程銘，賈嬋維，馬延敏，劉英

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，北京 100026)

多囊卵巢綜合征(PCOS)為育齡女性最常見(jiàn)的生殖內(nèi)分泌疾病，是引起女性月經(jīng)紊亂、排卵障礙性不孕、高雄激素和胰島素抵抗的重要原因[1]。PCOS作為一種與多種代謝紊亂相關(guān)的復(fù)雜疾病，相關(guān)代謝紊亂引起的代謝物改變可能會(huì)影響卵巢卵泡[2]，其獨(dú)特的代謝特征往往反映在卵泡液組成中。常見(jiàn)的代謝性疾病可導(dǎo)致過(guò)度的脂肪分解使游離脂肪酸(FFA)水平升高，F(xiàn)FA是異常脂質(zhì)代謝的重要生物指標(biāo)[3]，在女性卵泡液中FFA含量的變化會(huì)影響卵母細(xì)胞的成熟和發(fā)育[4]，導(dǎo)致卵母細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的改變[5-6]。既往關(guān)于PCOS患者卵泡液的檢測(cè)，主要集中在運(yùn)用非靶向代謝組學(xué)獲取廣泛的代謝物類(lèi)別，有學(xué)者通過(guò)超高液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)發(fā)現(xiàn)脂肪酸類(lèi)代謝物表達(dá)存在差異[7]，而靶向代謝組學(xué)技術(shù)具有更高靈敏性和選擇性，可以在非靶向的基礎(chǔ)上定量分析特定的代謝物濃度[8]，從而對(duì)非靶向結(jié)果加以驗(yàn)證和擴(kuò)展[9]。

本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)高通量靶向定量檢測(cè)PCOS患者卵泡液中的FFA濃度，運(yùn)用單元與多元變量統(tǒng)計(jì)分析方法篩選與PCOS相關(guān)的差異FFA，通過(guò)分析可能參與的代謝通路，找到差異FFA的共上下調(diào)相關(guān)性，初步探索影響PCOS卵巢功能的相關(guān)因素，增加對(duì)PCOS患者發(fā)生的復(fù)雜代謝過(guò)程的了解，為預(yù)測(cè)和改善PCOS患者卵母細(xì)胞質(zhì)量和體外受精治療結(jié)局提供思路。

資料與方法

一、研究對(duì)象

選取2021年3月—12月在我院生殖醫(yī)學(xué)科接受體外受精/卵胞漿內(nèi)單精子注射(IVF/ICSI)治療的不孕患者(年齡<40歲)為研究對(duì)象。行IVF/ICSI治療的PCOS患者(13例)為PCOS組，其納入標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鹿特丹標(biāo)準(zhǔn)[10]并排除臨床表現(xiàn)與PCOS 類(lèi)似的非PCOS患者；對(duì)照組為平素月經(jīng)周期和排卵規(guī)律、因女性輸卵管因素和(或)男性因素行IVF/ICSI患者(8例)。兩組患者同時(shí)排除高催乳素血癥、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢早衰、卵巢缺如，且入組前1個(gè)月患者均未接受過(guò)性激素、胰島素、血糖代謝的藥物。本研究經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者在研究前均簽署知情同意。

二、主要試劑與儀器

1.主要試劑：硫酸甲醇溶液(Thermo，美國(guó))；正己烷(蘇州永華)；無(wú)水硫酸鈉(北京國(guó)藥集團(tuán))；水楊酸甲酯(TCI，日本)。

2.主要儀器：Thermo TG-FAME毛細(xì)管柱(Thermo，美國(guó))；TSQ 9000質(zhì)譜(Thermo，美國(guó))。

三、實(shí)驗(yàn)方法

1.樣本采集：經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)下穿刺取卵時(shí)收集無(wú)血染的卵泡液，3 000 轉(zhuǎn)/min 4 ℃離心10 min后分離上清，分裝入1.5 ml無(wú)菌離心管中，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.樣本預(yù)處理：吸取50 μl卵泡液于15 ml離心管中，加入2 ml 1 %硫酸甲醇溶液，充分混勻震蕩1 min，80℃水浴鍋中酯化30 min；取出后冷卻，加入1 ml正己烷萃取，振蕩混勻30 s，靜置5 min，加入5 ml H2O(4℃)洗滌，3 500轉(zhuǎn)/min 4 ℃ 離心10 min；吸取700 μl上清液于2 ml離心管中，加入100 mg無(wú)水硫酸鈉粉末除去多余水分，振蕩混勻30 s，12 000轉(zhuǎn)/min離心5 min；吸取300 μl上清液于2 ml離心管中，加入15 μl 500 ppm水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)，振蕩混勻10 s；吸取200 μl上清液加入到檢測(cè)瓶中待檢測(cè)。所有樣本均間隔數(shù)針隨行質(zhì)量控制(QC)檢測(cè)。

