：133.4(C-1)，111.4(C-2)，147.4(C-3)，145.9(C-4)，115.1(C-5)，119.5(C-6)，71.3(C-7)，84.7(C-8)，60.5(C-9)，130.5(C-1′)，110.1(C-2′)，150.1(C-3′)，148.3(C-4′)，115.7(C-5′)，119.4(C-6′)，129.0(C-7′)，129.1(C-8′)，62.1(C-9′)，55.8，56.0(2×OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[27]，故鑒定化合物15為threo-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-{4-[(E)-3-hydroxy-1-propenyl]-2-methoxyphenoxy}-1,3-propanediol。

化合物1～15結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～15的化學(xué)結(jié)構(gòu)

2.2 體外細(xì)胞毒活性篩選

對(duì)天山假狼毒提取分離得到的15個(gè)化合物(50 μmol/L)進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，結(jié)果顯示在50 μmol/L時(shí)，化合物1、2、3和10對(duì)HGC-27細(xì)胞株的抑制率依次為92.0%、86.8%、87.28%、76.34%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示P<0.05，與空白組相比具有顯著差異，其對(duì)HGC-27細(xì)胞的IC50值分別為14.06、15.23、17.28、27.1 μmol/L(陽(yáng)性對(duì)照藥為順鉑，IC50值為8.9 μmol/L)，表明化合物1、2、3和10對(duì)HGC-27細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制活性(見表1)。

表1 化合物1～15對(duì)HGC-27的細(xì)胞毒活性

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)天山假狼毒進(jìn)行提取分離，共得到15個(gè)化合物，其中1～7、12～15均為首次從假狼毒屬植物中分離得到，并對(duì)15個(gè)化合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，結(jié)果顯示化合物1、2、3和10對(duì)HGC-27胃癌細(xì)胞具有一定的抑制活性。其中1、2、10為瑞香烷型二萜化合物，表明天山假狼毒中此類化合物可作為潛在的抗腫瘤藥物。由于天山假狼毒在新疆偏遠(yuǎn)地區(qū)被作為狼毒的混淆品或偽品使用，但國(guó)內(nèi)外對(duì)其研究文獻(xiàn)報(bào)道并不多，且療效機(jī)制研究也相對(duì)不足，因此我們通過(guò)研究，進(jìn)一步豐富了天山假狼毒的化學(xué)成分庫(kù)和抗腫瘤活性作用，為更好地開發(fā)利用該植物提供一定的理論基礎(chǔ)。