雷燕妮，張小斌，陳書存

(1 商洛學(xué)院 a 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，b 健康管理學(xué)院，陜西 商洛 726000；2 陜西秦嶺特色生物資源產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，陜西 商洛 726000；3 商洛市中醫(yī)醫(yī)院，陜西 商洛 726000)

蛹蟲草(CordycepsmilitarisL.)隸屬于子囊菌門麥角菌科蟲草屬，又稱北冬蟲夏草或北蟲草。作為傳統(tǒng)名貴中藥材，蛹蟲草在功能食品和藥品方面具有重要的實(shí)用價(jià)值，現(xiàn)已被國(guó)家衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品[1-2]。孟澤彬等[3]研究表明，蛹蟲草化學(xué)成分主要有核苷類、蟲草多糖、蟲草甾醇和糖醇類、黃酮類以及多種蛋白質(zhì)、氨基酸等，此外，其還富含多種微量元素[4]。已有研究表明，蛹蟲草具有非常廣泛的藥理活性，如具有抗菌消炎、鎮(zhèn)痛抗疲勞、抗衰老、抗氧化和抗腫瘤等方面的功效。

作為蛹蟲草的主要活性物質(zhì)，蛹蟲草多糖(Cordycepsmilitarispolysaccharide,CMPs)具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降糖保肝和免疫調(diào)節(jié)之功效[4-6]。近年來，國(guó)內(nèi)外針對(duì)蛹蟲草多糖的研究較多集中在分離純化工藝優(yōu)化[7]、多糖構(gòu)型分析[8]、多糖組成[9]等方面，有關(guān)蛹蟲草多糖的藥理活性研究多集中于體外抗氧化和保護(hù)肝損傷方面[10-12]，而對(duì)于蛹蟲草多糖體內(nèi)和體外抗氧化活性進(jìn)行系統(tǒng)性研究的報(bào)道很少見，如吳楊洋等[7]研究表明,蛹蟲草多糖具有一定的體外清除DPPH自由基和羥自由基能力及還原力，而未涉及體內(nèi)抗氧化活性；江琦等[8]研究發(fā)現(xiàn)，蛹蟲草多糖具有體外清除DPPH自由基和ABTS自由基的作用，亦未涉及體內(nèi)抗氧化活性的研究。因此本研究著重探討蛹蟲草多糖體內(nèi)和體外抗氧化活性，旨在為蛹蟲草多糖抗衰老藥物研發(fā)提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蛹蟲草，購(gòu)自徐州鴻宇農(nóng)業(yè)科技有限公司，經(jīng)西北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物教研室李智選研究員鑒定為麥角菌科蟲草屬真菌蛹蟲草；二乙氨基乙基纖維素52(DEAE cellulose DE-52)，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；羥自由基測(cè)定試劑盒，總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和2,3-喹啉二甲酸(BCA)蛋白定量檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；無水葡萄糖、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)，均購(gòu)自上海Sigma-Aldrich公司。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，試驗(yàn)用水為蒸餾水。

1.2 主要儀器與設(shè)備

RT6000型酶標(biāo)分析儀，購(gòu)自深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；7600CRT雙光束紫外可見分光光度計(jì)，購(gòu)自上海菁華科技儀器有限公司；DBS-100N型自動(dòng)部分收集器、DHL-B型數(shù)顯恒流泵，購(gòu)自上海滬西分析儀器有限公司；BK-FD12PT型立式冷凍干燥機(jī)，購(gòu)自山東博科科學(xué)儀器有限公司；TGL-16M型低溫高速冷凍離心機(jī)，購(gòu)自湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司。

