張山佳，韓雪怡

(許昌學(xué)院，河南 許昌 461000)

沙蔥風(fēng)味獨(dú)特，具有較強(qiáng)的抗寒性和較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，對(duì)人體代謝、抗氧化以及血管舒張具有明顯的作用[1]。人體代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生各種氧化性自由基，沙蔥干粉水溶液中含有的總酚物質(zhì)能夠抑制這種氧化性自由基的生成，同時(shí)對(duì)已經(jīng)存在的氧化性自由基進(jìn)行消除，使氧化性自由基的活性逐漸降低[2]。沙蔥干粉水提取物中具有這種抗氧化功能的成分為總酚，其抗氧化能力與沙蔥干粉水提取物濃度為近似線(xiàn)性關(guān)系，濃度越高，總抗氧化能力越強(qiáng)[3]。沙蔥干粉水提取物中的總酚是生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，能夠?qū)θ梭w產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)，同時(shí)降低人體內(nèi)活性氧含量水平，并且具有消炎、抗過(guò)敏和防止血栓形成的作用。沙蔥干粉水提取物總酚物質(zhì)含量水平是評(píng)價(jià)沙蔥營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和綜合品質(zhì)的重要參數(shù)指標(biāo)[4]。沙蔥干粉水提取物中的總酚是一種包含多個(gè)酚羥基的化合物，可分為低分子量的單聚體酚類(lèi)和分子量較大的多聚體酚類(lèi)，酚羥基容易被氧化，能夠有效捕捉活性氧自由基，因此植物總酚能夠清除機(jī)體氧化自由基，沙蔥中的總酚物質(zhì)含量和特性與沙蔥的生長(zhǎng)狀態(tài)和外界條件有密切關(guān)系[5]。

本文以沙蔥為原材料，對(duì)其進(jìn)行水解后提取，測(cè)定沙蔥水提取物中的總酚含量，同時(shí)對(duì)總酚抗氧化活性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測(cè)定，為沙蔥的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 待檢測(cè)樣品制備

實(shí)驗(yàn)原材料采用阿拉善沙蔥，將其放置于真空冷凍機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥處理，粉碎后在60目過(guò)濾網(wǎng)中進(jìn)行篩選，使用四氯甲烷對(duì)過(guò)濾后的沙蔥干粉進(jìn)行24 h脫脂，過(guò)濾后置于通風(fēng)陰涼處晾干備用[6-7]。沙蔥干粉水溶液中含有大量的纖維素，利用超聲波提取會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞壁的破壞，影響實(shí)驗(yàn)測(cè)定的準(zhǔn)確性[8]。因此，本文在進(jìn)行沙蔥干粉水溶液中總酚物質(zhì)含量測(cè)定時(shí)，選用水解的方式制備待檢測(cè)樣品。

稱(chēng)取10 g脫脂處理后的沙蔥干粉，加入100 mL的蒸餾水，浸泡24 h后過(guò)濾，再加入100 mL的蒸餾水，浸泡24 h后過(guò)濾，將兩次濾液合并在一起，采用循環(huán)水蒸發(fā)儀對(duì)濾液進(jìn)行濃縮處理，濃縮至20 mL，于4 ℃條件下保存，作為待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液備用。

2 沙蔥干粉水溶液中總酚含量測(cè)定與抗氧化活性分析方法

采用Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定沙蔥干粉提取物溶液中的總酚物質(zhì)含量，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品，繪制標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)曲線(xiàn)[9-10]。測(cè)定過(guò)程中，量取0.1 mL沙蔥干粉提取物溶液，放置于2 mL離心管中，加入濃度為10%的Folin-Ciocalteu試劑0.2 mL，對(duì)其進(jìn)行渦旋處理，使沙蔥干粉提取物溶液與Folin-Ciocalteu試劑能夠充分混合均勻，混勻后加入0.8 mL濃度為0.7 mol/L的Na2CO3溶液，在25 ℃條件下放置2 h作為總酚待檢測(cè)樣品溶液[11]。將混合完成的總酚待檢測(cè)樣品溶液放置于96微孔板中，加入濃度分別為0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 mg/mL的沒(méi)食子酸0.2 mL，在765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值。待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液的總酚含量使用沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)進(jìn)行定量，沙蔥干粉提取物溶液的總酚含量為每1 g沙蔥干粉中的沒(méi)食子酸當(dāng)量。

