鄭天飛，張倩穎，李東亮，張 娟，堵國(guó)成

（1. 江南大學(xué) 生物工程學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122；2. 四川中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，四川 成都 610000）

近年來(lái)，中國(guó)雪茄市場(chǎng)發(fā)展迅速，國(guó)內(nèi)消費(fèi)者對(duì)高端雪茄的需求旺盛[1-2]。然而，由于國(guó)內(nèi)雪茄煙葉種植起步晚，原料基礎(chǔ)研究較為薄弱，雪茄煙葉發(fā)酵技術(shù)還不成熟[3-4]，導(dǎo)致國(guó)產(chǎn)雪茄煙葉原料與國(guó)外原料在品質(zhì)上存在較大差異，高端雪茄煙葉原料主要依賴國(guó)外進(jìn)口[5]。

國(guó)外優(yōu)質(zhì)雪茄煙葉產(chǎn)地分布廣泛，且具有不同的風(fēng)格特色[6-7]。古巴的雪茄煙葉口感強(qiáng)勁、醇厚，帶有辛辣味和多種芳香；多米尼加的雪茄煙葉以其獨(dú)特的醇和煙味、輕盈的青草香氣和微酸味道深受全球消費(fèi)者的推崇；洪都拉斯的雪茄煙葉以濃烈、辣味和芳香聞名于世[8]。雪茄由混合煙葉卷制而成，不同的煙葉原料配比會(huì)影響整支雪茄的香味風(fēng)格。因此，系統(tǒng)評(píng)價(jià)雪茄煙葉的風(fēng)味特征對(duì)雪茄煙葉原料利用、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和應(yīng)用創(chuàng)新具有重要意義。此外，微生物在雪茄煙葉發(fā)酵過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用[9]，不同產(chǎn)地的雪茄煙葉可能具有不同的微生物群落，對(duì)雪茄煙葉中的微生物群落進(jìn)行研究能夠?yàn)檠┣褵熑~發(fā)酵指明方向[10]。近年來(lái)，基于細(xì)菌16S rRNA 基因及真菌rRNA 基因間隔區(qū)（Internal transcribed spacer，ITS）的高通量測(cè)序技術(shù)已廣泛應(yīng)用于傳統(tǒng)發(fā)酵微生物群落分析[11]，如葉長(zhǎng)文等[10]采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)10 個(gè)雪茄煙樣品進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)雪茄煙樣品中的優(yōu)勢(shì)菌門為厚壁菌門和子囊菌門，優(yōu)勢(shì)菌屬為葡萄球菌屬、不動(dòng)桿菌屬、假單胞菌屬和曲霉屬。不同雪茄煙葉樣品中微生物群落多樣性和結(jié)構(gòu)存在顯著差異。閆鐵軍等[12]通過(guò)高通量測(cè)序研究海南不同產(chǎn)區(qū)茄衣、茄套和茄芯的細(xì)菌群落組成，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)區(qū)不同用途雪茄煙葉細(xì)菌群落多樣性豐富，結(jié)構(gòu)組成相似，相對(duì)豐度有所差異，葡萄球菌科、腸桿菌科是造成煙葉細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)差異的關(guān)鍵菌科。這些結(jié)果表明，不同地區(qū)生產(chǎn)的雪茄煙葉細(xì)菌群落組成可能存在較大差異。目前，關(guān)于國(guó)內(nèi)外雪茄煙葉的研究已有報(bào)道[6，10]，但關(guān)注較多的是不同產(chǎn)地雪茄煙葉微生物群落的組成和風(fēng)味差異，而微生物群落與風(fēng)味之間的聯(lián)系并未被探究。鑒于此，通過(guò)對(duì)國(guó)產(chǎn)高端雪茄常用的進(jìn)口雪茄煙葉，即多米尼加、印尼和美國(guó)雪茄煙葉進(jìn)行感官評(píng)吸和微生物高通量測(cè)序，分析不同產(chǎn)地雪茄煙葉的風(fēng)味和微生物群落組成及差異，明確雪茄煙葉中的關(guān)鍵微生物，解析微生物群落與雪茄煙葉風(fēng)味特征之間的聯(lián)系，為國(guó)產(chǎn)雪茄工業(yè)的原料利用、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和應(yīng)用創(chuàng)新奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為目前國(guó)內(nèi)雪茄工業(yè)企業(yè)的進(jìn)口雪茄煙葉，主要來(lái)自多米尼加（熱帶雨林氣候）、印尼（熱帶雨林氣候）、美國(guó)（亞熱帶氣候）3個(gè)國(guó)家，試驗(yàn)樣品情況見(jiàn)表1，每份煙葉樣品采集200～1 000 g，總共24份煙葉樣品，均由四川中煙工業(yè)有限責(zé)任公司長(zhǎng)城雪茄廠提供。