1.3 蛹蟲草多糖的分離純化

取適量蛹蟲草子實(shí)體粉末(m粉)，參照雷燕妮等[13]多糖制備方法在微波輔助下提取蛹蟲草多糖，蛹蟲草粗多糖含量采用苯酚-硫酸法[14]測(cè)定。采用DEAE-52纖維素柱色譜法分離純化蛹蟲草多糖，采用苯酚-硫酸法[14]檢測(cè)每管總糖含量，并繪制以管數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光值(波長(zhǎng)492 nm)為縱坐標(biāo)的洗脫曲線；依據(jù)洗脫曲線收集不同吸收峰段的多糖組分，將收集到的組分真空冷凍干燥即得蛹蟲草多糖粉末(CMPs)，精確稱量質(zhì)量(m多糖)，按下式計(jì)算多糖產(chǎn)率。采用BCA試劑盒測(cè)定多糖粉末中蛋白質(zhì)含量[15]，采用福林酚法[16]測(cè)定總酚類成分含量。

多糖產(chǎn)率=m多糖/m粉×100%。

式中：m多糖為分離純化后經(jīng)冷凍干燥的蛹蟲草多糖質(zhì)量(g)，m粉為提取時(shí)稱取的蛹蟲草子實(shí)體粉末質(zhì)量(g)。

1.4 蛹蟲草多糖的體外抗氧化活性評(píng)價(jià)

精密稱取一定量的CMPs配制成10 mg/mL原液，分別用蒸餾水稀釋至0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mg/mL，以相同質(zhì)量濃度梯度的維生素C(Vc)為陽(yáng)性對(duì)照，分別測(cè)定上述待測(cè)樣品和對(duì)照溶液對(duì)羥自由基、超氧陰離子、ABTS自由基和DPPH自由基的清除作用，按照參考文獻(xiàn)[13,16]的方法依次加入相應(yīng)反應(yīng)試劑，測(cè)定吸光度值，每個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)5次，計(jì)算蛹蟲草多糖和Vc對(duì)各自由基的清除率(IR)：

IR=[(OD樣品-OD本底)/OD對(duì)照]×100%。

式中：OD樣品為樣品(多糖樣品+ABTS)的吸光度值，OD對(duì)照表示陰性對(duì)照(ABTS+樣品溶劑)的吸光度值，OD本底為本底吸光度值。其他自由基體系計(jì)算方法與此類似。

以蛹蟲草多糖(CMPs)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以各自由基清除率為縱坐標(biāo)繪制曲線，采用Excel軟件計(jì)算樣品對(duì)各自由基的半數(shù)有效質(zhì)量濃度(EC50)。

1.5 蛹蟲草多糖體內(nèi)抗氧化活性評(píng)價(jià)

1.5.1 試驗(yàn)動(dòng)物選擇 Specific pathogen free(SPF)級(jí)昆明(KM)小鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量15～20 g/只，由空軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(陜)2019-001，飼養(yǎng)溫度20～25 ℃、相對(duì)濕度45%～75%。

1.5.2 動(dòng)物分組及試驗(yàn)小鼠衰老模型建立 60只昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)分為2組，正常對(duì)照組10只，模型組50只。模型組小鼠頸部皮下注射D-半乳糖(500 mg/kg)，注射劑量為10 mL/kg，每天注射1次，連續(xù)注射5周；正常對(duì)照組小鼠頸部皮下注射等量生理鹽水。5周后衰老模型組小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)情況較正常對(duì)照組遲緩，且出現(xiàn)毛色暗淡、飲食量下降、反應(yīng)遲緩、喜睡眠等典型衰老特征，表明造模成功[17-19]。隨后將50只模型組小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，即模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(Vc，100 mg/mL)、蛹蟲草多糖高劑量組(300 mg/mL)、中劑量組(200 mg/mL)和低劑量組(100 mg/mL)，灌胃劑量為10 mL/kg，每天1次，連續(xù)灌胃時(shí)間5周。給藥期間正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等量生理鹽水。

1.5.3 體內(nèi)抗氧化指標(biāo)測(cè)定 體質(zhì)量：建模成功后每周測(cè)量小鼠體質(zhì)量1次，觀察小鼠體質(zhì)量變化情況。

