王 璐 耿 岳 何沛橋 史小萌 徐亞平

（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全環(huán)境因子控制重點實驗室，國家農(nóng)業(yè)檢測基準(zhǔn)實驗室（農(nóng)藥殘留），天津 300191）

能力驗證是指利用實驗室間比對，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加者的能力。其作為評價實驗室檢測能力、促進(jìn)檢測結(jié)果互認(rèn)共享的技術(shù)措施和有效途徑，受到世界各國政府以及國際組織的廣泛認(rèn)可，也是實驗室質(zhì)量控制的重要手段之一[1～2]。農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，但由于不合理使用等原因造成的生態(tài)環(huán)境風(fēng)險和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問題也受到了全社會的廣泛關(guān)注[3～4]。國家通過頒布《中華人民共和國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》《中華人民共和國食品安全法》等法律法規(guī)、定期修訂《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》等方式，不斷加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管。為評估實驗室農(nóng)藥殘留檢測能力，本研究對48家檢測實驗室的普通白菜中腐霉利等農(nóng)藥殘留檢測能力進(jìn)行測試，并對測試結(jié)果進(jìn)行討論分析。

一、材料與方法

（一）材料與試劑3種農(nóng)藥制劑（45%毒死蜱乳油、50%腐霉利可濕性粉劑、3%克百威顆粒劑）；毒死蜱、腐霉利和克百威等3種國家農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)［1 000 mg/L，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心（天津）］；乙腈（色譜純，美國Thermo Fisher公司）；QuEChERS整合管+試劑包（北京本立科技有限公司）。

（二）儀器與設(shè)備AB SCIEX 4500 QTRAP液相色譜四極桿串聯(lián)線性離子阱質(zhì)譜儀（美國AB SCIEX公司）；本立SiO－6512 QuEChERS自動樣品制備系統(tǒng)（北京本立科技有限公司）；R30立式剁碎攪拌機(jī) （法國Robot Coupe公司）；Quintix 224－1CN電子分析天平（美國Sartorius公司）。

（三）樣品制備

1.樣品制備流程。能力驗證樣品采用實際種植方式進(jìn)行制備。根據(jù)擬考核濃度水平，結(jié)合噴藥附著水平、農(nóng)藥半衰期、樣品基質(zhì)種植面積和生長情況等，按“實際用藥量＝（擬考核濃度×種植面積）/（施藥系數(shù)×原藥含量）”設(shè)計3種農(nóng)藥的施藥方案（見表1）。將所需農(nóng)藥溶于10 L水中，使用噴藥器均勻噴施在作物上。施藥1 d后采摘全部樣品，在實驗室將樣品粉碎混勻，制備成能力驗證樣品，置于－70℃條件下保存。能力驗證質(zhì)量控制流程見圖1。

圖1 能力驗證質(zhì)量控制流程

表1 3種農(nóng)藥的施藥方案

2.能力驗證樣品中3種農(nóng)藥殘留量的測定。樣品前處理：對能力驗證樣品進(jìn)行檢驗時參照GB23200.121－2021標(biāo)準(zhǔn)方法中的QuEChERS前處理方法進(jìn)行樣品提取和凈化[5]。稱取10 g樣品于QuEChERS整合管中，再加入10 mL乙腈和1顆陶瓷均質(zhì)子并立即加入配套試劑包，使用QuECh-ERS自動樣品制備系統(tǒng)進(jìn)行樣品前處理。處理過程完成后，取1 mL凈化液過0.22 μm濾膜后，濾液供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。

液相色譜條件：色譜柱為Waters ACQUITY UPLC HSS T3柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫為40℃；流速為0.3 mL/min；進(jìn)樣量為2 μL；流動相A為2 mmol/L甲酸銨－甲酸水溶液，流動相B為2 mmol/L甲酸銨－甲酸甲醇溶液；梯度洗脫程序見表2。

表2 梯度洗脫條件

質(zhì)譜條件：電離模式為電噴霧離子源正離子模式（ESI+）；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；毛細(xì)管電壓為3 500V；脫溶劑氣溫度為450℃；脫溶劑氣流速為800 L/h；3種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)見表3。