利用二銨鹽原液與過(guò)硫酸鉀在室溫條件下反應(yīng)12 h來(lái)測(cè)定沙蔥干粉提取物溶液總酚的ABTS自由基清除能力[12]。將濃度為0.07 mol/mL的ABTS溶液0.2 mL和0.025 mol/mL的過(guò)硫酸鉀溶液0.2 mL進(jìn)行混合，在室溫條件下充分反應(yīng)12 h，使用乙醇對(duì)混合溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)掖继砑恿恳竽軌虼_保混合溶液在734 nm處的吸光度為0.7。將混合溶液放置于96微孔板中，在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值，作為對(duì)照組吸光度。將濃度為0.07 mol/mL的ABTS溶液放置于96微孔板中，加入待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液0.2 mL，沙蔥干粉提取物水溶液濃度分別為1.56，3.13，6.25，12.5，25，50 mg/mL，在室溫條件下放置2 min，在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值，作為待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液在ABTS溶液中的吸光度值。將95%的乙醇溶液放置于96微孔板中，加入待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液0.2 mL，沙蔥干粉提取物水溶液濃度分別為1.56，3.13，6.25，12.5，25，50 mg/mL，在室溫條件下放置2 min，在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值，作為待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液在乙醇中的吸光度值。根據(jù)下式計(jì)算沙蔥干粉水溶液中總酚的ABTS自由基清除能力：

式中：Ac為對(duì)照組的吸光度；Ai為待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液在ABTS溶液中的吸光度；Aj為待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液在乙醇中的吸光度。

沙蔥干粉提取物中總酚對(duì)鐵離子的還原能力測(cè)定過(guò)程中，向96微孔板中加入濃度分別為0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L的沙蔥干粉提取物水溶液0.4 mL，加入濃度為0.3 mol/L的醋酸鹽緩沖液0.2 mL，加入濃度為0.01 mol/L的TPTZ溶液0.02 mL，加入濃度為0.02 mol/L的氯化鐵溶液0.02 mL，在37 ℃條件下孵育30 min，孵育完成后，在595 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值[13-14]。

沙蔥總酚水提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除率可以用來(lái)表示自身的抗氧化活性[15]。實(shí)驗(yàn)測(cè)定過(guò)程中，使用鄰苯三酚自氧化法生成超氧陰離子，使用pH值為8.3的磷酸鹽溶液4.5 mL，加入相同體積的乙醇，乙醇質(zhì)量濃度分別為0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L，振蕩搖勻后在30 ℃條件下進(jìn)行水浴保溫，保溫時(shí)間20 min，保溫完成后加入1 mL濃度為0.02 mol/L的鄰苯三酚溶液，搖勻后在波長(zhǎng)325 nm處測(cè)定吸光度，每次間隔30 s，計(jì)算每分鐘范圍內(nèi)溶液的吸光度增加值，作為對(duì)照組。同理，使用pH值為8.3的磷酸鹽溶液4.5 mL，加入相同體積的沙蔥干粉水溶液中總酚濃度分別為0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L，振蕩搖勻后在30 ℃條件下進(jìn)行水浴保溫，保溫時(shí)間為20 min，保溫完成后加入濃度為0.02 mol/L的鄰苯三酚溶液1 mL，搖勻后在波長(zhǎng)325 nm處測(cè)定吸光度，每次間隔30 s，計(jì)算每分鐘范圍內(nèi)溶液的吸光度增加值，作為待檢測(cè)組。沙蔥總酚水提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除率計(jì)算公式為：

