賈 哲，桑志祥，張夢(mèng)馨，丁凌霄，徐海軍

（皖西學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，安徽 六安 237000）

鞣花酸又名沒(méi)食子酸，廣泛存在于水果和堅(jiān)果中，比如石榴、葡萄、核桃、草莓等。鞣花酸具有抗炎、抗氧化、抗癌、抑菌、調(diào)控細(xì)胞周期、保護(hù)胃腸道和緩解機(jī)體中毒病理變化等生物活性[1-2]。李佳豪等[3]在1歲純血馬日糧中添加30 mg·kg-1體重的鞣花酸，發(fā)現(xiàn)鞣花酸可促進(jìn)消化利用率及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的沉積，并顯著提高馬匹總增重及日增重。孫慧等[4]研究發(fā)現(xiàn)鞣花酸能夠改善由馬兜鈴酸Ⅰ引起的小鼠急性腎損傷，并發(fā)現(xiàn)鞣花酸能通過(guò)抑制小鼠腎臟NF-κB通路，降低炎癥因子水平，從而達(dá)到緩解腎臟損傷。龍毅等[5]通過(guò)連續(xù)灌胃小鼠14 d不同濃度的鞣花酸后，進(jìn)行腹腔注射四氯化碳（CCl4）造模，發(fā)現(xiàn)鞣花酸能夠顯著降低模型小鼠血漿中丙二醛（MDA）水平，并顯著提高超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）及過(guò)氧化氫酶（CAT）水平，表明鞣花酸可能通過(guò)抗自由基和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化機(jī)制來(lái)緩解肝臟損傷。黃小霞[6]通過(guò)鞣花酸對(duì)慢性應(yīng)激模型小鼠的影響研究發(fā)現(xiàn)，鞣花酸能夠降低小鼠血液中炎性因子水平，能夠改善氨基酸代謝、脂代謝和腸道菌群來(lái)緩解小鼠慢性應(yīng)激。脂多糖（Lipopolysacccharide，LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，LPS可以激活機(jī)體免疫反應(yīng)，繼而促進(jìn)炎癥介質(zhì)的生成。若LPS過(guò)量刺激機(jī)體時(shí)，則會(huì)導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)[7]。有研究表明鞣花酸可以緩解脂多糖誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)，降低細(xì)胞分泌炎癥因子濃度[8]，但關(guān)于鞣花酸對(duì)脂多糖應(yīng)激炎癥模型血常規(guī)影響的報(bào)道較少。因此，本研究以腹腔注射脂多糖小鼠建立應(yīng)激炎癥模型，研究鞣花酸對(duì)脂多糖所致小鼠應(yīng)激模型血常規(guī)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明小白鼠45只，體重（20±2）g，購(gòu)自安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)環(huán)境溫度為24～26℃，濕度55%～65%，自由飲食。

1.2 試劑和儀器

鞣花酸，購(gòu)于五峰赤誠(chéng)生物科技股份有限公司；邁瑞B(yǎng)C-2800VET型血細(xì)胞分析儀，購(gòu)自深圳邁瑞動(dòng)物醫(yī)療科技股份有限公司；LPS，購(gòu)自白鯊科技有限公司。

1.3 動(dòng)物分組與給藥方法

將45只小鼠隨機(jī)分為3組，即空白組（CT）、脂多糖模型組（LMT）和鞣花酸組（EAT），每組15只?？瞻捉M和脂多糖模型組正常飼喂鼠糧，鞣花酸組鼠糧添加1 g·kg-1鞣花酸，飼喂15 d后稱重，并分別對(duì)脂多糖模型組和鞣花酸組小鼠按照1 mg·kg-1體重的劑量腹腔注射脂多糖，空白組小鼠腹腔注射對(duì)應(yīng)體積的生理鹽水。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

腹腔注射脂多糖6 h后進(jìn)行水合氯醛麻醉，處死小鼠，采集抗凝血。

1.4.1 小鼠器官指數(shù)

處死小鼠后，分別采集小鼠心臟、肝臟、腎臟和脾臟并稱重，器官指數(shù)=器官重量/小鼠體重。

1.4.2 血常規(guī)指標(biāo)

按照邁瑞B(yǎng)C-2800VET型血細(xì)胞分析儀要求，檢測(cè)采集的抗凝血液樣本，測(cè)定小鼠白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量及血紅蛋白、血細(xì)胞比容和平均紅細(xì)胞容積等指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，P＜0.05表示差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 鞣花酸對(duì)小鼠體重的影響

飼養(yǎng)15 d后，測(cè)定小鼠體重，結(jié)果見表1，鞣花酸組小鼠體重較CT組和LMT組有所增加，但差異不顯著（P＞0.05）。

表1 鞣花酸對(duì)小鼠體重的影響g

2.2 鞣花酸對(duì)器官指數(shù)的影響

器官指數(shù)測(cè)定結(jié)果見表2，LMT組脾臟指數(shù)較CT組、EAT組有顯著性提高（P＜0.05）；其他臟器指數(shù)各組間無(wú)差異性差異（P＞0.05）。

表2 鞣花酸對(duì)小鼠各器官指數(shù)的影響%

2.3 鞣花酸對(duì)小鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

2.3.1 鞣花酸對(duì)LMT組小鼠白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的影響

LMT組小鼠的白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比顯著高于CT組、EAT組小鼠（P＜0.05），EAT組小鼠白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比顯著高于CT組（P＜0.05）。LMT、EAT組小鼠淋巴細(xì)胞數(shù)比CT組小鼠有所降低，但差異不顯著（P＞0.05）。LMT小鼠淋巴細(xì)胞百分比顯著低于CT組和EAT組小鼠（P＜0.05)；單核細(xì)胞百分比各組間比較無(wú)顯著性差異變化（P＞0.05）。見表3。