3.GC-MS檢測(cè)：色譜柱使用Thermo TG-FAME毛細(xì)管柱(50 m×0.25 mm ID×0.20 μm，Trace 1300)；進(jìn)樣量1 μl，分流比8∶1。進(jìn)樣口溫度250 ℃，離子源溫度300 ℃，傳輸線(xiàn)溫度280 ℃。程序升溫起始溫度80 ℃，保持1 min；以20 ℃/min升至160 ℃，保持1.5 min；以3℃/min升至196℃，保持8.5 min；最后以20 ℃/min升至250 ℃，保持3 min。載氣為氦氣，載氣流速0.63 ml/min。質(zhì)譜使用電子轟擊電離源，SIM掃描模式，電子能量70 eV。

4.數(shù)據(jù)采集和預(yù)處理：按照上述GC-MS條件對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品出峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算線(xiàn)性回歸方程，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行定性和換算處理。數(shù)據(jù)從下機(jī)的raw格式通過(guò)Xcalibur軟件轉(zhuǎn)置成CDF格式進(jìn)行后續(xù)的數(shù)據(jù)分析。其中采用主成分分析法(PCA)通過(guò)主成分對(duì)各組數(shù)據(jù)歸類(lèi)，從而直觀反映各個(gè)樣本的聚集和離散程度；結(jié)合正交偏最小二乘法-判別分析法(OPLS-DA)對(duì)樣本進(jìn)行指定并分組，對(duì)數(shù)據(jù)降維的同時(shí)結(jié)合回歸模型并進(jìn)行判別分析，從而使FFA的組間差異可視化，并經(jīng)其置換檢驗(yàn)評(píng)估檢驗(yàn)?zāi)Ｐ褪欠翊嬖谶^(guò)擬合現(xiàn)象。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過(guò)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對(duì)兩組樣本的每個(gè)變量進(jìn)行計(jì)算求P值，當(dāng)0.01≤P<0.05則認(rèn)為有顯著差異，當(dāng)P<0.01則認(rèn)為有極顯著差異。用Pearson相關(guān)對(duì)兩組樣本的差異FFA開(kāi)展相關(guān)性分析，用r反映兩個(gè)變量的相關(guān)性程度。r的絕對(duì)值越接近1，表示兩變量之間直線(xiàn)聯(lián)系越密切；當(dāng)r為負(fù)值時(shí)，表示兩個(gè)變量的變化方向相反，稱(chēng)為負(fù)相關(guān)；當(dāng)r為正值時(shí)，表示兩個(gè)變量的變化方向一致，稱(chēng)為正相關(guān)。將原始定量數(shù)據(jù)導(dǎo)入R軟件進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析處理。運(yùn)用OriginPro 2022(OriginLab Corporation，Northampton，MA，美國(guó))軟件分別繪制火山圖、層次聚類(lèi)分析熱圖和相關(guān)熱圖，數(shù)據(jù)分析流程見(jiàn)圖1。

圖1 數(shù)據(jù)分析流程圖

結(jié) 果

一、主成分分析(PCA)

PCA得分圖可直觀地觀察樣本的聚集和離散程度，樣本分布點(diǎn)越靠近，說(shuō)明這些樣本中所含變量的組成和濃度越接近；反之，樣本點(diǎn)分布越遠(yuǎn)離，其所含變量的組成和濃度差異越大。在該P(yáng)CA得分圖(圖2)中每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)對(duì)應(yīng)的樣本，兩組卵泡液樣本的點(diǎn)分別聚集在一起，說(shuō)明兩組卵泡液樣本的各個(gè)樣本之間的相似性非常高，且兩組卵泡液樣本對(duì)應(yīng)的散點(diǎn)在組內(nèi)呈現(xiàn)互相聚集的現(xiàn)象，說(shuō)明組內(nèi)的重復(fù)性較好，樣本數(shù)據(jù)非常相似，組間具有較好的區(qū)分度。