表3 3種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

3.能力驗證樣品的均勻性和穩(wěn)定性檢驗。按照CNAS－GL003：2018《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》中規(guī)定的方法對能力驗證樣品進(jìn)行均勻性檢驗[6]。從制備的能力驗證樣品中隨機(jī)抽取15個樣品，按照上文確定的檢測方法，每個樣品在重復(fù)性條件下測定3次，采用CNAS－GL003：2018中“4.2單因子方差分析”對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，判斷能力驗證樣品的均勻性。

能力驗證樣品的穩(wěn)定性檢驗需要考慮兩方面情況，一是在實驗室適當(dāng)保存條件下的長期穩(wěn)定性檢驗，二是樣品寄送運輸條件下的短期穩(wěn)定性檢驗。為減少穩(wěn)定性評估各時間點測量結(jié)果的離散性，引入更小的不確定度，采用同步穩(wěn)定性評估方法，將制備的能力驗證樣品統(tǒng)一保存在－70℃超低溫條件下，按照穩(wěn)定性評估先疏后密原則確定時間間隔，定期取樣，在重復(fù)性條件下一次性測定。采用CNAS－GL003：2018中“5.2t檢驗法”對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，判斷能力驗證樣品的穩(wěn)定性。

準(zhǔn)備5份－70℃條件下保存的能力驗證樣品，分別于第0、8、12和14 d各取出1份放置于－20℃條件下，并于第15 d取出全部5份樣品，每份樣品按照上文確定的檢測方法平行測定6次，用于評估長期穩(wěn)定性。另外準(zhǔn)備5份能力驗證樣品，按照寄樣要求（樣品加冰袋放置于外套紙板箱的泡沫箱中）包裝后，放置于－70℃條件下保存。分別于第0、1、2和3 d各取出1份放置于30℃恒溫箱中，模擬樣品寄送過程環(huán)境條件，并于第7 d取出全部5份樣品，每份樣品按照上文確定的檢測方法平行測定6次，用于評估短期穩(wěn)定性。對測定結(jié)果按公式（1）進(jìn)行t檢驗。

（四）能力驗證結(jié)果評定方法根據(jù)CNASGL002：2018《能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南》要求，本次能力驗證采用穩(wěn)健統(tǒng)計方法計算各參加實驗室的Z比分?jǐn)?shù)，以穩(wěn)健統(tǒng)計的實驗室檢測結(jié)果中位值作為指定值（X），標(biāo)準(zhǔn)化四分位距（NIQR）為能力評定標(biāo)準(zhǔn)差計算方法見公式（2）和公式（3）。

公式（2）和公式（3）中，xi為第i個實驗室的檢測結(jié)果；Q1為下四分位數(shù)；Q3為上四分位數(shù)。

若檢測結(jié)果的Z比分?jǐn)?shù)均滿足|Z|≤2，則判定該檢測結(jié)果為滿意；若2＜|Z|＜3，則判定該檢測結(jié)果存在問題；若|Z|≥3，則判定該檢測結(jié)果不滿意。

二、結(jié)果與分析

（一）能力驗證樣品的均勻性檢驗結(jié)果均勻性檢驗結(jié)果見表4。其中，樣品間自由度為14，樣品內(nèi)自由度為30，F(xiàn)（0.05，14，30）＝2.31。由表4中數(shù)據(jù)可知， 統(tǒng)計量F值均小于F（0.05，14，30）， 說明能力驗證樣品的均勻性良好。

表4 均勻性檢驗統(tǒng)計結(jié)果

（二）能力驗證樣品的穩(wěn)定性檢驗結(jié)果

1.長期穩(wěn)定性。長期穩(wěn)定性檢驗結(jié)果見表5。其中，自由度為5，置信水平為0.95，t（0.05，5）＝2.57。由 表5中 數(shù) 據(jù) 可 知， 統(tǒng) 計 量tmax值 均 小 于t（0.05，5），說明能力驗證樣品在－20℃條件下15 d內(nèi)的長期穩(wěn)定性良好。