超氧陰離子自由基的清除率=(ΔA0-ΔAi)/ΔA0×100%。

式中：ΔA0為對(duì)照組溶液的吸光度增加值，ΔAi為待檢測(cè)組溶液的吸光度增加值。

3 實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果與數(shù)據(jù)分析

采用Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定總酚含量，使用沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)對(duì)總酚含量進(jìn)行定量，沙蔥干粉水溶液中總酚含量(沒(méi)食子酸定量數(shù)據(jù))見(jiàn)表1。

表1 沙蔥干粉水溶液中總酚含量(沒(méi)食子酸定量數(shù)據(jù))

由表1可知，當(dāng)沒(méi)食子酸濃度小于0.25 mg/mL時(shí)，溶液吸光度與沒(méi)食子酸濃度之間具有較好的線(xiàn)性關(guān)系，可擬合出標(biāo)準(zhǔn)近似曲線(xiàn)方程為y=4x+0.07，定量測(cè)定得出沙蔥干粉水溶液中總酚含量為10.2 mg/g。

ABTS溶液是一種穩(wěn)定的機(jī)體自由基，待檢測(cè)樣品的抗氧化能力越強(qiáng)，表明其反應(yīng)過(guò)程中提供反應(yīng)電子的能力越強(qiáng)，ABTS溶液與待檢測(cè)樣品溶液的反應(yīng)量也就越大，反應(yīng)過(guò)程中表現(xiàn)出較快的反應(yīng)速率，對(duì)待檢測(cè)樣品的吸光度變化過(guò)程進(jìn)行檢測(cè)，能夠直接反映出待檢測(cè)樣品的自由基清除率。沙蔥干粉水溶液中總酚自由基清除率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 沙蔥干粉水溶液中總酚自由基清除率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

續(xù) 表

由表2可知，當(dāng)待檢測(cè)樣品濃度小于12.5 mg/mL時(shí)，待檢測(cè)樣品的自由基清除率快速上升，自由基清除能力隨著待檢測(cè)樣品濃度的增大而增加，當(dāng)待檢測(cè)樣品濃度大于12.5 mg/mL時(shí)，待檢測(cè)樣品的自由基清除率趨于穩(wěn)定，當(dāng)濃度為50 mg/mL時(shí)，自由基清除率達(dá)到100%。

沙蔥總酚對(duì)鐵離子的還原能力主要用來(lái)反映其抗氧化能力，在酸性環(huán)境下，將高價(jià)鐵離子還原為低價(jià)鐵離子，在595 nm處檢測(cè)溶液的吸光度，吸光度越大，表明待檢測(cè)樣品鐵離子還原能力越強(qiáng)，用來(lái)反映待檢測(cè)沙蔥干粉提取物水溶液的抗氧化能力。沙蔥干粉水溶液中總酚對(duì)鐵離子還原后溶液吸光度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 沙蔥干粉水溶液中總酚對(duì)鐵離子溶液吸光度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

由表3可知，沙蔥干粉水溶液中總酚與鐵離子溶液在波長(zhǎng)595 nm處的吸光度與溶液濃度呈線(xiàn)性關(guān)系，隨著待檢測(cè)樣品溶液質(zhì)量濃度的逐漸增大，溶液的吸光度逐漸增大，表明沙蔥總酚水提取物具有較強(qiáng)的抗氧化能力。

沙蔥干粉水溶液中總酚對(duì)超氧陰離子自由基清除率實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 沙蔥干粉水溶液中總酚對(duì)超氧陰離子自由基清除率

由表4可知，沙蔥干粉水溶液中總酚具有較強(qiáng)的超氧陰離子自由基清除能力，隨著沙蔥干粉水溶液中總酚濃度的增加，對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力明顯提高。

4 結(jié)論

沙蔥水提取物中含有豐富的總酚，具有較好的抗氧化性和氧化自由基清除能力，對(duì)鐵離子的還原能力顯著。本文所研究的沙蔥干粉水溶液中總酚成分測(cè)定和抗氧化活性分析，為沙蔥資源的綜合利用與開(kāi)發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)。