紅色圓點(diǎn)代表對(duì)照組患者的卵泡液樣本，綠色圓點(diǎn)代表PCOS組患者的卵泡液樣本。

二、OPLS-DA分析結(jié)果

正交偏最小二乘法-判別分析法(OPLS-DA)使用正交信號(hào)校正技術(shù)，在不降低模型預(yù)測(cè)能力的前提下，過(guò)濾掉樣本中與模型分類(lèi)不相關(guān)的正交信號(hào)，從而使FFA的組間差異可視化。各卵泡液樣本的OPLS-DA得分圖結(jié)果顯示，PCOS組和對(duì)照組組內(nèi)分布均勻，組間FFA分布具有差異性(圖3)。為防止檢驗(yàn)?zāi)Ｐ统霈F(xiàn)過(guò)擬合，對(duì)其進(jìn)行OPLS-DA的置換檢驗(yàn)(Permutation test of OPLS-DA)，結(jié)果如圖4所示，R2Y為模型Y變量的可解釋度，其值越接近1，說(shuō)明建立的模型符合樣本的真實(shí)情況；R2X值代表模型可解釋的變量；Q2值為通過(guò)交叉驗(yàn)證計(jì)算得出的用以評(píng)價(jià)模型的預(yù)測(cè)能力，其值越接近0.5，說(shuō)明該模型的可預(yù)測(cè)性越好。該圖中Q2值的回歸線(xiàn)在Y軸上的截距小于0說(shuō)明該模型具有良好的穩(wěn)定性，不存在過(guò)擬合現(xiàn)象。

紅色三角形代表對(duì)照組，綠色加號(hào)代表PCOS組。橫坐標(biāo)表示主要成分得分值(Tp)，反映組間的差異；縱坐標(biāo)表示正交主成分得分值(TO)，反映組內(nèi)樣本間的差異。

橫坐標(biāo)表示置換檢驗(yàn)得到的分組變量與原始分組變量的相關(guān)性，縱坐標(biāo)表示R2Y及Q2值，綠色圓點(diǎn)表示置換檢驗(yàn)得到的R2Y值，藍(lán)色方點(diǎn)表示置換檢驗(yàn)得到的Q2值，兩條虛線(xiàn)分別表示R2Y及Q2值的回歸線(xiàn)。

三、PCOS患者卵泡液差異FFA的篩選

以獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對(duì)兩組卵泡液樣本的每個(gè)變量進(jìn)行計(jì)算求得的P值小于0.05，同時(shí)兩組樣本表達(dá)差異倍數(shù)(FC)值大于1.2為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)PCOS患者卵泡液中的差異FFA進(jìn)行篩選。結(jié)果以火山圖的形式可視化呈現(xiàn)?；鹕綀D中的每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)FFA，橫坐標(biāo)表示PCOS組比對(duì)照組的差異表達(dá)倍數(shù)(取以2為底的對(duì)數(shù))，點(diǎn)越偏離中心表示差異倍數(shù)越大；縱坐標(biāo)表示經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)的P值(取以10為底的對(duì)數(shù))，點(diǎn)越靠近圖頂部表示差異越顯著。結(jié)果表明，在PCOS患者卵泡液中篩選出28種差異FFA，其中有21種FFA上調(diào)表達(dá)(P<0.05，F(xiàn)C>1.2)，有7種FFA下調(diào)表達(dá)(P<0.05，F(xiàn)C>1.2)(圖5)。我們對(duì)每批卵泡液間隔數(shù)針隨行質(zhì)量控制(QC)檢測(cè)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值計(jì)算所有QC的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，來(lái)評(píng)價(jià)方法的穩(wěn)定性，所有樣本均質(zhì)檢合格(圖6)。

