龐金雪

（德州市陵城區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，山東 德州， 253500）

習(xí)慣性流產(chǎn)又有“復(fù)發(fā)性流產(chǎn)”之稱，臨床將妊娠不足28周、自然流產(chǎn)次數(shù)超過(guò)2次以及胎兒體質(zhì)量不足1 000 g的妊娠者稱為習(xí)慣性流產(chǎn)。遺傳因素、內(nèi)分泌失調(diào)等均都參與了該病的發(fā)生過(guò)程，但其中發(fā)病原因不明的患者，占60%，因此臨床就將其納入“不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)”。臨床研究發(fā)現(xiàn)，在維持正常妊娠過(guò)程中，母體免疫耐受、其他免疫調(diào)節(jié)具有至關(guān)重要的作用，同時(shí)封閉抗體還可以阻止免疫系統(tǒng)造成的損害?？梢?jiàn)，實(shí)施淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療效果顯著，可避免流產(chǎn)，提高妊娠率。

習(xí)慣性流產(chǎn)原因較為復(fù)雜，該病的發(fā)生與母體內(nèi)分泌、免疫、染色體等多方面因素密切相關(guān)，已有研究明確指出，造成習(xí)慣性流產(chǎn)的最主要因素是免疫因素，習(xí)慣性流產(chǎn)患者的免疫因素以封閉抗體缺乏最為典型和關(guān)鍵。因此現(xiàn)階段臨床對(duì)習(xí)慣性流產(chǎn)患者的封閉抗體缺乏情況，多采取淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫療法，具體是指將淋巴細(xì)胞注入患者體內(nèi)，促使淋巴細(xì)胞反復(fù)刺激患者的免疫系統(tǒng)，促使人類抗白細(xì)胞抗原的生成，繼而合成滋養(yǎng)細(xì)胞交叉抗原封閉抗體，確?；颊咴俅稳焉飼r(shí)封閉抗體可有效識(shí)別患者抗原并與之結(jié)合，有效阻斷母體免疫系統(tǒng)對(duì)胚胎的攻擊，保護(hù)其順利生長(zhǎng)并發(fā)育。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月～2020年11月德州市陵城區(qū)婦幼保健院收治的60例不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)患者為研究對(duì)象，通過(guò)隨機(jī)數(shù)表法分為對(duì)照組和觀察組，每組30例。對(duì)照組患者年齡20～39歲，平均年齡（29.14±3.85）歲；流產(chǎn)次數(shù)2～5次，平均流產(chǎn)次數(shù)（3.56±0.78）次；孕周6～20周，平均孕周（12.47±2.33）周。觀察組患者年齡20～38歲，平均年齡（29.56±3.56）歲；流產(chǎn)次數(shù)2～4次，平均流產(chǎn)次數(shù)（3.44±0.69）次；孕周5～20周，平均孕周（12.56±2.41）周。兩組患者一般資料經(jīng)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05），具有可比性。所有患者和家屬對(duì)本研究?jī)?nèi)容均知情，并簽署知情同意書，本研究經(jīng)過(guò)德州市陵城區(qū)婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①無(wú)感染征象、中毒癥狀者；②符合習(xí)慣性流產(chǎn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)；③精神狀態(tài)良好；④語(yǔ)言功能良好無(wú)交流障礙；⑤生命體征穩(wěn)定。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①溝通、認(rèn)知障礙；②合并其他免疫系統(tǒng)疾??；③伴有急慢性感染者；④生命體征不平穩(wěn)者；⑤呼吸衰竭；⑥合并呼吸系統(tǒng)疾病；⑦合并惡性腫瘤；⑧肝腎功能不全；⑨合并嚴(yán)重肺源性心臟病者；⑩合并代謝疾病或骨腫瘤者。

1.3 方法

對(duì)照組運(yùn)用常規(guī)治療。治療前完善超聲、尿常規(guī)以及人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測(cè)，嚴(yán)格以檢查結(jié)果為準(zhǔn)，取2 000 IU的HCG注射，1次/2周，直至患者妊娠12周后停止。同時(shí)肌肉注射20 mg黃體酮（生產(chǎn)企業(yè)：浙江仙琚制藥，國(guó)藥準(zhǔn)字H33020828，規(guī)格：1 mL：20 mg×10支），1次/d，直至妊娠12周后停止。