臟器指數(shù)：小鼠頸椎脫臼處死后，分離出胸腺、脾臟和腦，用濾紙吸干凈表面血液并稱質(zhì)量，按下式計(jì)算相應(yīng)臟器指數(shù)：

臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量(g)/小鼠體質(zhì)量(g)。

抗氧化相關(guān)指標(biāo)：小鼠末次給藥后饑餓過夜，次日處死后摘眼球取血，加抗凝劑靜置1 h后，3 000 r/min離心10 min，取上清液于4 ℃保存。采用羥自由基測(cè)定試劑盒檢測(cè)小鼠血清羥自由基的抑制能力[20]；硫代巴比妥酸法[17-19]測(cè)定MDA含量；羥胺法[17]測(cè)定總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性；可見光比色法[17]測(cè)定過氧化氫酶(CAT)活性；DNTB速率比色法[18-19]測(cè)定谷光甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。所有指標(biāo)測(cè)定均嚴(yán)格參照試劑盒操作說明進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)除特殊說明外均采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，采用SPSS 19.0軟件計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差，并用配對(duì)t檢驗(yàn)和兩樣本均數(shù)比較t檢驗(yàn)檢測(cè)顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛹蟲草多糖的分離純化與定性分析

利用DEAE-52的吸附效應(yīng)，對(duì)提取的蛹蟲草多糖進(jìn)行分離純化，洗脫曲線如圖1所示。

從圖1可以看出，不同質(zhì)量濃度氯化鈉溶液洗脫蛹蟲草多糖能夠得到2個(gè)峰(管18～25和管55～70)，因第1個(gè)峰面積和管數(shù)較小，無進(jìn)一步深入研究?jī)r(jià)值。故后續(xù)試驗(yàn)收集第2個(gè)洗脫峰溶液，濃縮、透析后進(jìn)行真空冷凍干燥，得到蛹蟲草多糖(CMPs)，其多糖產(chǎn)率為8.23%。

按照1.3節(jié)的苯酚-硫酸法測(cè)得DEAE-52純化前后蛹蟲草多糖提取物中總糖含量分別為51.83%和82.57%。運(yùn)用BCA試劑盒法測(cè)定純化后CMPs中蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.27%，福林酚法未檢出總酚類成分。由此可見，相比蛹蟲草粗多糖含量，DEAE-52纖維素柱色譜法顯著提高了提取物中多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，可用于后續(xù)相關(guān)生物活性研究。

2.2 CMPs的體外抗氧化活性

2.2.1 對(duì)羥自由基的清除能力 從圖2-A可以看出，在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)(0.5～3.0 mg/mL)，CMPs質(zhì)量濃度與羥自由基(·OH)的清除率之間呈良好的質(zhì)量濃度依賴關(guān)系，CMPs質(zhì)量濃度越大其對(duì)·OH的清除率愈高。當(dāng)CMPs質(zhì)量濃度從0.5 mg/mL增加到3.0 mg/mL時(shí)，其對(duì)·OH的清除率則從13.8%上升到88.3%；在0.5～1.5 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，CMPs對(duì)·OH的清除率增幅較緩；而在1.5～3.0 mg/mL時(shí)呈現(xiàn)快速增長(zhǎng)的趨勢(shì)；經(jīng)Excel軟件計(jì)算，CMPs對(duì)·OH清除的半數(shù)有效質(zhì)量濃度(EC50)為1.912 mg/mL。

由圖2-A還可以看出，CMPs在較低質(zhì)量濃度時(shí)對(duì)·OH的清除率顯著低于同質(zhì)量濃度陽(yáng)性對(duì)照(VC)(P<0.05)；當(dāng)CMPs質(zhì)量濃度達(dá)到3.0 mg/mL時(shí)，其與同質(zhì)量濃度VC對(duì)·OH的清除率無顯著差異。