紅色表示顯著上調(diào)的FFA，藍(lán)色表示顯著下調(diào)的FFA，灰色表示非顯著差異的FFA。

圖6 質(zhì)量控制總離子流色譜圖

四、PCOS患者卵泡液中差異FFA的鑒定

對(duì)差異FFA的定量值做層次聚類(lèi)(hierarchical clustering)分析，結(jié)果以熱圖的形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，PCOS組患者卵泡液中的己酸(C6：0)、十一烷酸(C11：0)、十三烷酸(C13：0)、反-9-肉豆蔻烯酸(C14：1T)、順-9-棕櫚油酸(C16：1)、十七烷酸(C17：0)、異油酸(C18：1N7)、亞油酸(C18：2N6)、γ-亞麻酸(C18：3N6)、α-亞麻酸(C18：3N3)、二十一烷酸(C21：0)、山崳酸(C22：0)、HOMO-γ-亞麻酸(C20：3N6)、巴惟酸(C22：1N9T)、順-11，14，17-二十碳三烯酸(C20：3N3)、花生四烯酸(C20：4N6)、二十三烷酸(C23：0)、順-13，16-二十二碳二烯酸(C22：2)、木蠟酸(C24：0)、順-7，10，13，16-二十二碳四烯酸(C22：4)、DPA(C22：5N3)水平顯著上調(diào)(P<0.05)，而月桂酸(C12：0)、順-9-肉豆蔻烯酸(C14：1)、反-10-十五烯酸(C15：1T)、順-10-十五烯酸(C15：1)、反油酸(C18：1N9T)、反-11-二十碳烯酸(C20：1T)、順-11-二十碳烯酸(C20：1)水平顯著下調(diào)(P<0.05)(圖7)。

橫坐標(biāo)為樣本名，代表不同實(shí)驗(yàn)分組，每一列代表一個(gè)樣本；縱坐標(biāo)為差異FFA；圖中FFA的相對(duì)含量大小通過(guò)不同顏色呈現(xiàn)。標(biāo)尺示差異FFA的相對(duì)表達(dá)量的高低，顏色越紅表示該FFA的表達(dá)量越低，顏色越藍(lán)表示該FFA的表達(dá)量越高。

五、差異FFA的代謝通路分析

為進(jìn)一步探索PCOS患者卵泡液中差異FFA的變化與代謝通路之間的關(guān)系，通過(guò)MetaboAnalyst5.0對(duì)得到的差異FFA以SMPDB代謝物數(shù)據(jù)庫(kù)為背景進(jìn)行相關(guān)代謝通路的富集分析，從而篩選出與FFA差異相關(guān)性最高的關(guān)鍵通路。代謝通路分析的結(jié)果以氣泡圖的形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示，差異FFA匹配到與脂肪酸代謝密切相關(guān)的6條通路，分別是α-亞麻酸和亞油酸代謝、超長(zhǎng)鏈脂肪酸的β-氧化、脂肪酸生物合成、短鏈飽和脂肪酸的線(xiàn)粒體β-氧化、中鏈飽和脂肪酸的線(xiàn)粒體β-氧化、花生四烯酸代謝(圖8)。

縱坐標(biāo)為每一個(gè)氣泡對(duì)應(yīng)的代謝通路名稱(chēng)，橫坐標(biāo)為P值，-log10(p-value)值越大，P值越小。氣泡越大代表富集到該通路的FFA數(shù)目越多，氣泡顏色反映P值大小。

六、差異FFA的相關(guān)性分析

通過(guò)計(jì)算兩組差異FFA兩兩之間的Pearson相關(guān)系數(shù)來(lái)分析各個(gè)代謝物之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示，PCOS卵泡液中表達(dá)上調(diào)的己酸(C6：0)、十一烷酸(C11：0)、十三烷酸(C13：0)、十七烷酸(C17：0)之間，異油酸(C18：1N7)、亞油酸(C18：2N6)、γ-亞麻酸(C18：3N6)、α-亞麻酸(C18：3N3)之間，HOMO-γ-亞麻酸(C20：3N6)、花生四烯酸(C20：4N6)、木蠟酸(C24：0)、DPA(C22：5N3)之間均具有顯著正相關(guān)性(P<0.05)；PCOS卵泡液中表達(dá)下調(diào)的月桂酸(C12：0)、順-9-肉豆蔻烯酸(C14：1)、反-10-十五烯酸(C15：1T)、順-10-十五烯酸(C15：1)、反油酸(C18：1N9T)、反-11-二十碳烯酸(C20：1T)、順-11-二十碳烯酸(C20：1)之間均具有顯著正相關(guān)性(P<0.05)；上調(diào)的己酸(C6：0)、十一烷酸(C11：0)、十三烷酸(C13：0)、十七烷酸(C17：0)與下調(diào)的差異FFA之間有顯著負(fù)相關(guān)性(P<0.05)(圖9)。