表5 長期穩(wěn)定性檢驗統(tǒng)計結(jié)果

2.短期穩(wěn)定性。短期穩(wěn)定性檢驗結(jié)果見表6。其中，自由度為5，置信水平為0.95，t（0.05，5）＝2.57。由表6中數(shù)據(jù)可知， 統(tǒng)計量tmax值均小于t（0.05，5），說明能力驗證樣品在模擬寄送環(huán)境條件下7 d內(nèi)的短期穩(wěn)定性良好。

表6 短期穩(wěn)定性檢驗統(tǒng)計結(jié)果

（三）能力驗證結(jié)果

1.參加實驗室情況。本次能力驗證共有48家實驗室參加，分布在13個?。ㄗ灾螀^(qū)）。按實驗室類型分，包括26家各級檢驗檢測機(jī)構(gòu)、20家檢測公司和2家科研單位實驗室。參加實驗室的分布區(qū)域較廣、類型較多、層次分散，能夠在一定程度上反映本次能力驗證項目的真實執(zhí)行水平，有助于實驗室技術(shù)能力水平的整體提升。

2.能力驗證結(jié)果。對48家實驗室上報的276項檢測結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計（見表7），以實驗室Z比分?jǐn)?shù)柱狀圖表示各參加實驗室Z比分?jǐn)?shù)（見圖2）。結(jié)果顯示，能力驗證結(jié)果統(tǒng)計的中位值與施藥方案中的擬考核濃度間相對相差為0～17.4%，表明能力驗證樣品制備過程的施藥方案設(shè)計較為合理，樣品能夠滿足能力驗證考核需要；能力驗證結(jié)果統(tǒng)計的標(biāo)準(zhǔn)化四分位距占相對應(yīng)參數(shù)的統(tǒng)計中位值比例為5.2%～14.1%，表明能力驗證結(jié)果評定原則合理，能力驗證結(jié)果科學(xué)、可靠；在Z比分?jǐn)?shù)的統(tǒng)計中，共有233項滿意結(jié)果、19項存在問題結(jié)果和24項不滿意結(jié)果。

圖2 Z比分?jǐn)?shù)分布情況

表7 檢測結(jié)果統(tǒng)計量匯總

（四）存在的主要問題

1.算不準(zhǔn)——檢測結(jié)果校準(zhǔn)方法應(yīng)用不當(dāng)。檢測結(jié)果校準(zhǔn)時，樣品實際含量與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度差異過大，或超出校準(zhǔn)曲線濃度線性范圍；校準(zhǔn)曲線濃度點位不足5個、相關(guān)系數(shù)偏低、曲線線性存在系統(tǒng)偏差等。

2.控不住——檢測質(zhì)量控制措施不合理。質(zhì)量控制措施不合理，質(zhì)控樣品與檢測樣品狀態(tài)差異較大；未按檢測方法要求（如用重復(fù)性限、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對相差等指標(biāo)）科學(xué)評價質(zhì)控結(jié)果；質(zhì)控結(jié)果直接用于檢測結(jié)果校準(zhǔn)。

3.用不對——檢測方法隨意變更，儀器設(shè)備操作使用不熟練。檢測方法標(biāo)準(zhǔn)超范圍使用；隨意變更稱樣量、定容體積、前處理方法等檢測方法標(biāo)準(zhǔn)中的關(guān)鍵技術(shù)內(nèi)容；儀器設(shè)備狀態(tài)不佳、存在干擾，或出現(xiàn)異常情況未處理仍進(jìn)行測定分析。

4.追不回——信息不完善，檢測結(jié)果無法溯源。原始記錄中缺少檢測結(jié)果計算公式，或缺失計算公式中的部分關(guān)鍵信息，如稱樣量、提取液體積、標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度等，導(dǎo)致檢測結(jié)果溯源鏈條不完整，無法復(fù)現(xiàn)檢測過程；未按規(guī)范準(zhǔn)確記錄過程量值，有效數(shù)位和數(shù)字修約有誤。