2.2.2 對(duì)超氧陰離子的清除能力 由圖2-B可以看出，CMPs對(duì)超氧陰離子的清除率與其質(zhì)量濃度成線性遞增趨勢(shì)，經(jīng)計(jì)算其EC50值為2.153 mg/mL，VC的EC50值為0.539 mg/mL，二者EC50之間存在顯著差異。從圖2-B還可以發(fā)現(xiàn)，在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)CMPs對(duì)超氧陰離子的清除能力明顯弱于同劑量的陽(yáng)性對(duì)照，尤其是在0.5～2.0 mg/mL的低質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，二者之間差異極顯著(P<0.01)。當(dāng)樣品質(zhì)量濃度為3.0 mg/mL時(shí)，CMPs和Vc對(duì)超氧陰離子的清除率分別為85.1%和100.0%，二者之間仍存在顯著差異(P<0.05)。

2.2.3 對(duì)ABTS自由基的清除能力 從圖3-A可以看出，CMPs對(duì)ABTS·的清除率隨其質(zhì)量濃度的增加呈線性遞增趨勢(shì)，CMPs和Vc的EC50值分別為1.612和0.578 mg/mL。隨著樣品質(zhì)量濃度的增加，CMPs與Vc對(duì)ABTS·清除率的差距不斷縮小；當(dāng)CMPs質(zhì)量濃度為3.0 mg/mL時(shí)，其對(duì)ABTS·的清除率為93.5%，與同劑量陽(yáng)性對(duì)照Vc效果相當(dāng)。

2.2.4 對(duì)DPPH自由基的清除能力 由圖3-B可以看出，CMPs對(duì)DPPH·的清除率具有良好的質(zhì)量濃度依存性，且隨多糖質(zhì)量濃度的不斷增加，其對(duì)DPPH·清除率呈逐漸上升趨勢(shì)。CMPs的半數(shù)有效質(zhì)量濃度(EC50)為2.058 mg/mL，Vc的EC50為0.269 mg/mL，二者之間存在顯著差異(P<0.05)。當(dāng)CMPs質(zhì)量濃度達(dá)到3.0 mg/mL時(shí)，其對(duì)DPPH·的清除率為88.3%，接近相同劑量的陽(yáng)性對(duì)照(VC)。

2.3 CMPs的體內(nèi)抗氧化活性

2.3.1 對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響 在整個(gè)試驗(yàn)期間，各組小鼠均正常生長(zhǎng)，無異常死亡情況發(fā)生。從表1可以看出，各試驗(yàn)組小鼠初始體質(zhì)量無顯著差異(P>0.05)，適應(yīng)飼養(yǎng)第1周后發(fā)現(xiàn)各組小鼠均正常健康生長(zhǎng)，組間體質(zhì)量無顯著差異。衰老模型造模完成后的第6周發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比，所有模型組小鼠體質(zhì)量增加趨勢(shì)明顯緩慢，且模型組小鼠開始出現(xiàn)毛色暗淡以及毛發(fā)脫落、反應(yīng)遲鈍、行動(dòng)遲緩和精神萎靡等典型的衰老特征。藥物處理結(jié)束的第11周發(fā)現(xiàn)，相較于正常對(duì)照組，其余各組小鼠體質(zhì)量增加顯著緩慢(P<0.05)；同模型對(duì)照組相比，CMPs及Vc處理組小鼠體質(zhì)量均有不同程度增加，且隨著CMPs劑量的增加，小鼠體質(zhì)量增加明顯。說明CMPs及Vc處理能夠緩解小鼠衰老現(xiàn)象。

2.3.2 對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響 從表2可以看出，相較于正常對(duì)照組，模型對(duì)照組小鼠的肝臟、脾臟和腦指數(shù)顯著降低(P<0.05)，而胸腺指數(shù)亦呈現(xiàn)明顯降低趨勢(shì)，說明模型對(duì)照組小鼠各臟器呈現(xiàn)明顯的萎縮現(xiàn)象，表明D-半乳糖造模成功。與模型對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組(VC)能顯著增加模型小鼠的肝臟、胸腺和脾臟指數(shù)(P<0.05)；腦指數(shù)也逐漸恢復(fù)到正常狀態(tài)，但無顯著差異(P>0.05)；CMPs能明顯增加模型小鼠肝臟、胸腺、脾臟和腦指數(shù)，其中CMPs高劑量組小鼠的肝臟、胸腺、脾臟和腦指數(shù)顯著升高(P<0.05)。表明蛹蟲草多糖能緩解小鼠的衰老現(xiàn)象。