表1 供試雪茄煙葉信息Tab.1 Information of cigar tobacco leaves

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 感官評(píng)價(jià) 將發(fā)酵后的雪茄煙葉去梗，回潮至含水率為（15±0.5）%；將回潮后的煙葉手工卷制成長(zhǎng)50 mm、直徑10 mm的單料煙樣品待用，并對(duì)卷制樣品進(jìn)行基本信息標(biāo)記；雪茄煙葉樣品經(jīng)卷制后保存在溫度為18 ℃、濕度為（68±1）%的環(huán)境中平衡水分，評(píng)吸前將樣品放置于室溫環(huán)境中醒茄10 h 以上，供感官評(píng)吸使用。

感官評(píng)吸小組由四川中煙雪茄煙感官評(píng)吸專家組成，對(duì)試驗(yàn)樣品的風(fēng)味類型、風(fēng)味強(qiáng)度、風(fēng)味濃度進(jìn)行鑒定和評(píng)分，按1—9分進(jìn)行打分。評(píng)定項(xiàng)目主要包括雪茄煙葉的風(fēng)味特征，如堅(jiān)果香、豆香、木香、辛香、果香、清甜香、焦甜香、蜜甜香、正甜香、花香、熏香、藥香、奶香、膏香、樹(shù)脂香、窖香、烘烤香、壤香、干草、皮革香、酸香和脂粉香；雪茄煙葉的雜氣，如脂粉香、蛋白質(zhì)氣息、土腥氣、青雜氣、枯焦氣、金屬氣、花粉氣、木質(zhì)氣；香氣的醇香感，如醇和度、豐富度、成熟度；煙氣的醇和感，如飽滿度、流暢度、纏綿感；余味的醇凈感，如甜潤(rùn)度、刺激性、干凈度、回味感；雪茄煙葉的燃燒特性，如燃燒性、灰色、凝灰度；可感燃吸指標(biāo)，如平衡感。

1.2.2 微生物群落分析 將5 g 雪茄煙葉樣品與100 mL 無(wú)菌生理鹽水（0.85% NaCl）加至250 mL 燒瓶中，在轉(zhuǎn)速為220 r/min 的搖床中4 ℃振蕩洗脫3 h，過(guò)濾煙葉碎片，7 000 ×g離心15 min 收集微生物。根據(jù)DNeasy PowerSoil 試劑盒（QIAGEN，Inc.，Venlo，Netherlands）說(shuō)明書對(duì)煙葉中微生物總DNA進(jìn)行抽提，并利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 的純度和濃度。各樣品3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)，提取的DNA 樣品均保存于-20 ℃以備進(jìn)一步分析。

以提取的DNA 為模板，使用正向引物515F（5′-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3′）和反向引物907R（5′-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3′）對(duì)細(xì)菌和古細(xì)菌16S rRNA V4-V5 區(qū)域的基因進(jìn)行擴(kuò)增，使 用 通 用 引 物 ITS1F （5′-CTTGGTTCATTTAGAGGAAGTAA-3′）和ITS2R（5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′）擴(kuò)增真菌內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔基因。PCR 反應(yīng)體系（25 μL）：5 μL Q5 反應(yīng)緩沖液（5×），5 μL Q5 High-Fidelity GC 緩沖液（5×），0.25 μL Q5 High-Fidelity DNA Polymerase（5 U/μL，NEB），2 μL（2.5 mmol/L）dNTPs，1 μL 正向引 物（10 μmol/L），1 μL 反 向 引 物（10 μmol/L），2 μL DNA 模板和8.75 μL無(wú)核酸酶水。PCR反應(yīng)條件：98 ℃預(yù)變性2 min，28 個(gè)循環(huán)（98 ℃變性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s），最終72 ℃延伸5 min。 使 用 Agencourt AMPure Beads（ 美 國(guó)Beckman Coulter 公司）純化擴(kuò)增的PCR 產(chǎn)物，使用PicoGreen dsDNA Assay Kit（美國(guó)Invitrogen 公司）進(jìn)行定量，按照每個(gè)樣本的測(cè)序量需求，對(duì)各樣本按相應(yīng)比例進(jìn)行混合。采用TruSeq Nano DNA LT Library Prep Kit（美國(guó)Illumina 公司）制備測(cè)序文庫(kù)。使用MiSeq 測(cè)序儀和MiSeq Reagent Kit V3（600 cycles）進(jìn)行2×300 bp的雙端測(cè)序。