（五）檢測過程關(guān)鍵控制點

1.檢測人員。人員是檢測過程的第一主體，檢測人員的能力直接關(guān)系到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和可靠性[9～10]。實驗室應(yīng)建立專門的人員管理程序，明確人員的能力要求，并通過持續(xù)開展技能培訓(xùn)，有效實施過程監(jiān)督，確保檢測人員熟悉實驗室體系文件運行程序、儀器設(shè)備操作流程方法、檢測方法標(biāo)準(zhǔn)原理和操作步驟、檢測過程質(zhì)量控制措施和評價要求等，以實現(xiàn)技術(shù)能力與檢測任務(wù)相匹配。

2.儀器設(shè)備。檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和有效性受檢測過程使用的儀器設(shè)備和各種計量器具的直接影響[11～12]。實驗室應(yīng)對所有涉及計量溯源的儀器和計量器具進(jìn)行檢定/校準(zhǔn)，并對檢定/校準(zhǔn)結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)，同時制定科學(xué)、完善的期間核查計劃并認(rèn)真實施，確保儀器設(shè)備和計量器具滿足檢測任務(wù)需求，且在檢定/校準(zhǔn)周期內(nèi)性能穩(wěn)定，持續(xù)處于正常工作狀態(tài)。

3.檢測物料。實驗室應(yīng)針對檢測使用的各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、試劑耗材等建立合格供應(yīng)商評價機(jī)制，定期評估供應(yīng)商服務(wù)水平，并對每批次購買的檢測物料進(jìn)行質(zhì)量驗收，合格后方可投入使用。同時，檢測物料在投入使用前，應(yīng)根據(jù)使用目的進(jìn)行相應(yīng)的處理，如樣品前處理用的氯化鈉，應(yīng)經(jīng)140℃烘烤4 h處理后，方可使用。

4.檢測方法。檢測方法的合理性是檢測結(jié)果質(zhì)量的重要保障。實驗室應(yīng)綜合衡量不同檢測方法對檢測結(jié)果的影響因素，選擇適當(dāng)?shù)臋z測方法標(biāo)準(zhǔn)開展檢測任務(wù)，并對標(biāo)準(zhǔn)有效性進(jìn)行確認(rèn)和管理，確保所選檢測方法有效、可控。同時，在檢測過程中嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作步驟和要求執(zhí)行，任何變更均應(yīng)經(jīng)技術(shù)確認(rèn)和程序?qū)徟?，以確保檢測結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。

5.環(huán)境條件。開展檢測工作時，需要對實驗室環(huán)境條件進(jìn)行監(jiān)控，確認(rèn)檢驗檢測環(huán)境不會對檢測結(jié)果造成不良影響，且不會引發(fā)健康風(fēng)險或造成環(huán)境污染。如樣品稱量時應(yīng)減少空氣流通，避免造成測量結(jié)果漂移；樣品前處理時應(yīng)確保通風(fēng)良好，避免檢測結(jié)果受影響或造成樣品交叉污染；儀器設(shè)備運行時需控制溫濕度條件，確保儀器設(shè)備正常運行。

三、結(jié)論

本研究對48家實驗室的普通白菜中農(nóng)藥殘留檢測能力進(jìn)行了測試。為了科學(xué)、真實反映各參加實驗室的實際檢測能力，采用實際種植方式制備能力驗證樣品，并按照CNAS－GL003：2018的要求對樣品均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行測試，確認(rèn)樣品測試合格。采用穩(wěn)健統(tǒng)計方法計算各參加實驗室的Z比分?jǐn)?shù)，結(jié)果顯示測試結(jié)果的滿意率為84.4%。通過歸納、分析各參加實驗室的結(jié)果記錄，發(fā)現(xiàn)部分實驗室在檢測結(jié)果校準(zhǔn)、檢測質(zhì)量控制、檢測方法應(yīng)用和檢測數(shù)據(jù)溯源等方面存在一定的問題，并從“人、機(jī)、料、法、環(huán)”5個方面提出了控制建議。