甘 露， 劉 偉， 潘 琴， 居文惠

(1.長江大學附屬荊州醫(yī)院/荊州市中心醫(yī)院婦科， 湖北 荊州 434020 2.華潤武鋼總醫(yī)院放射科， 湖北 武漢 430080)

在我國宮頸癌發(fā)病逐漸趨向于年輕化使得女性生命健康受到嚴重威脅。宮頸癌因其病變組織位點較為特殊，極易出現(xiàn)浸潤等原因，因此導致中晚期宮頸癌患者術(shù)后局部轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)風險升高，嚴重影響患者預(yù)后情況，其中只有50%～60%患者生存率在5年以上[1]。目前，臨床上主要采取宮頸癌根治術(shù)對早期宮頸癌患者進行治療，但在中晚期宮頸癌患者中，其治療方式并不唯一，主要分為髂內(nèi)動脈灌注化療、術(shù)前腔內(nèi)照射及術(shù)后輔助化療等。隨著相關(guān)研究不斷深入，機體相關(guān)蛋白與癌癥發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后存在關(guān)聯(lián)。SCL/TALl斷裂點(SCL/TALl interrupting locus，STIL)基因最早在人類急性T淋巴細胞白血病患者染色體上發(fā)現(xiàn)，隨后研究發(fā)現(xiàn)其可以通過介到細胞有絲分裂，來參與腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程[2]。脯氨酸蛋白11(proline-rich protein 11，PRR11)最早發(fā)現(xiàn)于骨肉瘤細胞系中，PRR11是一種細胞周期相關(guān)蛋白[3]。在肺癌患者中發(fā)現(xiàn)PRR11水平明顯升高，肺癌患者術(shù)后預(yù)后情況與PRR11水平呈現(xiàn)負相關(guān)，在腫瘤細胞周期中PRR11呈現(xiàn)節(jié)律性表達，同時也密切關(guān)系著腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程[4]。目前國內(nèi)外對于STIL和PRR11研究主要集中在結(jié)腸癌、肝細胞癌和肺癌方面[5]。但是關(guān)于宮頸癌這一領(lǐng)域研究較為少見，基于此本研究通過對宮頸癌組織中STIL和PRR11表達水平進行檢測分析，探索其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，旨在為今后臨床宮頸癌治療新靶點選擇及其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風險評估提供一定思路和意見。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇我院2020年1月至2022年1月收治的143例宮頸癌患者作為研究對象，術(shù)中對患者宮頸癌組織和距離腫瘤邊緣3～4cm的正常癌旁組織進行切除。宮頸癌患者，年齡37～67歲，平均(49.01±4.29)歲；腫瘤直徑3～5cm，平均(4.23±0.52)cm；病理診斷類型：宮頸腺癌28例，宮頸癌鱗狀細胞癌115例，F(xiàn)IGO分期：Ⅰ期69例、Ⅱ期45例、Ⅲ期25例、Ⅳ期4例；分化程度：低分化26例、中分化97例、高分化20例；淋巴轉(zhuǎn)移：轉(zhuǎn)移64例，無轉(zhuǎn)移79例。納入標準：①經(jīng)病理活檢診斷為宮頸癌，患者符合《宮頸癌診療規(guī)范(2018年版)》[6]中相關(guān)標準，鱗狀上皮細胞異常，細胞排列呈現(xiàn)癌巢或腺管狀，可以明顯看到組織間橋和角化珠；②肝腎功能無明顯異常；③心電圖基本正常；④無既往放化療藥物治療史。排除標準：①合并胃癌、肝癌等其他惡性腫瘤疾病患者；②患者存在嚴重精神障礙；③合并嚴重肝、腎等器官功能障礙；④患有嚴重泌尿系統(tǒng)及血液系統(tǒng)感染性疾病。

1.2觀察指標：①采用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)對癌組織和癌旁組織中STIL和PRR11蛋白水平進行檢測。首先將暫存于-80℃冰箱中的宮頸癌和癌旁組織取出，進行組織勻漿，離心后取上清液，采用總蛋白提取試劑盒中說明書進行總蛋白提取，測定蛋白含量及純度，將上樣緩沖液與待測液按一定比例進行混勻，然后在凝膠中上樣，完成聚丙烯凝膠電泳(PAGE)實驗。電泳完成后將蛋白轉(zhuǎn)到PVDF膜上，用5%牛血清白蛋白(BSA)在室溫下封閉PVDF膜1h，并與目的蛋白特異性抗體在4℃下孵育過夜。然后，加入對應(yīng)二抗在室溫下孵育1h，孵育完成后進行顯色反應(yīng)，最后通過凝膠成像儀進行顯影，對蛋白相對表達量進行計算。STIL抗體、PRR11抗體均購于上海長島生物技術(shù)有限公司。②采用實時熒光定量PCR技術(shù)(Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測STIL和PRR11基因相對表達量。先用RNA提取試劑盒提取組織中總RNA，隨后通過逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后通過q-PCR試劑盒以cDNA為模板對目的基因進行實時熒光定量檢測，q-PCR擴增條件：95℃預(yù)變性5min，95℃變性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計算目的基因相對表達量，各目的基因引物序列，見表1。PCR相關(guān)試劑盒均購于北京擎科生物科技有限公司，操作均按照說明書嚴格進行。

