祝 惠，陳柏東，陳曉林，劉承鑫，劉 燊，張輝華，馮 鑫*

(1.佛山科學技術學院 生命科學與工程學院，廣東 佛山 528225;2. 佛山市正典生物技術有限公司，廣東 佛山 528138)

現(xiàn)代肉雞養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，高密度養(yǎng)殖導致畜禽疫病多發(fā)，抗生素濫用使得食品安全問題日益嚴峻，替抗飼料添加劑成為動物學家的研究熱點。植物甾醇(Phytosterol，PS)是一類具有植物活性成分的甾體化合物，通常以游離甾醇、甾醇酯、甾基糖苷或?；藁擒盏男问綇V泛存在于植物油、堅果、植物種子及蔬菜、水果等植物性食物中，是植物細胞的重要組成成分。大量研究證明，PS不僅具有調(diào)節(jié)生長、抗氧化、抗癌、抗腫瘤和消炎退熱等功效，且一定劑量下無明顯毒性和副作用。PS作為一種新型促生長劑，在畜禽生產(chǎn)中的應用逐年增加，研究證明PS在豬、牛、雞生產(chǎn)以及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上，促生長效果明顯。吳先華等研究表明日糧中添加200 mg/kg 的PS對育肥豬生長性能及血清生化指標改善效果最佳。謝穎等研究表明，在奶牛日糧中添加200 mg/d 的PS可有效提高產(chǎn)奶量。黃志毅等研究表明，在清遠麻雞日糧中添加200 g/t 的PS促生長效果佳。潘忠超等研究表明，羅氏沼蝦基礎飼料中添加40 mg/kg PS可獲得最佳生長性能和肌肉品質(zhì)。

PS結(jié)構(gòu)功能與膽固醇相似，研究發(fā)現(xiàn)PS通過與膽固醇競爭靶位點，從而影響膽固醇的吸收代謝。動物生產(chǎn)中應激反應對動物生產(chǎn)性能和產(chǎn)品質(zhì)量會造成嚴重影響。PS可以通過清除自由基、恢復氧化還原平衡、解除慢性氧化應激，從而保護機體免受氧化損傷。

本試驗旨在研究日糧添加植物甾醇對黃羽肉雞生長性能、血清生化指標和抗氧化能力及相關生長因子的影響，為其在黃羽肉雞在生產(chǎn)中的應用提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用雞，嶺南黃雞Ⅱ號新土3型，由廣州牧源禽業(yè)有限公司提供。

1.2 試驗日糧

試驗選用玉米-豆粕型顆粒狀配合日糧(佛山市廣牧興飼料有限公司)，各階段日糧營養(yǎng)水平參考中國黃羽肉雞營養(yǎng)需要標準(NY/T 33-2004)，基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets

1.3 試驗設計與方法

試驗選用1日齡健康黃羽肉雞360羽，隨機分為3組，每組6個重復，每個重復20羽，試驗期為63 d。飼喂日糧分組為：空白組為玉米-豆粕型基礎日糧 (NC)；抗生素組為基礎日糧+250 mg/kg 土霉素鹽+200 mg/kg 那西肽(PC)；試驗組為基礎日糧+ 25 mg/kg 植物甾醇(PS)。

1.4 飼養(yǎng)管理

肉雞釆用籠養(yǎng)方式，試驗期間自由釆食和飲水。入雛前1周，雞舍及水槽、料槽等全部洗凈，并用甲醛和高錳酸鉀熏蒸消毒。試驗期間定期進行防疫消毒，飼養(yǎng)管理依據(jù)《現(xiàn)代肉雞生產(chǎn)手冊》進行，并按照常規(guī)免疫程序進行疫苗接種，每天保持24 h光照。試驗期共63 d。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 生長性能 分別在試驗期21、42及63日齡測定肉雞空腹12小時體重，計算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。