表2 蛹蟲草多糖對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響Table 2 Effects of CMPs on organ indexes in mice g/kg

2.3.3 對(duì)小鼠血清羥自由基抑制能力的影響 從表3中可以看出，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組小鼠血清中羥自由基抑制能力顯著下降(P<0.05)。不同質(zhì)量濃度CMPs對(duì)羥自由基的抑制能力差異顯著(P<0.05)，同時(shí)從抑制率可以看出CMPs高劑量組(62.57%)>中劑量組(51.28%)>低劑量組(41.93%)，說明CMPs對(duì)小鼠血清中羥自由基的抑制能力與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)。同模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組Vc和CMPs高劑量組極顯著提高血清羥自由基抑制能力(P<0.01)，且二者作用不相上下；CMPs中劑量組可以顯著提高小鼠血清羥自由基抑制能力，CMPs低劑量組的作用稍弱。這一試驗(yàn)結(jié)果與前人的研究結(jié)果[18-20]一致。

表3 不同灌胃組小鼠血清羥自由基抑制能力的測(cè)定結(jié)果Table 3 Determination of serum ·OH in mice in different gavage groups

2.3.4 對(duì)小鼠血清中MDA含量，T-SOD、CAT和GSH-Px活力的影響 由表4可知，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組小鼠血清中T-SOD、CAT和GSH-Px活力顯著降低，MDA含量顯著升高(P<0.05)。與模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組(Vc)顯著提升模型小鼠血清中T-SOD、CAT和GSH-Px活力(P<0.05)，同時(shí)極顯著降低MDA含量(P<0.01)；CMPs高、中劑量組也顯著提高模型小鼠血清中T-SOD、CAT和GSH-Px活力(P<0.05)，CMPs高劑量組則極顯著降低了MDA含量(P<0.01)；CMPs中劑量組則顯著降低了MDA含量(P<0.05)。

表4 小鼠血清中的MDA含量及T-SOD、CAT和GSH-Px活力Table 4 MDA content and T-SOD,CAT and GSH-Px activities in serum of mice

2.3.5 對(duì)小鼠肝組織中MDA含量，T-SOD、CAT和GSH-Px活力的影響 由表5可知，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組小鼠肝組織中T-SOD和GSH-Px活力顯著降低(P<0.05)，CAT活力明顯下降但與正常對(duì)照組相比無顯著性差異，MDA含量顯著升高(P<0.05)。與模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組(VC)顯著或極顯著提高了模型小鼠肝組織中T-SOD、CAT和GSH-Px的活力，顯著降低了MDA的含量；CMPs高、中劑量組極顯著或顯著提高了模型小鼠肝組織中T-SOD、CAT和GSH-Px的活力(P<0.01或P<0.05)，且顯著降低MDA的含量(P<0.05)，尤其是CMPs高劑量組對(duì)3種酶活力升高和MDA含量的降低均達(dá)到極顯著。

表5 小鼠肝臟組織中的MDA含量及T-SOD、CAT和GSH-Px活力Table 5 MDA content and T-SOD,CAT and GSH-Px activities in liver tissues of mice

綜上所述，蛹蟲草多糖能夠明顯增強(qiáng)小鼠血清和肝臟組織中T-SOD、CAT和GSH-Px活力，并在一定程度上降低機(jī)體MDA含量，能有效緩解D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老模型小鼠的衰老癥狀，表明其具有較好的體內(nèi)抗氧化能力。