表1 PCR相關(guān)基因引物序列

2 結(jié) 果

2.1STIL和PRR11在宮頸癌組織患者中表達情況：宮頸癌組織中STIL、PRR11蛋白水平及基因相對表達量均明顯高于癌旁組織(P<0.05)。見圖1，表2。

表2 組織STIL PRR11水平變化

圖1 宮頸癌組織中STIL和PRR11水平情況

2.2STIL和PRR1水平與FIGO 分期關(guān)系：FIGO分期越高，STIL、PRR11蛋白水平越高，各組間差異顯著(P<0.05)，見表3。

表3 不同F(xiàn)IGO分期者宮頸癌組織中STIL PRR11蛋白水平比較

2.3STIL和PRR11表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系：將術(shù)后病理學檢查結(jié)果作為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移金標準，患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例，未轉(zhuǎn)移79例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中STIL和PRR11蛋白水平明顯高于未轉(zhuǎn)移(P<0.05)。見表4。

表4 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者宮頸癌組織中STIL和PRR11蛋白水平比較

2.4STIL和PRR11對宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值：STIL蛋白、PRR11蛋白診斷宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC分為0.733、0.729、(P<0.05)。見圖2、表5。

圖2 STIL和PRR11診斷宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移ROC曲線

表5 STIL和PRR11診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的ROC特征

2.5STIL和PRR11蛋白表達之間相關(guān)性分析：STIL蛋白水平與PRR11蛋白水平呈現(xiàn)正相關(guān)(r=0.290、P=0.003)。見圖3。

圖3 STIL和PRR11蛋白水平相關(guān)性散點圖

3 討 論

在女性惡性腫瘤中宮頸癌最為常見，全世界范圍內(nèi)，因其人群、地域不同致使宮頸癌發(fā)病率和死亡率也呈現(xiàn)出差異。據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計，我國近20年宮頸癌發(fā)病率呈逐步上升態(tài)勢，女性健康因?qū)m頸癌多發(fā)性受到嚴重威脅，因此，社會和政府對宮頸癌給予重點關(guān)注并實施了前所未有的防范措施[7]。目前，宮頸癌研究重心已經(jīng)開始從之前的治療向預(yù)防方面轉(zhuǎn)變。宮頸癌病理過程較為復(fù)雜，其中包括多種癌基因和抑癌基因的異常激活與失活，并伴隨多階段、多因素及多步驟過程[8]。因此對宮頸癌發(fā)展相關(guān)分子機制進行深入研究有助于治療新靶點發(fā)現(xiàn)，對提高宮頸癌患者治療效果、預(yù)后改善具有積極影響。

細胞在增殖期中會大量表達STIL，尤其是在腫瘤細胞中，但是在機體正常組織中表達量極少。國外一些研究表明STIL表達水平上調(diào)有助于腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，可以明顯降低患者預(yù)后水平[9]。說明在腫瘤中STIL可能屬于一種致病基因。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)STIL表達水平在宮頸癌組織中明顯上升，且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達量要明顯高于未轉(zhuǎn)移，隨著FIGO分期越高，其表達量呈現(xiàn)上升趨勢。此研究結(jié)果與李垚[10]研究結(jié)果相似。分析其原因可能是與中心體異常擴增有關(guān)。研究證實，腫瘤發(fā)展與中心體密切相關(guān)，中心體異常主要兩大表現(xiàn)分別是中心體數(shù)量異常以及結(jié)構(gòu)上異常。宮頸癌組織中中心體復(fù)合蛋白會大量富集。中心體大量產(chǎn)生會造成宮頸癌逐漸惡化，加快其轉(zhuǎn)移和浸潤速度。STIL是一種參與中心體合成的蛋白，其可以在細胞有絲分裂間期促進前中心粒合成，造成中心粒復(fù)制數(shù)量增加。STIL還可以通過對DKl/CyclinBI復(fù)合體進行激活，從而促進癌細胞有絲分裂效率，同時調(diào)控下游一系列基因表達來促進腫瘤發(fā)展。因此STIL表達水平會隨著FIGO分期升高及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加。

PRR11位于染色體17q23區(qū)，其可以通過對糖皮質(zhì)激素受體信號通路進行調(diào)控而參與到腫瘤形成過程中。在腫瘤細胞中PRR11高表達會加快細胞周期進展，提高腫瘤細胞增殖能力，其同時可以促進新血管形成幫助腫瘤轉(zhuǎn)移[11]。在肺癌組織中PRR11水平上調(diào)會加快腫瘤轉(zhuǎn)移和分化[12]。本研究結(jié)果顯示，PRR11在宮頸癌組織中表達水平以及其與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系與STIL類似。此研究結(jié)果與趙鄭[13]等研究結(jié)果存在部分相似。究其原因可能是當PRR11表達上調(diào)后可能通過促進β-連環(huán)蛋白(β-catenin)和波形蛋白(vimentin)表達，激活宮頸癌細胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)過程，導致宮頸癌進一步惡化和轉(zhuǎn)移，所以PRR11水平會隨著宮頸癌FIGO分期增加和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加。我們對PRR11和STIL蛋白在診斷淋巴結(jié)價值進行分析。發(fā)現(xiàn)PRR11、STIL蛋白在診斷宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中均具有一定診斷價值，進一步采用Pearson分析顯示在宮頸癌患者中STIL蛋白水平與PRR11蛋白表達呈現(xiàn)正相關(guān)，提示這兩種蛋白可能存在相互調(diào)控關(guān)系，在宮頸癌發(fā)生及發(fā)展過程中可能起著協(xié)同促進作用，將來在臨床治療宮頸癌中可能是一種新型潛在靶點。但是目前關(guān)于這兩種蛋白具體調(diào)控機制尚不明確，還需通過后續(xù)實驗加以證明。

綜上所示，在宮頸癌組織中，STIL和PRR11水平都會上升。我們推測在宮頸癌患者中STIL可能通過調(diào)控細胞有絲分裂進程和中心粒形成來參與了宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和發(fā)展過程。而PRR11可能是通過激活EMT過程參與宮頸癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移，兩者蛋白之間表達可能存在聯(lián)系，共同促進了宮頸癌發(fā)生及發(fā)展。