1.5.2 血清生化指標、抗氧化指標及相關生長因子 于試驗期第21、42及63天，從各重復中隨機選擇試驗雞1羽(每個處理組共6羽)，進行翅靜脈采血5 ml 。血液樣品靜置30 min ，然后以3 000 r/min 離心10 min ，取其上清液并于-20 ℃冷凍。后續(xù)測定血清樣品中乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白(TP)、尿酸(UA)、肌酐(Cr)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-CH)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-CH)、膽固醇(CHOL)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、堿性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)的含量?？寡趸笜税偝趸锲缁?T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)按照試劑盒測定方法進行分析(南京建成生物工程，南京)，雞胰島素生長因子1(IGF-1)和白細胞介素6(IL-6)采用試劑盒進行測定(上海酶聯(lián)生物科技有限公司，上海)。

1.5.3 內(nèi)臟指數(shù) 對每只采血的雞稱量活體重后進行屠宰，摘取肝臟、脾臟、法氏囊、心臟，剔除脂肪，用濾紙吸干血水后稱鮮重，計算內(nèi)臟指數(shù)。

內(nèi)臟指數(shù)(%)=相應內(nèi)臟重量(g)/宰前空腹活重(g)×100

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)用Excel 2010進行整理，用SPSS 20.0統(tǒng)計分析軟件中重復度量分析模塊進行分析，模型的固定效應包括處理、時間以及處理和時間的互作效應，采用Tukey法進行多重比較，<0.05為差異顯著，<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物甾醇對黃羽肉雞生長性能的影響

PS對黃羽肉雞生長性能的影響見表2。與NC、PC相比，日糧中添加PS對黃羽肉雞的ADG、ADFI、F/G無影響(>0.05)，三個試驗組肉雞的ADG、ADFI和F/G在不同生長階段均差異極顯著(<0.001)。

表2 植物甾醇對黃羽肉雞生長性能的影響Table 2 Effects of phytosterols on growth performance of yellow-feathered broilers

2.2 植物甾醇對黃羽肉雞血清生化指標的影響

PS對黃羽肉雞血清生化指標的影響見表3。與NC、PC相比，日糧中添加PS對黃羽肉雞血清TP、ALB、UA濃度無影響(>0.05)。不同生長階段TP濃度差異極顯著(<0.001)。PC組與PS組相比，CHOL含量差異顯著(<0.01)。NC組和PS組血清HDL-CH含量差異不顯著，但二者顯著高于PC組(<0.01)。NC組與PC組之間ALT含量差異顯著(<0.05)，但PS組與二者均無顯著差異(>0.05)。

表3 植物甾醇對黃羽肉雞血清生化指標的影響Table 3 Effects of phytosterols on serum biochemical indexes of yellow-feather broilers

2.3 植物甾醇對抗氧化指標及相關生長因子的影響

由表4可知，日糧中添加PS對黃羽肉雞的T-SOD、GSH-Px、T-AOC無顯著性影響(>0.05)，添加PS有降低MDA濃度的趨勢(=0.06)。與NC組和PC組相比，日糧中添加PS顯著提高了血清IGF-1含量(=0.004)。數(shù)值上PS組黃羽肉雞IL-6含量最低，但統(tǒng)計上差異不顯著(>0.05)。

表4 植物甾醇對黃羽肉雞抗氧化指標及相關生長因子的影響Table 4 Effects of phytosterols on antioxidant indices and related growth factors in yellow-feather broilers

2.4 植物甾醇對黃羽肉雞內(nèi)臟指數(shù)的影響

植物甾醇對黃羽肉雞內(nèi)臟指數(shù)的影響見表5。添加PS不影響脾臟、心臟和法氏囊指數(shù)。與NC組相比，PC組和PS組均無顯著差異(>0.05)。與PC組相比，添加PS顯著提高了肝臟指數(shù)(<0.05)。

表5 植物甾醇對黃羽肉雞臟器指數(shù)的影響Table 5 Effects of phytosterols on organ index of yellow-feather broilers %