使用QIIME 2對(duì)原始序列進(jìn)行處理。先對(duì)原始序列（Reads）進(jìn)行低質(zhì)量部分剪切，再根據(jù)Barcode從得到的Reads 中拆分出各樣品數(shù)據(jù)，截去Barcode和引物序列初步質(zhì)控得到原始數(shù)據(jù)（Raw reads）。經(jīng)過(guò)以上處理后得到的Reads 序列通過(guò)UCHIME Algorithm 與物種注釋數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)檢測(cè)嵌合體序列，并去除其中的嵌合體序列，得到最終的有效數(shù)據(jù)。對(duì)有效數(shù)據(jù)在99%水平上聚集成擴(kuò)增子序列變體（ASV），使用q2-feature-classifier QIIME 2 插件執(zhí)行分類學(xué)分類。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2019 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，采用SPSS 22.0、Origin 8.0分別對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析、圖表制作，使用Galaxy（https://huttenhower.sph.harvard.edu/galaxy/）進(jìn)行LEfSe 分析，評(píng)估不同產(chǎn)地雪茄煙葉的差異顯著性。并通過(guò)Spearman 相關(guān)系數(shù)（P＜0.05，|r|＞0.3）建立代表性微生物和雪茄煙葉風(fēng)味特征之間的相關(guān)性，使用Gephi 軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)可視化。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地雪茄煙葉的風(fēng)味特征分析

雪茄煙葉樣品的風(fēng)味、雜氣和整體質(zhì)量得分如圖1 所示。風(fēng)味中堅(jiān)果香、木香、焦甜香和烘烤香，得分最高（4 分），其他香味大多得分在2～3 分；雜氣方面，蛋白質(zhì)氣息、青雜氣和枯焦氣問(wèn)題較為顯著，得分最高為3分；煙葉整體質(zhì)量方面，醇和度得分最高，其他大多得分在4～7分，不同煙葉間差異較小。

圖1 不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品評(píng)吸得分Fig.1 Evaluation score of cigar tobacco leaves from different producing areas

對(duì)雪茄煙葉感官評(píng)吸數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析，結(jié)果如圖2 所示。印尼雪茄煙葉樣品YBQ、YCQ 和YM1Q 因具有較高的蛋白質(zhì)氣息、青雜氣和枯焦氣而聚類在一起，煙葉樣品YBH、YCH 和YM1H 具有較高的蜜甜香和酸香。多米尼加的雪茄煙葉樣品香氣最為豐富，具有堅(jiān)果香、豆香、木香、焦甜香、烘烤香、焦甜香和甘草香等風(fēng)味，且煙葉整體質(zhì)量較好。美國(guó)雪茄煙葉樣品風(fēng)味和雜氣均不突出。印尼雪茄煙葉樣品的風(fēng)味與多米尼加雪茄煙葉樣品有一定的差異，而且有些煙葉樣品具有較為嚴(yán)重的雜氣。

圖2 不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品評(píng)吸得分的主成分分析Fig.2 PCA plot marked by sensory analysis score of cigar tobacco leaves from different producing areas