3 討 論

衰老作為機(jī)體生物學(xué)進(jìn)化過程中的一種自然現(xiàn)象，其內(nèi)在機(jī)制和應(yīng)對(duì)策略一直是學(xué)界研究的熱點(diǎn)，用以解釋衰老自由基學(xué)說備受關(guān)注[21]。Harman[22]認(rèn)為衰老過程中的退行性變化是由于細(xì)胞正常代謝過程中產(chǎn)生自由基的有害作用造成的。因此開展機(jī)體自由基清除方面的研究意義深遠(yuǎn)。現(xiàn)階段體內(nèi)自由基清除研究多采用D-半乳糖誘導(dǎo)的動(dòng)物衰老模型[17-20]。機(jī)體攝入過量D-半乳糖后會(huì)導(dǎo)致代謝紊亂，使機(jī)體各器官氧化酶活性改變，形成多種活性氧自由基，引起機(jī)體細(xì)胞損害，繼而導(dǎo)致機(jī)體多器官萎縮和功能衰退而呈現(xiàn)衰老態(tài)勢(shì)。由于該模型相關(guān)指標(biāo)非常接近自然衰老而備受學(xué)者青睞[23]?；诖?，本研究采用該方法構(gòu)建衰老模型小鼠，進(jìn)而探究CMPs對(duì)衰老小鼠的體內(nèi)抗氧化活性。

研究表明，SOD能抑制超氧陰離子，維持機(jī)體氧化與抗氧化之間的動(dòng)態(tài)平衡[24-25]。因而SOD活力強(qiáng)弱能夠反映機(jī)體清除超氧自由基的能力，其在機(jī)體內(nèi)的水平高低亦是衰老程度的直觀指標(biāo)。淺田浩二[26]研究表明，血清中SOD含量或活力最能反映機(jī)體的SOD水平。MDA是氧自由基損傷或細(xì)胞導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，過量的MDA會(huì)加速機(jī)體衰老或疾病的發(fā)生[24-26]，其在血清和組織中含量的高低是衡量機(jī)體自由基代謝的敏感指標(biāo)。CAT存在于機(jī)體過氧化物體內(nèi)，其含量高低可間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[27]。GSH-Px是體內(nèi)重要的抗氧化酶，主要負(fù)責(zé)清除體內(nèi)過氧化氫和有機(jī)氫過氧化物，并能夠特異地催化還原型谷胱甘肽對(duì)過氧化氫的還原反應(yīng)，起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用[28]。為此，本研究在構(gòu)建的衰老小鼠模型基礎(chǔ)上，通過灌胃給藥方式給予模型小鼠不同劑量CMPs，詳細(xì)檢測(cè)造模前后上述各種酶活力和MDA含量變化情況，同時(shí)與正常對(duì)照加以對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CMPs能夠明顯改善衰老模型小鼠血清和肝組織當(dāng)中的T-SOD、CAT和GSH-Px活力，且能顯著降低MDA含量，說明其具有良好的體內(nèi)抗氧化活性。這一研究結(jié)果與近期有關(guān)天然多糖體內(nèi)抗氧化研究的結(jié)論[29-31]是一致的。為了更充分說明蛹蟲草多糖的抗氧化活性，本研究在體內(nèi)試驗(yàn)的同時(shí)還考察了其體外抗氧化活性，結(jié)果表明蛹蟲草多糖同樣表現(xiàn)出良好的體外抗氧化活性，可見蛹蟲草多糖具有開發(fā)成天然抗氧化劑和綠色保健食品的潛能。

4 結(jié) 論

本研究通過水提醇沉法制備蛹蟲草粗多糖，再而采用DEAE-52纖維素柱色譜法純化得到CMPs組分。體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果表明，其對(duì)羥自由基、超氧陰離子、ABTS·和DPPH·均有良好的清除作用，EC50分別為1.912，2.153，1.612和2.058 mg/mL。體內(nèi)抗氧化活性測(cè)定結(jié)果表明，CMPs能顯著提高衰老模型小鼠血清和肝臟組織中的T-SOD、CAT和GSH-Px活力，且能顯著降低MDA含量，并且呈現(xiàn)良好的質(zhì)量濃度依賴關(guān)系，尤其是CMPs高劑量時(shí)可以使衰老小鼠相關(guān)指標(biāo)恢復(fù)到或接近正常水平。