觀察組運(yùn)用聯(lián)合淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療。抽取患者丈夫20 mL上肘靜脈血并加入抗凝劑，借助0.9%氯化鈉溶液（生產(chǎn)企業(yè)：安徽雙鶴藥業(yè)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20054037，規(guī)格：500 mL）沖洗淋巴細(xì)胞懸液，連續(xù)3次加入2 mL 0.9%氯化鈉溶液稀釋淋巴細(xì)胞（2.5×10/mL）。在其前臀內(nèi)側(cè)行放射狀注射，每3周注射1次，連續(xù)注射5次為1個(gè)療程。1個(gè)療程結(jié)束后展開(kāi)封閉抗體檢測(cè)，若檢測(cè)為陰性者，繼續(xù)接受免疫治療，但是治療切勿超過(guò)2個(gè)療程，同時(shí)加用黃體酮治療，方式同對(duì)照組。

1.4 觀察指標(biāo)

妊娠結(jié)局。主要觀察未受孕、流產(chǎn)以及妊娠成功率。妊娠成功率越高，表示患者妊娠結(jié)局越好。

血清因子及調(diào)節(jié)蛋白因子。主要對(duì)比重組干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素（IL-8）以及細(xì)胞表達(dá)分泌因子（RANTES）；治療前后患者空腹?fàn)顟B(tài)下采集5 mL靜脈血給予離心處理（轉(zhuǎn)速2 500 r/min，離心10 min），取上清液后待檢，IL-8借助酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定，IFN-γ通過(guò)抗體夾心免疫PCR檢測(cè)，RANTES通過(guò)ELISA試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：上海通蔚生物，批號(hào)：TW15997）檢測(cè)。

自然殺傷（NK）細(xì)胞含量及T細(xì)胞亞群表達(dá)水平。T細(xì)胞亞群主要觀察CD3以及CD8。NK細(xì)胞含量檢測(cè)注意事項(xiàng)：靶細(xì)胞必須新鮮，且細(xì)胞存活率＞95%。比色時(shí)保持恒定環(huán)境溫度。LDH基質(zhì)液應(yīng)臨用前配制。治療前后患者空腹?fàn)顟B(tài)下采集3 mL靜脈血，借助流式細(xì)胞儀對(duì)T細(xì)胞分化群展開(kāi)檢測(cè)。

雌孕激素水平。主要觀察雌二醇、β-HCG以及孕酮。分別在治療前后采集患者空腹?fàn)顟B(tài)下的血液標(biāo)本給予離心處理（轉(zhuǎn)速2 500 r/min，離心10 min），取血清后通過(guò)放射免疫法進(jìn)行測(cè)定。

血液流變學(xué)指標(biāo)。主要觀察紅細(xì)胞壓積（HCT）、血漿黏度（PV）以及紅細(xì)胞沉降率（ESR）和紅細(xì)胞電泳時(shí)間（EEP）。分別在治療前后采用粘度計(jì)、流式細(xì)胞儀以及電泳儀展開(kāi)以上各指標(biāo)的檢測(cè)工作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者妊娠結(jié)局比較

觀察組妊娠成功率高達(dá)96.66%，對(duì)照組僅為76.66%，觀察組妊娠結(jié)局較好，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組患者血清因子及調(diào)節(jié)蛋白因子水平比較

治療后，觀察組患者IFN-γ表達(dá)較低，IL-8、RANTES表達(dá)較高，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。見(jiàn)表2 。

2.3 兩組患者NK細(xì)胞含量及T細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較

治療后，觀察組患者NK細(xì)胞含量較低，CD3、CD8水平較高，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 兩組患者雌孕激素指標(biāo)比較

治療后，觀察組患者雌二醇、β-HCG以及孕酮水平明顯提高，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。見(jiàn)表4。

2.5 兩組患者治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)比較

治療后，觀察組患者HCT、PV、ESR、EEP等改善幅度較大，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。見(jiàn)表5。