橫縱坐標(biāo)代表兩組差異FFA，不同位置色塊顏色深淺代表對(duì)應(yīng)坐標(biāo)的兩個(gè)代謝物的相關(guān)系數(shù)大小，紅色代表正相關(guān)，藍(lán)色代表負(fù)相關(guān)，×代表非顯著相關(guān)性。

討 論

卵巢是卵母細(xì)胞發(fā)育和排出、分泌性激素的重要生殖器官。卵泡液是卵母細(xì)胞在體內(nèi)發(fā)育中的微環(huán)境，其組成包括卵泡生長(zhǎng)和卵母細(xì)胞成熟所必需的成分以及卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞排泄的代謝物[11-12]。卵泡液的代謝組成可能反映卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞的質(zhì)量[13]。低生育力可能會(huì)導(dǎo)致正常的生理代謝失衡，引入代謝組學(xué)技術(shù)能更好地在分子水平上評(píng)估女性生育力，了解卵母細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的代謝變化，以期提高卵母細(xì)胞的質(zhì)量，從而獲得優(yōu)質(zhì)胚胎[14]，進(jìn)而有助于改善輔助生殖治療結(jié)局[15]。目前對(duì)卵母細(xì)胞的質(zhì)量評(píng)估主要基于對(duì)卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體的形態(tài)學(xué)觀察，具有人為觀察和鑒定的主觀性；而卵泡液在IVF治療過(guò)程中容易獲得，且非侵入性的代謝組學(xué)檢測(cè)技術(shù)可識(shí)別與疾病特定表型相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物和代謝途徑，可作為預(yù)測(cè)卵母細(xì)胞質(zhì)量的指標(biāo)以及補(bǔ)充對(duì)胚胎形態(tài)學(xué)的評(píng)估，進(jìn)而深入了解其背后的機(jī)制[8]。

既往研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者血清中的代謝異常與FFA、溶血磷脂等脂質(zhì)代謝異常相關(guān)[16-18]，同時(shí)PCOS患者的卵泡液也具有其獨(dú)特的代謝特征[19]。有報(bào)道在PCOS患者卵泡液中鑒定出21種不同的代謝物，其中與脂肪酸代謝障礙相關(guān)的肉堿合成途徑是其關(guān)鍵代謝途徑之一，可誘發(fā)脂肪酸代謝功能障礙的7β-羥基膽固醇[20]可能是PCOS的一種潛在代謝標(biāo)志物[21]。本研究采用GC-MS技術(shù)高通量靶向定量檢測(cè)PCOS患者和非PCOS患者卵泡液中FFA的濃度，通過(guò)單元和多元變量統(tǒng)計(jì)分析篩選出28種差異表達(dá)的FFA，其中有21種差異FFA表達(dá)上調(diào)，包括異油酸、亞油酸、γ-亞麻酸、α-亞麻酸、花生四烯酸等，7種差異FFA表達(dá)下調(diào)，包括月桂酸、順-9-肉豆蔻烯酸、反油酸等，進(jìn)一步驗(yàn)證了PCOS患者卵泡液中存在FFA的代謝變化且FFA濃度并非只升高不降低，這為既往的研究結(jié)果進(jìn)行了補(bǔ)充[4]。

