茶葉在生長(zhǎng)過(guò)程中深受螨蟲危害，因此噠螨靈在茶葉生長(zhǎng)過(guò)程中被大量使用，導(dǎo)致茶葉中噠螨靈殘留較為嚴(yán)重。氣相色譜-質(zhì)譜法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中指定的茶葉中噠螨靈測(cè)定方法，該方法檢測(cè)靈敏度高，操作簡(jiǎn)便、快速。同時(shí)，對(duì)該檢測(cè)方法出具的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行不確定度評(píng)定是評(píng)價(jià)測(cè)量結(jié)果分散性的一個(gè)重要指標(biāo)，它也是判斷茶葉中噠螨靈是否超過(guò)最大限量值的重要依據(jù)[1-5]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

島津氣相色譜-質(zhì)譜儀（GCMS-QP2020）配有電子轟擊源（EI），帶自動(dòng)進(jìn)樣器（島津，Aoc-20i）；SH-Rxi-5MS色譜柱（島津）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；臺(tái)式離心機(jī)（湘儀）；分析天平（湘儀）；A級(jí)移液管；A級(jí)容量瓶；0.22 μm微孔濾膜。

噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品：99.86%，德國(guó)Dr；乙腈為色譜純；試驗(yàn)室所有用水均為超純水

1.2 儀器工作條件

（1）色譜條件。載氣：氦氣（純度≥99.999%）；載氣流量：1.2 mL·min-1；色譜柱溫度：40 ℃保持1 min，然后以30 ℃·min-1程序升溫至130 ℃，再以5 ℃·min-1程序升溫至250 ℃，再以10 ℃·min-1程序升溫至300 ℃，保持5 min。

（2）質(zhì)譜條件。電子轟擊源：70 eV；進(jìn)樣口溫度：290 ℃；GC-MS接口溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL；定量離子：m/z147；定性離子：m/z117和m/z364。

1.3 測(cè)定步驟

稱取2.00 g茶葉試樣于50 mL塑料離心管中，加10 mL水渦旋混勻，靜置30 min，加入15 mL乙腈-醋酸（99+1）、提取鹽包（6 g無(wú)水硫酸鎂+1.5 g醋酸鈉）、1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1 min后4 200 r·min-1離心5 min，吸取8 mL上清液于15 mL塑料離心管中，加入凈化鹽包（1 200 mg硫酸鎂+400 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠+400 mg C18+200 mg石墨化炭黑）渦旋混勻1 min，4 200 r·min-1離心5 min，準(zhǔn)確吸取2 mL上清液于10 mL試管中，40 ℃水浴中氮?dú)獯抵两?。加? mL乙酸乙酯，過(guò)0.22 μm濾膜，上機(jī)檢測(cè)。

2 數(shù)學(xué)模型

噠螨靈含量的計(jì)算公式為

式中：ω為樣品中噠螨靈的含量，mg·kg-1；c為定溶液中噠螨靈的濃度，μg·L-1；v為定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。

3 不確定度來(lái)源分析

根據(jù)測(cè)量方法和計(jì)算公式，影響茶葉中噠螨靈農(nóng)藥殘留測(cè)定的不確定因素主要是以下幾個(gè)方面：噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；工作曲線溶液配制；稱量標(biāo)物及茶葉樣品時(shí)天平帶入；玻璃儀器（包括移液管和容量瓶等）帶入；儀器重復(fù)性測(cè)定帶入；樣品前處理過(guò)程中帶入。

4 合成測(cè)量不確定度的各分量評(píng)定及組合

4.1 制備噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)工作溶液引入的不確定度urel(m1)

4.1.1 噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度

本試驗(yàn)中所用噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由德國(guó)Dr公司購(gòu)買，隨標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)附帶的證書中標(biāo)明：噠螨靈質(zhì)量百分含量為99.86 g·g-1，擴(kuò)展不確定度U=0.003 5 g·g-1。本試驗(yàn)中稱取噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品0.58 mg，計(jì)算噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品不確定度為

4.1.2 天平稱量引進(jìn)的不確定度

本試驗(yàn)中用萬(wàn)分之一天平稱量噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，天平的量程為0～210 g，查看天平校準(zhǔn)證書，在天平的量程范圍內(nèi)，示值誤差為±0.000 1 g，根據(jù)測(cè)量不確定度評(píng)定規(guī)則，按照均勻分布（矩形分布）考慮：