3 討 論

3.1 對生長性能的影響

在飼養(yǎng)應用研究中有學者發(fā)現(xiàn)PS能刺激食欲，在水中能形成植物激素-植物甾醇-核糖核蛋白的復合體，這一復合體能增加原植物激素在動物體內(nèi)分解的穩(wěn)定性，促進動物蛋白質(zhì)的合成，有利于動物的健康和生長。黃志毅等研究表明在817肉雞基礎飼糧中添加200 g/t PS，可以顯著提高817肉雞的平均末重和ADG，ADFI和F/G差異不顯著。黃志毅等另一項研究表明在清遠麻雞基礎飼料中添加200 g/t PS，麻雞的平均末重和ADG顯著高于對照組。賈代漢等試驗結(jié)果顯示，日糧中添加不同濃度的PS有提高肉仔雞增重的趨勢。姬紅波等研究結(jié)果表明，不同劑量PS均能不同程度促進不同階段肉雞生長，提高飼料轉(zhuǎn)化率，其中20 mg/kg 添加量達到最佳生產(chǎn)性能。鄒勝龍等研究結(jié)果表明在快大黃雞基礎飼料中添加200 g/t PS，在1～16日齡、17～30日齡和31～45日齡黃雞的ADG均高于對照組，ADFI也有所增加，F(xiàn)/G降低了1.28%。本試驗結(jié)果顯示日糧中添加PS對黃羽肉雞的生長性能無顯著性影響，與周春江等研究結(jié)果一致，可能由于添加量不同所致，另飼養(yǎng)期間為廣東最炎熱且天氣變化較明顯的時間段，可能對黃羽肉雞產(chǎn)生一定影響。

3.2 對血清生化指標的影響

多項研究表明，PS具有降低血液中CHOL和低密度脂蛋白的作用。黃志毅等研究表明，添加200 g/t PS組的清遠麻雞血清中TG含量顯著低于對照組，且HDL-CH含量顯著高于對照組；添加200和300 g/t PS組的清遠麻雞血清中LDL-CH含量均顯著低于對照組。姬紅波等研究表明，在AA肉雞中添加PS可降低血清中總CHOL和LDL-CH的水平，但對HDL-CH和TG的含量沒有影響。鄒勝龍等試驗結(jié)果顯示，在快大黃雞飼料中添加200 g/t PS，快大黃雞血清中TG、CHOL和LDL-CH的含量有所降低，HDL-CH含量也高于對照組?？赡茉驗镻S與CHOL結(jié)構(gòu)相似，在動物腸腔內(nèi)競爭性的與膽汁酸微粒結(jié)合，使CHOL不能被運送到小腸絨毛的吸收部位，從而抑制CHOL的吸收。試驗發(fā)現(xiàn)血清中TP和ALB略有增加，葡萄糖含量顯著低于對照組，這可能與PS促進機體代謝，利用機體葡萄糖氧化分解促進蛋白質(zhì)合成有關。顧莞婷等發(fā)現(xiàn)PS對肉鴨血清中CHOL和LDL-CH含量具有降低作用，其中40 mg/kg 添加組顯著降低。本試驗結(jié)果表明，日糧中添加PS ，TG、ALB含量無顯著性差異，CHOL和HDL-CH含量顯著高于空白組和抗生素組，HDL-CH含量增加與黃志毅和鄒勝龍的研究結(jié)果一致，但LDL-CH含量無顯著影響。CHOL包括總膽固醇、HDL-CH和LDL-CH，日糧中添加PS顯著提高HDL-CH含量，HDL-CH是高密度脂蛋白中的分子攜帶的膽固醇，它能反映出血漿中高密度脂蛋白的含量，主要功能是將肝外組織中過多的CHOL轉(zhuǎn)運到肝臟代謝，以防CHOL在這些組織中堆積，有利于動物機體生長。試驗結(jié)果顯示HDL-CH含量增加，LDL-CH含量無影響，因而CHOL含量也有所增加。