2.2 不同產(chǎn)地雪茄煙葉的微生物群落分析

2.2.1 微生物群落組成 對(duì)24 個(gè)雪茄煙樣品中的微生物進(jìn)行Illumina MiSeq 高通量測(cè)序，分別得到2 504 129條和3 701 781條高質(zhì)量的16S rRNA 序列和ITS 序列，平均每個(gè)樣品分別高達(dá)34 779 條和51 413 條。對(duì)這些序列進(jìn)行分類鑒定，如圖3 所示，細(xì)菌中優(yōu)勢(shì)的門為Proteobacteria、Firmicutes、Actinobacteria（圖3A），優(yōu)勢(shì)的屬為Staphylococcus、Pseudomonas和Sphingomonas（圖3B）。真菌中優(yōu)勢(shì)的門為Ascomycota 和Basidiomycota（圖3C），優(yōu)勢(shì)的屬為Aspergillus、Sampaiozyma和Alternaria（圖3D）。不同產(chǎn)地雪茄煙葉中微生物相對(duì)豐度具有顯著差異。其中，差異最顯著的是細(xì)菌中的優(yōu)勢(shì)門Proteobacteria 和Firmicutes，在多米尼加雪茄煙葉樣品中相對(duì)豐度分別為13.87%和67.74%，在美國(guó)雪茄煙葉樣品中相對(duì)豐度分別為35.92%和50.22%，在印尼雪茄煙葉樣品中相對(duì)豐度分別為78.54%和6.80%；差異最顯著的屬是Staphylococcus和Pseudomonas，在多米尼加雪茄煙葉樣品中相對(duì)豐度分別為55.61%和2.41%，在美國(guó)雪茄煙葉樣品中相對(duì)豐度分別為35.90%和6.61%，在印尼雪茄煙葉樣品中相對(duì)豐度分別為1.88%和26.52%。不同地區(qū)雪茄煙葉樣品中真菌群落的差異小于細(xì)菌。

圖3 不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品中主要細(xì)菌門（A）和屬（B）以及主要真菌門（C）和屬（D）的相對(duì)豐度Fig.3 Relative abundance of predominant bacterial phyla（A）and genera（B），predominant fungal phyla（C）and genera（D）in cigar tobacco leaves from different producing areas

2.2.2 微生物群落多樣性 采用基于Chao1指數(shù)的α-多樣性衡量不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品中微生物群落的豐富度，采用基于bray_curtis 距離矩陣的β-多樣性衡量不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品中微生物群落物種組成的差異性。不同產(chǎn)地雪茄煙葉中微生物群落多樣性分析如圖4 所示。由圖4 可知，不同產(chǎn)地雪茄煙葉中微生物群落α-多樣性具有顯著差異，美國(guó)和印尼的雪茄煙葉中細(xì)菌群落的豐富度顯著高于多米尼加，而多米尼加的雪茄煙葉中真菌群落的豐富度顯著高于美國(guó)。不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品中微生物群落的物種組成也有一定差異，細(xì)菌群落因地域原因在橫坐標(biāo)上造成36.9%的差異，真菌群落因地域原因在橫坐標(biāo)上造成20.4%的差異，真菌因地域造成的差異小于細(xì)菌。

圖4 不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品中微生物群落的多樣性Fig.4 Diversity of microbial communities in cigar tobacco leaves from different producing areas

通過(guò)韋恩圖統(tǒng)計(jì)不同產(chǎn)地雪茄煙葉微生物群落中的相同物種數(shù)目，如圖5 所示，3 個(gè)產(chǎn)地共有細(xì)菌有280 種，共有真菌僅有84 種。其中，多米尼加與印尼有較多相似的細(xì)菌和真菌物種。

圖5 不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品中獨(dú)特和共有的細(xì)菌（a）和真菌（b）微生物群數(shù)量Fig.5 Numbers of unique and shared bacterial（a）and fungal（b）microbiota in cigar tobacco leaves from different producing areas

通過(guò)LEfSe 分析不同產(chǎn)地雪茄煙葉微生物群落中門水平以下的特異性物種，如圖6所示，細(xì)菌中的差異物種包括6 個(gè)門，10 個(gè)綱，21 個(gè)目，29 個(gè)科，34個(gè)屬；真菌中的差異物種包括6 個(gè)門，12 個(gè)綱，19 個(gè)目，26 個(gè)科，37 個(gè)屬。印尼的雪茄煙葉有較多特異性細(xì)菌，多米尼加的雪茄煙葉有較多特異性真菌。

圖6 不同產(chǎn)地雪茄煙葉樣品中具有顯著差異的細(xì)菌（a）和真菌（b）進(jìn)化分支圖Fig.6 Evolutionary branch map of bacteria（a）and fungi（b）with significant difference in cigar tobacco leaves from different producing areas