FFA水平的升高被認(rèn)為是女性生育力低下的重要因素。PCOS患者卵泡液中濃度升高的FFA與形態(tài)不佳的卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體之間存在關(guān)聯(lián)[22]，表明過(guò)量的FFA會(huì)對(duì)卵泡的功能產(chǎn)生不利影響。既往研究表明，升高的FFA不僅會(huì)干擾葡萄糖代謝，也影響胰島素受體及其信號(hào)傳導(dǎo)，F(xiàn)FA是引起胰島素抵抗的最主要非激素物質(zhì)之一[23]。PCOS患者卵泡液中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，可利用葡萄糖減少，從而啟動(dòng)脂肪酸等代謝途徑來(lái)代償能量供應(yīng)不足，而這些代償機(jī)制會(huì)造成卵泡液中脂類(lèi)、酮體等水平的改變[24]。這可能是PCOS患者卵母細(xì)胞質(zhì)量較差的原因。Mu等[25]研究證明，飽和脂肪酸如棕櫚酸和硬脂酸通過(guò)誘導(dǎo)人卵巢顆粒細(xì)胞凋亡從而使細(xì)胞死亡；而多不飽和脂肪酸如花生四烯酸即使在超生理濃度下對(duì)細(xì)胞存活無(wú)影響，反而對(duì)棕櫚酸和硬脂酸誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用。這提示FFA對(duì)顆粒細(xì)胞存活的影響可能參與生殖異常的機(jī)制。此外，花生四烯酸及其衍生物的釋放在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中受到卵泡刺激素和黃體生成素的調(diào)節(jié)[26]。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)在PCOS卵泡液中異油酸、亞油酸、γ-亞麻酸、α-亞麻酸、花生四烯酸等表達(dá)上調(diào)，且通過(guò)差異FFA富集到α-亞麻酸和亞油酸代謝、花生四烯酸代謝等代謝通路，結(jié)合上述研究，表明這些代謝途徑可能參與導(dǎo)致PCOS患者不良生殖結(jié)局的機(jī)制。

作為人體必需脂肪酸的α-亞麻酸和亞油酸需維持在一定的生理水平，且飽和/不飽和脂肪酸的比例也可能會(huì)影響到卵母細(xì)胞的發(fā)育能力[4]。Niu等[6]研究結(jié)果顯示，油酸、棕櫚酸、硬脂酸、十一烷酸、肉豆蔻烯酸和亞油酸是卵泡液中主要的FFA；PCOS患者的卵泡液中兩種長(zhǎng)鏈脂肪酸(棕櫚酸和油酸)水平明顯升高，肥胖PCOS患者卵泡液中亞油酸濃度高于非肥胖PCOS患者和非PCOS患者。這些結(jié)果表明，卵泡細(xì)胞以不同的速率代謝特定的FFA，一些FFA可能會(huì)被優(yōu)先運(yùn)輸?shù)铰雅葜羞M(jìn)行分解代謝。在本研究中，PCOS患者卵泡液中表達(dá)上調(diào)的FFA之間存在共上調(diào)關(guān)系，表達(dá)下調(diào)的FFA之間存在共下調(diào)關(guān)系，同時(shí)一些表達(dá)上調(diào)的FFA與表達(dá)下調(diào)的FFA之間存在顯著負(fù)相關(guān)，說(shuō)明活躍的機(jī)體代謝活動(dòng)遠(yuǎn)比單一的代謝不平衡所能解釋的要復(fù)雜得多[11，27-28]。因此，研究多類(lèi)化合物組合預(yù)測(cè)生殖結(jié)局至關(guān)重要，代謝組學(xué)讓我們更加全面了解發(fā)育中的卵母細(xì)胞和胚胎的營(yíng)養(yǎng)情況以及女性生殖內(nèi)環(huán)境，這對(duì)診斷和改善生育治療的結(jié)局具有潛在影響。

綜上所述，本研究建立了基于高通量靶向代謝組學(xué)技術(shù)篩選卵泡液中差異FFA的方法。我們發(fā)現(xiàn)，與非PCOS患者相比，PCOS患者的卵泡液中有28種FFA水平發(fā)生變化，其中有21種FFA表達(dá)水平上調(diào)，7種FFA表達(dá)水平下調(diào)，且存在表達(dá)上調(diào)的FFA相互間共上調(diào)、表達(dá)下調(diào)的FFA相互間共下調(diào)的關(guān)系。結(jié)果提示PCOS患者部分脂肪酸的代謝改變可能會(huì)影響卵泡生長(zhǎng)的微環(huán)境，影響卵巢功能。此外通過(guò)相關(guān)代謝通路的富集分析，初步探索PCOS患者體內(nèi)可能參與的重要脂肪酸代謝通路，對(duì)未來(lái)尋找影響卵母細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的信號(hào)通路有指向作用。