表3 鞣花酸對(duì)小鼠白細(xì)胞的影響

2.3.2 鞣花酸對(duì)小鼠紅細(xì)胞的影響

EAT、CT和LMT各組間RBC、HGB和HCT數(shù)值無(wú)顯著性差異（P＞0.05），LMT小鼠MCV較CT組有顯著性升高（P＜0.05）。見表4。

表4 鞣花酸對(duì)小鼠紅細(xì)胞的影響

3 討論與結(jié)論

炎癥是與很多疾病密切相關(guān)的基礎(chǔ)病理過(guò)程之一，LPS作為革蘭陰性菌細(xì)胞壁的主要成分之一，可以誘發(fā)炎癥細(xì)胞因子和相關(guān)炎癥介質(zhì)的大量釋放，進(jìn)而引起全身失控性炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致休克而死亡。目前研究已有較多途徑通過(guò)LPS來(lái)構(gòu)建不同疾病或器官炎癥模型[9-11]。鐘友寶[12]對(duì)仔豬使用LPS腹腔注射發(fā)現(xiàn)初期LPS會(huì)引起仔豬嘔吐腹瀉、食欲降低、體溫上升等癥狀，仔豬脾臟重及指數(shù)明顯增大，并引起外周血細(xì)胞成分發(fā)生變化，細(xì)胞數(shù)量和比例發(fā)生顯著變化。本試驗(yàn)按照1 mg·kg-1進(jìn)行腹腔注射脂多糖來(lái)建立急性炎癥模型，注射后小鼠出現(xiàn)蜷縮、不喜活動(dòng)等現(xiàn)象。血常規(guī)結(jié)果顯示：LMT組小鼠的白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比顯著高于CT、EAT組小鼠（P＜0.05），LMT組小鼠淋巴細(xì)胞數(shù)比CT組小鼠有所降低，差異不顯著（P＞0.05）。LMT組小鼠淋巴細(xì)胞百分比顯著低于CT組小鼠（P＜0.05）；單核細(xì)胞百分比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。表明腹腔注射LPS能顯著提高小鼠血液白細(xì)胞數(shù)目，其中以中性粒細(xì)胞升高為主。結(jié)合注射后小鼠行為變化、器官指數(shù)及血細(xì)胞的變化，說(shuō)明腹腔注射LPS構(gòu)建的小鼠急性炎癥模型構(gòu)建成功。

鞣花酸具有抗炎、抗氧化、抗癌、抑菌、調(diào)控細(xì)胞周期、保護(hù)胃腸道、緩解機(jī)體中毒病理變化等生物活性。趙銘偉等[8]在斷奶仔豬日糧中添加鞣花酸發(fā)現(xiàn)鞣花酸可提高仔豬日增重、降低腹瀉率、改善胃腸道菌群，并在體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，50 μg·mL-1的鞣花酸能夠顯著降低LPS誘導(dǎo)的IPEC-J2細(xì)胞炎癥水平。通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，鞣花酸對(duì)小鼠生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，能夠提高小鼠體重，但差異不顯著。該結(jié)果可能與小鼠自身體重小，在生長(zhǎng)過(guò)程中體重變化區(qū)間較小且個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育有差異性有關(guān)，雖能發(fā)現(xiàn)鞣花酸對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能有促進(jìn)作用，但差異不顯著。后續(xù)試驗(yàn)可考慮在生長(zhǎng)發(fā)育較快的動(dòng)物上進(jìn)一步探究其能否提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能。脾臟是重要免疫器官，在清除和吞噬血液中病原時(shí)易遭受損傷而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[13]。鐘友寶[12]研究發(fā)現(xiàn)腹腔注射LPS后，豬脾臟出現(xiàn)充血腫大，造成脾臟指數(shù)升高。雷媛娣[14]研究發(fā)現(xiàn)鞣花酸能通過(guò)抗氧化和抗凋亡途徑明顯改善硫酸鈹所致大鼠的脾臟病理變化，降低硫酸鈹染毒組的脾臟指數(shù)并抑制脾淋巴細(xì)胞異常增殖。本研究發(fā)現(xiàn)EAT組小鼠的脾臟指數(shù)較LMT顯著性降低，表明鞣花酸對(duì)脂多糖應(yīng)激造成的脾臟損傷有一定的保護(hù)作用。白細(xì)胞作為反應(yīng)機(jī)體重要的血液炎癥指標(biāo)，有研究發(fā)現(xiàn)鞣花酸能夠降低BeSO4免疫損傷模型大鼠模型白細(xì)胞總數(shù)。曾鴻芳等[15]使用中藥天抗對(duì)LPS炎癥模型進(jìn)行研究，結(jié)果能夠降低脾臟指數(shù)、降低血液中炎癥因子的表達(dá)水平來(lái)緩解機(jī)體炎癥反應(yīng)。對(duì)于本試驗(yàn)中外周血細(xì)胞的變化，較LMT而言，EAT小鼠的白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞百分比和平均紅細(xì)胞體積均有顯著性降低，與雷媛娣[14]的研究結(jié)果一致。說(shuō)明鞣花酸能夠降低LPS對(duì)小鼠造成的應(yīng)激反應(yīng)，緩解機(jī)體炎癥反應(yīng)，對(duì)小鼠有一定的保護(hù)作用，但具體通過(guò)何種途徑產(chǎn)生的作用仍有待進(jìn)一步探究。