為了更好地區(qū)分不同產(chǎn)地的雪茄煙葉，進(jìn)一步分析煙草微生物群成員是否可以如其他性狀（如風(fēng)味、葉色和基因組特征）一樣用于區(qū)分雪茄煙葉的產(chǎn)地。通過(guò)隨機(jī)森林模型在屬水平上篩選一些微生物來(lái)區(qū)分不同產(chǎn)地的雪茄煙葉，結(jié)果如圖7所示，20 個(gè)細(xì)菌屬如Methylobacterium、Yaniella、Bacillus、Faecalibacterium、Tetragenococcus等和20 個(gè)真菌屬如Wallemia、Pichia、Thermoascus、Penicillium、Fusarium、Alternaria等在區(qū)分不同產(chǎn)地雪茄煙葉方面具有顯著的重要性。

圖7 用于區(qū)分不同產(chǎn)地雪茄煙葉的重要性排名前20的細(xì)菌屬（a）和真菌屬（b）Fig.7 Top 20 genera of bacterial（a）and fungal（b）communities used for discriminating tobacco leaves from different regions

2.3 雪茄煙葉風(fēng)味特征與微生物群落之間的關(guān)系

用Spearman 相關(guān)系數(shù)分析風(fēng)味特征和微生物（相對(duì)豐度排名前30的細(xì)菌和真菌）之間的聯(lián)系，并用Gephi 可視化。如圖8 所示，雪茄煙葉的風(fēng)味與細(xì)菌群落具有密切的相關(guān)性，如堅(jiān)果香、豆香、木香、辛香、果香、焦甜香、花香、熏香、膏香、烘烤香、干草香和皮革香與Staphylococcus、Corynebacterium_1、Tetragenococcus和Atopostipes具有顯著的正相關(guān)性，清甜香和蜜甜香與Pseudomonas、Ralstonia、Pantoea、Brevibacterium、Methylobacterium、Bacillus、Stenotrophomonas和Ochrobactrum具有顯著的正相關(guān)性。雪茄煙葉的風(fēng)味特征與真菌群落的關(guān)聯(lián)較與細(xì)菌的關(guān)聯(lián)少，但堅(jiān)果香、豆香、辛香、果香、焦甜香、花香、熏香、膏香、窖香、干草香和皮革香也與許多真菌呈正相關(guān)。煙葉中的雜氣，如蛋白質(zhì)氣息、青雜氣和枯焦氣與Sphingomonas具有正相關(guān)，與Atopostipes具有負(fù)相關(guān)。

圖8 雪茄煙葉微生物群落與風(fēng)味特征的相關(guān)性Fig.8 The correlation between flavor characteristics and microbial community of cigar tobacco leaves

3 結(jié)論與討論

本研究對(duì)多米尼加、美國(guó)和印尼3 個(gè)產(chǎn)區(qū)的雪茄煙葉進(jìn)行感官評(píng)吸，并通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)分析其表面微生物，以揭示不同產(chǎn)地雪茄煙葉的風(fēng)味、品質(zhì)、表面菌群特征差異以及微生物群落與風(fēng)味特征之間的聯(lián)系。

感官評(píng)吸結(jié)果表明，多米尼加的雪茄煙葉香氣最為豐富，雜氣較少，且煙葉整體質(zhì)量較好。美國(guó)和印尼的雪茄煙葉香氣較少，且有些雜氣，這與李秀妮等[6]對(duì)全球主要雪茄產(chǎn)地雪茄煙葉風(fēng)味特征的初探結(jié)果一致。微生物群落分析發(fā)現(xiàn)，本研究中雪茄煙葉的優(yōu)勢(shì)菌門如Firmicutes、Proteobacteria 和Actinobacteria，也在其他煙草微生物群落研究中出現(xiàn)，它們?cè)跓煵莅l(fā)酵過(guò)程中充當(dāng)分解者，將大分子（纖維素、果膠和淀粉）降解為小分子（葡萄糖、果糖和 麥 芽 糖）[13]；優(yōu) 勢(shì) 菌 屬 如Staphylococcus、Pseudomonas和Sphingomonas在其他研究中也有報(bào)道。葡萄球菌（Staphylococcus）參與脂肪代謝，產(chǎn)生的脂肪酸會(huì)進(jìn)一步降解形成醛和酮類等芳香類物質(zhì)[14]。 之前的研究發(fā)現(xiàn)，鞘氨醇單胞菌（Sphingomonas）也是雪茄煙葉中醛和酮的主要產(chǎn)生者[15]。假單胞菌（Pseudomonas）可以降解煙堿，影響雪茄煙葉吸食勁頭[16]。以往對(duì)雪茄煙葉中真菌群落的研究較少，本研究中，雪茄煙葉真菌優(yōu)勢(shì)屬有Aspergillus、Sampaiozyma和Alternaria，其在推動(dòng)養(yǎng)分循環(huán)、調(diào)節(jié)植物礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)和緩解煙葉養(yǎng)分限制方面也發(fā)揮著重要的生態(tài)作用[17]。