3 討論

習(xí)慣性流產(chǎn)發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，而女性在出現(xiàn)習(xí)慣性流產(chǎn)后，對(duì)于抗原識(shí)別能力大幅較低，而機(jī)體在受精卵種植和著床過(guò)程中也會(huì)出現(xiàn)免疫排斥現(xiàn)象。經(jīng)研究證實(shí)，母體若無(wú)法分泌充足的封閉抗體，會(huì)直接影響胎兒的抗體調(diào)節(jié)能力，導(dǎo)致其降低促使妊娠失敗。臨床根據(jù)病因和發(fā)病機(jī)制，將習(xí)慣性流產(chǎn)分為免疫型、自身免疫型。其中免疫型為不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)，而父母雙方白細(xì)胞抗原的相容性較高，父方抗原無(wú)法準(zhǔn)確刺激母體，會(huì)造成封閉抗體缺乏，因此不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)也成為了現(xiàn)階段臨床研究的重點(diǎn)方向。

現(xiàn)階段臨床治療習(xí)慣性流產(chǎn)，補(bǔ)充黃體酮是常用治療方法，使用黃體酮后會(huì)直接刺激卵巢黃體，促使其分泌孕激素，確保受精卵正常著床，繼而發(fā)揮自身免疫抑制作用，降低免疫介質(zhì)水平、降低母體免疫反應(yīng)。但隨著臨床研究的深入，發(fā)現(xiàn)黃體酮常規(guī)治療效果欠佳，遠(yuǎn)期治療效果較低，且長(zhǎng)期、大量用藥會(huì)造成患者出現(xiàn)不同程度的不良反應(yīng)。

淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療是指提取父系外周血淋巴細(xì)胞并將其注入母體，誘導(dǎo)封閉型抗體產(chǎn)生繼而提高母體免疫耐受程度，促使胚胎發(fā)育的同時(shí)糾正免疫紊亂現(xiàn)象，改善妊娠結(jié)局的同時(shí)提高妊娠成功率。此研究中的觀察組，妊娠成功率高達(dá)96.67%，對(duì)照組僅76.67%，兩組數(shù)據(jù)對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。分析原因：淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療后女性妊娠會(huì)恢復(fù)正常，繼而阻斷混合淋巴細(xì)胞的反應(yīng)過(guò)程，確保并維持正常妊娠。臨床研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)此類患者進(jìn)行淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，患者封閉抗體陽(yáng)性率高達(dá)70.0%，同時(shí)還可明顯增加患者免疫耐受反應(yīng)。IFN-γ若呈高反應(yīng)表達(dá)，會(huì)加強(qiáng)巨噬細(xì)胞的抗原提效應(yīng)，促使胚囊滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡。T 淋巴細(xì)胞免疫紊亂，會(huì)強(qiáng)化細(xì)胞免疫耐受反應(yīng)，而RANTES會(huì)加強(qiáng)淋巴細(xì)胞免疫平衡，繼而緩解排斥反應(yīng)。觀察組患者經(jīng)治療后IFN-γ表達(dá)、NK細(xì)胞含量較低，IL-8、RANTES 表達(dá)以及CD3、CD8水平較高，和對(duì)照組對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。證實(shí)了淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)患者的效果和價(jià)值。

隨著臨床研究的深入，發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生與機(jī)體雌孕激素水平偏低之間的密切關(guān)系，因此諸多學(xué)者對(duì)習(xí)慣性流產(chǎn)患者實(shí)施外源性雌孕激素補(bǔ)充方案+淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療。黃體酮注射液、β-HCG注射液等均為現(xiàn)階段臨床常見(jiàn)的治療藥物，以上藥物與淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫的聯(lián)合治療，可補(bǔ)充患者體內(nèi)雌激素和孕激素，刺激體內(nèi)雌激素分泌，并促使子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞吸收雌激素，有效提高機(jī)體內(nèi)雌激素水平，促使其子宮內(nèi)膜孕激素分泌，為子宮內(nèi)膜發(fā)育提供保障，減少習(xí)慣性流產(chǎn)事件的發(fā)生概率。此研究結(jié)果示：觀察組患者治療后雌孕激素水平較高，血液流變學(xué)指標(biāo)改善幅度較大，和對(duì)照組對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。以上各指標(biāo)的變化，充分說(shuō)明了淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的效果和價(jià)值。