稱量噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)天平引入的不確定度為

4.1.3 移液管和容量瓶等帶入的不確定度

（1）移液管引入的不確定度。本試驗(yàn)中，使用1 mL的A級(jí)移液管，根據(jù)常用玻璃量器檢定規(guī)程（JJG 196—2006），容量誤差為±0.007 mL，按照均勻分布考慮（包含因子k=），1 mL的A級(jí)移液管引入的不確定度為

（2）溫度變化影響溶劑（乙腈）帶入的不確定度。本試驗(yàn)中，噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈稀釋，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度在±2 ℃以內(nèi)，查看相關(guān)證書可得乙腈的膨脹系數(shù)為1.37×10-3℃-1，按照均勻分布考慮，溫度變化影響乙腈帶入的不確定度為

（3）容量瓶引進(jìn)的不確定度。工作溶液最后均用10 mL的A級(jí)容量瓶定容，根據(jù)JJG 196—2006，容量誤差為±0.020 mL，按照均勻分布考慮（包含因子k=），10 mL的A級(jí)容量瓶引入的不確定度為

工作溶液制備過(guò)程中，4次用到1 mL的移液管，5次用到10 mL的容量瓶，工作溶液稀釋與定容帶入的不確定度為

因此，噠螨靈工作曲線溶液配制引入的相對(duì)不確定度為

4.2 茶葉樣品稱量引入的不確定度urel(m2)

用百分之一的天平準(zhǔn)確稱取茶葉樣品2.00 g，天平最大允許誤差為±0.01 g，按照均勻分布考慮（包含因子k=），樣品稱量引入的不確定度為

4.3 茶葉樣品溶液制備過(guò)程引入的不確定度urel(m3)

茶葉樣品處理過(guò)程中使用了5 mL和1 mL的A級(jí)移液管，根據(jù)JJG 196—2006，查得5 mL移液管示值誤差為±0.015 mL，按照均勻分布考慮（包含因子k=），試樣制備過(guò)程中引進(jìn)的不確定度為

4.4 儀器重復(fù)性測(cè)定帶入的不確定度urel(m4)

因?yàn)楸敬卧囼?yàn)中所選用的茶葉樣品中均未檢出噠螨靈農(nóng)藥，所以用工作曲線中的一個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行了6次重復(fù)性測(cè)試，對(duì)6次測(cè)量的結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)算儀器重復(fù)性測(cè)定引入的不確定度。結(jié)果如表1所示。

表1 重復(fù)性測(cè)定不確定度的結(jié)果表

4.5 茶葉樣品前處理過(guò)程引進(jìn)的不確定度urel(m5)

茶葉樣品因?yàn)樯睾勘容^高，因此前處理過(guò)程比較復(fù)雜，從茶葉中提取農(nóng)殘，到提取液凈化，再到濃縮，最后到定容，每一個(gè)步驟都會(huì)引入不確定度，分析每個(gè)步驟然后進(jìn)行不確定度評(píng)定是很難的，本試驗(yàn)通過(guò)加標(biāo)回收率對(duì)樣品的整個(gè)前處理過(guò)程引入的不確定度進(jìn)行評(píng)定。本試驗(yàn)中稱取未檢測(cè)出噠螨靈的茶葉樣品2.0 g，添加620 μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液0.5 mL，制成噠螨靈含量為0.155 mg·kg-1的樣品。按樣品前處理流程走，最后定容到1 mL，上機(jī)檢測(cè)。結(jié)果如表2所示。

4.6 計(jì)算茶葉中噠螨靈的不確定度

通過(guò)對(duì)影響茶葉中噠螨靈測(cè)定的各個(gè)因素引入的不確定度進(jìn)行評(píng)定，將影響噠螨靈不確定度的分量合成，計(jì)算噠螨靈的相對(duì)合成不確定度為

表2 樣品前處理不確定度結(jié)果表

其中取包含因子k=2，置信區(qū)間約為95%，添加含量為0.155 mg·kg-1的噠螨靈的茶葉其擴(kuò)展不確定度為u(ω噠螨靈)=2×urel(ω噠螨靈)×0.155=2×0.034 5×0.155=0.011 mg·kg-1。

5 結(jié)論

用該方法測(cè)量茶葉中噠螨靈含量為（0.155±0.011）mg·kg-1，k=2。本試驗(yàn)分析了5個(gè)影響茶葉中噠螨靈殘留量測(cè)定不確定度的因素，結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備過(guò)程影響最大，茶葉樣品溶液制備次之，然后是儀器的穩(wěn)定性。