此外，本結(jié)果表明，不同產(chǎn)地雪茄煙葉細(xì)菌群落具有較大差異，不僅一些優(yōu)勢(shì)細(xì)菌的相對(duì)豐度差異較大，而且整體群落結(jié)構(gòu)也有很大差異。雪茄煙葉上的微生物群落主要來(lái)自田間生長(zhǎng)時(shí)的土壤和周圍環(huán)境，以及干燥時(shí)的空氣。環(huán)境中微生物群落也影響煙葉上的微生物群落[18]。空間是造成不同產(chǎn)地?zé)熑~細(xì)菌群落差異的一個(gè)重要因素[19]。另外，煙葉原材料、發(fā)酵工藝和發(fā)酵過(guò)程參數(shù)調(diào)控也會(huì)極大地影響雪茄煙葉中的細(xì)菌群落[20-22]。然而，與細(xì)菌群落相比，真菌群落中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)相同的趨勢(shì)，不同地區(qū)雪茄煙葉中真菌群落差異較小，故認(rèn)為雪茄煙葉中的真菌群落不呈區(qū)域性變化。

不同產(chǎn)地的雪茄煙葉也有一些共同成員，盡管數(shù)量相對(duì)較少。這些共有成員可能與大分子物質(zhì)的降解有關(guān)，但它們也可能是有害物質(zhì)的生產(chǎn)者，因?yàn)橛泻ξ镔|(zhì)（如亞硝胺和焦油等）基本上存在于所有煙草產(chǎn)品中。相反，不同產(chǎn)地的特異性微生物群落可能是不同產(chǎn)地雪茄煙葉特殊香氣的創(chuàng)造者。此外，本研究發(fā)現(xiàn)一些微生物類群可以用來(lái)區(qū)分不同產(chǎn)地的雪茄煙葉。通過(guò)關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)，與真菌群落相比，細(xì)菌群落與雪茄煙葉風(fēng)味特征之間的聯(lián)系更加密切，Staphylococcus、Corynebacterium_1、Tetragenococcus和Atopostipes等對(duì)雪茄煙葉的風(fēng)味形成具有重要的貢獻(xiàn)。

本研究通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地雪茄煙葉的風(fēng)味和微生物群落進(jìn)行研究，揭示了雪茄煙葉中微生物群落與煙葉品質(zhì)之間的聯(lián)系。結(jié)果表明，多米尼加的雪茄煙葉風(fēng)味特征最為突出，香氣最為豐富；雪茄煙葉中優(yōu)勢(shì)細(xì)菌屬為Staphylococcus、Pseudomonas和Sphingomonas，優(yōu) 勢(shì) 真 菌 屬 為Aspergillus、Sampaiozyma和Alternaria；不同產(chǎn)地雪茄煙葉中細(xì)菌群落相較于真菌群落具有更大的差異，且細(xì)菌群落與風(fēng)味特征之間的聯(lián)系更加密切，對(duì)雪茄煙葉的風(fēng)味形成具有重要的貢獻(xiàn)。這些結(jié)果將會(huì)促進(jìn)我國(guó)雪茄煙葉原料利用、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和應(yīng)用創(chuàng)新，為從優(yōu)質(zhì)進(jìn)口雪茄煙葉中篩選功能菌株用于國(guó)產(chǎn)雪茄煙葉發(fā)酵，改善雪茄煙葉的風(fēng)味和質(zhì)量，減少有害物質(zhì)奠定基礎(chǔ)。