黃 河 楊 李

(四川省化工質(zhì)量安全檢測(cè)研究院，四川成都，611600)

1 前言

百草枯(Paraquat)，1，1’-二甲基-4，4’聯(lián)吡啶陽(yáng)離子鹽[1]，生物活性為除草劑。百草枯對(duì)人毒性極大，且無(wú)特效解毒藥，口服中毒死亡率極高[2]。我國(guó)自2014年7月1日起，撤銷(xiāo)百草枯水劑登記和生產(chǎn)許可，停止生產(chǎn)；但保留母藥生產(chǎn)企業(yè)水劑出口境外登記，允許專(zhuān)供出口生產(chǎn)；2016年7月1日停止水劑在國(guó)內(nèi)銷(xiāo)售和使用[3]。百草枯水劑在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上已很少見(jiàn)，但在部分標(biāo)注為“敵草快”的除草劑產(chǎn)品中卻有百草枯成分的檢出。因各種原因服下“敵草快”農(nóng)藥卻因其含百草枯而造成的悲劇時(shí)有發(fā)生，此類(lèi)產(chǎn)品對(duì)社會(huì)危害極大。本方法使用C18反相柱和二極管陣列檢測(cè)器對(duì)敵草快水劑中百草枯進(jìn)行定性定量分析。本方法分析效率高、簡(jiǎn)潔準(zhǔn)確。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和儀器

2.1.1 試劑

乙腈(色譜純，MREDA品牌)；磷酸(分析純，成都科龍化工試劑廠)；三乙胺(分析純，成都科龍化工試劑廠)；庚烷磺酸鈉(分析純，成都科龍化工試劑廠)；水(超純水機(jī)制取,18.2MΩ)；百草枯二氯化物標(biāo)樣(已知準(zhǔn)確質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.9%，120℃下烘干4小時(shí)后使用)；敵草快二溴化物標(biāo)樣(已知準(zhǔn)確質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%)；敵草快水劑(質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%和200g/L，市場(chǎng)購(gòu)得，篩選出疑似添加百草枯的樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn))。

2.1.2 儀器

安捷倫1260Inffinty液相色譜儀(檢測(cè)器為DAD，安捷倫科技有限公司)；色譜柱(CAPCELL PAK C18250mm×4.6mm不銹鋼柱，填料5μm)；Chemstation C.01.07版化學(xué)工作站(安捷倫科技有限公司，帶光譜功能)；KQ3200E型超聲波清洗機(jī)(昆山超聲)；0.45μm針式過(guò)濾頭(津騰牌)。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件

流動(dòng)相：稱(chēng)取庚烷磺酸鈉3.64g，加入900mL超純水超聲溶解后再加入16mL磷酸，用三乙胺調(diào)其pH值至2.1，再加入乙腈100mL，混合均勻，過(guò)濾脫氣；流量：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：290 nm；進(jìn)樣量：5.0μL；保留時(shí)間：百草枯二氯化物約5.6min，敵草快二溴化物約6.3min。典型的百草枯二氯化物標(biāo)準(zhǔn)品、敵草快二溴化物標(biāo)準(zhǔn)品、樣品中百草枯和樣品中敵草快二溴化物色譜圖如圖1，圖2，圖3和圖4。

圖1 百草枯二氯化物標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 敵草快二溴化物標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖3 敵草快水劑中的百草枯色譜圖

圖4 敵草快水劑中的敵草快二溴化物色譜圖

2.2.2 標(biāo)樣溶液的制備

稱(chēng)取0.1g百草枯二氯化物(精確至0.0001g)于50mL容量瓶中，加入40mL水，超聲溶解，待恢復(fù)至室溫后用水定容，搖勻得百草枯母液。準(zhǔn)確移取5mL百草枯母液至另一50mL容量瓶中，用水定容搖勻，得到濃度為200μg/mL的標(biāo)液，再采用逐級(jí)稀釋的方式，配制濃度為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的標(biāo)液。

2.2.3 試樣溶液的制備

稱(chēng)取敵草快水劑0.2g(精確至0.0001g)于50mL容量瓶中，加入40mL水，超聲溶解，待恢復(fù)至室溫后用水定容，搖勻，用0.45μm針式過(guò)濾頭過(guò)濾。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在2.2.1的操作條件下，待基線穩(wěn)定后，注入多針中間濃度標(biāo)樣溶液，待連續(xù)兩針百草枯二氯化物峰面積相對(duì)變化<1.5%后，按照低濃度到高濃度的順序進(jìn)樣檢測(cè)，每個(gè)濃度進(jìn)兩次，以百草枯二氯化物標(biāo)樣溶液濃度和獲得的百草枯二氯化物峰面積均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.5 測(cè)定

用2.2.1的操作條件測(cè)定試樣溶液，當(dāng)試樣中疑似百草枯峰面積超出2.2.4中最高濃度的峰面積時(shí)，需稀釋后再進(jìn)樣測(cè)定。