3.3 對抗氧化能力及相關生長因子的影響

動物機體在正常代謝過程中會不斷地產(chǎn)生自由基，導致組織細胞產(chǎn)生氧化損傷，同時自由基又能被體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)清除。GSH-Px和T-SOD是機體內(nèi)廣泛存在的清除自由基的主要抗氧化酶，保護機體免受氧化損傷，減少脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生。MDA是自由基作用于脂質(zhì)而發(fā)生過氧化反應的終產(chǎn)物，是反映膜脂過氧化程度的重要指標，其含量越高脂質(zhì)受到氧自由基攻擊的程度就越高。T-AOC是體內(nèi)氧化與抗氧化物質(zhì)共同作用的結(jié)果，是衡量機體抗氧化能力的綜合指標。黃志毅等研究結(jié)果揭示試驗組817肉雞血清中T-SOD的活性顯著高于對照組，血清中GSH-Px活性高于對照組，但差異不顯著；MDA含量低于對照組，差異不顯著。鄒勝龍等試驗結(jié)果顯示，添加200 g/t PS，快大黃雞血清中GSH-Px活性顯著提高，T-SOD活性也高于對照組，MDA含量也低于對照組，PS能提高快大黃雞血清中抗氧化酶的活性，清除機體內(nèi)的自由基，并減少氧化產(chǎn)物MDA的含量，減輕機體的氧化損傷。此外，PS的一個主要成分(β谷甾醇)被證明可以有效地改善1，2-二甲基肼誘導的大鼠結(jié)腸和肝臟組織中谷胱甘肽的耗竭和抗氧化酶包括T-SOD和GSH-Px的減少。本試驗日糧中添加PS對抗氧化指標T-AOC、T-SOD和GSH-Px無顯著性影響，與前人研究結(jié)果有出入，導致此結(jié)果的原因可能是PS添加劑量的不同、炎熱天氣產(chǎn)生的熱應激及品種的差異。與PC組相比PS組MDA的濃度有明顯降低趨勢，但差異不顯著。日糧中添加PS有降低MDA含量的趨勢，表明PS一定程度上可以清除體內(nèi)的自由基，改善脂質(zhì)過氧化狀態(tài)，減少脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生。

IGF-1參與動物體內(nèi)蛋白質(zhì)的同化作用，與飼料轉(zhuǎn)化率呈正相關，血清中IGF-1的明顯提升證明了PS有提高飼料轉(zhuǎn)化率的潛力。目前無法闡明PS提升IGF-1的作用機制，但可以推測這可能與PS降低CHOL，緩解肝臟的負擔，提高肝臟的功能有關。劉凡等的研究表明，飼料中添加PS能顯著上調(diào)雄性日本鵪鶉IGF-1水平從而對其生產(chǎn)性能產(chǎn)生潛在影響，本試驗結(jié)果與前人一致。與NC組和PC組相比，PS組IGF-1含量顯著提高，但飼料轉(zhuǎn)化率未明顯提高，其原因可能是尚未達到最適添加量。IL-6是炎癥起始階段的一個重要致炎因子，主要介導急性期反應，于1980被發(fā)現(xiàn)，1986年被統(tǒng)一命名為IL-6，它是由184個氨基酸組成的多功能糖蛋白，在感染的早期應答中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)T淋巴細胞、B淋巴細胞、血管內(nèi)皮細胞、單核巨噬細胞、滑膜細胞等多種細胞均可產(chǎn)生IL-6。日糧中添加PS，IL-6的含量低于NC組和PC組，PS可能是通過殺滅病原菌，來降低機體炎性反應程度，保證動物健康，提高生產(chǎn)性能。

3.4 對內(nèi)臟指數(shù)的影響

免疫器官的重量增減一定程度上代表著機體的免疫強弱，本試驗結(jié)果顯示與PC組相比，PS組肝臟指數(shù)差異顯著，PS組肝臟重量顯著高于抗生素組，表明日糧中添加PS具有增強機體免疫機能的作用，這可能與IGF-1含量顯著提高，緩解肝臟負擔提高肝臟功能有關。但心臟、脾臟、法氏囊指數(shù)均無顯著性差異，與鄒勝龍等報道PS添加影響法氏囊指數(shù)結(jié)果不一致。

4 結(jié) 論

飼料中添加植物甾醇 25 mg/kg 不影響黃羽肉雞生長性能，雞胰島素生長因子1含量和肝臟指數(shù)的提高表明其一定程度上可以促進黃羽肉雞代謝及生長。