2.2.6 定性

以保留時(shí)間和光譜圖定性。當(dāng)試樣溶液中出現(xiàn)色譜峰且其與百草枯二氯化物保留時(shí)間相對(duì)差值在1.5%以內(nèi)時(shí)，分別提取標(biāo)樣和試樣的光譜圖，并進(jìn)行重疊顯示。當(dāng)二者光譜圖能重合時(shí)，試樣中包含百草枯二氯化物。如圖5。

(說(shuō)明：1-樣品中百草枯光譜圖；2-標(biāo)品中百草枯光譜圖。)

2.2.7 定量

試樣中百草枯的含量W1(%)按式(1)計(jì)算：

(1)

式(1)中：c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的百草枯二氯化物濃度，μg/mL；V——試樣定容體積，mL；m——標(biāo)樣質(zhì)量，克(g)；10000——質(zhì)量換算系數(shù)；186.3/257.2百草枯二氯化物到百草枯的換算系數(shù)。

3 結(jié)果與分析

3.1 流動(dòng)相的選擇

參考百草枯水劑國(guó)標(biāo)GB 19308-2003[3]和敵草快水劑化工標(biāo)準(zhǔn)HG/T 5246-2017[4]，二者流動(dòng)相比較除pH值不同外其他均一樣。實(shí)驗(yàn)對(duì)比測(cè)試發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用百草枯水劑國(guó)標(biāo)中調(diào)節(jié)pH值至2.0時(shí)，敵草快和百草枯較為接近，不能實(shí)現(xiàn)基線分離。當(dāng)流動(dòng)相pH值為2.1時(shí)，敵草快和百草枯能實(shí)現(xiàn)基線分離，滿足定量要求。且此時(shí)敵草快和百草枯峰型尖銳對(duì)稱(chēng)，保留時(shí)間適當(dāng)，能有效提高分析效率。

3.2 方法特異性

本試驗(yàn)采用DAD檢測(cè)器對(duì)本分析方法進(jìn)行特異性鑒別。結(jié)果表明：百草枯二氯化物標(biāo)樣與敵草快水劑中的百草枯光譜峰純度均>960，目標(biāo)化合物處無(wú)其他干擾物質(zhì)，可以認(rèn)定為純峰，滿足定量計(jì)算要求。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

使用DAD檢測(cè)器對(duì)百草枯二氯化物標(biāo)品和敵草快二溴化物標(biāo)品進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到兩者的紫外光譜圖，將二者疊加顯示，如圖6?？芍?二者在230nm和285nm左右有交集，這兩個(gè)波長(zhǎng)下可以同時(shí)對(duì)二者進(jìn)行檢測(cè)。參照百草枯和敵草快的國(guó)標(biāo)，當(dāng)采用290nm時(shí)，百草枯和敵草快均有很強(qiáng)的吸收，可以同時(shí)評(píng)估樣品中是否按規(guī)添加敵草快。此條件下雜質(zhì)響應(yīng)值小。因此選定290 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

(說(shuō)明：1-百草枯光譜圖；2-敵草快二溴化物光譜圖。)

3.4 線性相關(guān)性測(cè)定

稱(chēng)取百草枯二氯化物標(biāo)準(zhǔn)品0.0959g于50mL容量瓶中，純水溶解定容后，按照2.2.2方法配制成5個(gè)濃度標(biāo)液。進(jìn)樣分析，每濃度進(jìn)樣兩次，取峰面積平均值。以百草枯二氯化物的峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪圖，得到線性方程：y=5.332x+3.9077，其相關(guān)系數(shù)：R2=0.9999。線性關(guān)系圖見(jiàn)圖7?？梢?jiàn)該方法線性較好，線性范圍較寬，能滿足目標(biāo)物定量分析需求。

圖7 百草枯二氯化物的線性關(guān)系圖

3.5 精密度試驗(yàn)

按2.2中方法對(duì)同一含百草枯的敵草快水劑中百草枯做五次重復(fù)檢測(cè)，將所得結(jié)果做計(jì)算，得其變異系數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)偏差，見(jiàn)表1?？芍痉椒▽?duì)百草枯分析的變異系數(shù)為0.83%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.037。

表1 方法精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

為驗(yàn)證本方法的準(zhǔn)確度,特進(jìn)行了百草枯的回收率試驗(yàn)。在已知百草枯質(zhì)量分?jǐn)?shù)的5份敵草快水劑樣品中加入同樣量標(biāo)準(zhǔn)品,按“2.2.1”中的方法分析其質(zhì)量,計(jì)算本方法回收率。結(jié)果見(jiàn)表2?？芍俨菘莸钠骄厥章蕿?8.7%?？梢?jiàn)本方法的回收率較高,能準(zhǔn)確有效分析敵草快水劑中百草枯的含量。

表2 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

由上可知，此方法分析敵草快水劑中百草枯的質(zhì)量分?jǐn)?shù),其線性范圍寬、線性關(guān)系好，準(zhǔn)確度和精密度良好，且分析方法簡(jiǎn)便、快速。因此，此方法是進(jìn)行敵草快水劑中百草枯分析檢測(cè)的有效可靠方法。