胡智斌，裴潔，張清瑞，郭愛珍，項(xiàng)志杰，黃濤，張定軍，鄧亞夢(mèng)，謝軍，沈朝建

（1.湖北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖北武漢 430070；2.襄陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖北襄陽(yáng) 441021；3.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖北武漢 430070；4.保康縣動(dòng)物檢疫和疫病防控中心，湖北?？?441600；5.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

隱孢子蟲病，是由寄生在細(xì)胞內(nèi)的隱孢子蟲引起的人獸共患原蟲病。隱孢子蟲感染宿主廣泛，包括人類、哺乳動(dòng)物、鳥類、魚類、有袋動(dòng)物、爬行動(dòng)物和兩棲動(dòng)物，導(dǎo)致宿主無癥狀或輕度至重度胃腸道疫病[1-2]。隱孢子蟲在自然界廣泛存在，世界上的水源中都能檢測(cè)到隱孢子蟲[3]。隱孢子蟲主要通過糞-口途徑傳播，也可通過直接接觸以及食入受污染的水、食物傳播[4]。隱孢子蟲病1970 年在牛中被首次報(bào)道。該病被認(rèn)為是牛的地方性傳染病。隱孢子蟲是引起新生小牛腸炎的重要病原之一，也會(huì)引起牛急性或慢性胃腸道紊亂，產(chǎn)奶量減少，體重減輕，嚴(yán)重病例可死亡[5-6]。

2021 年12 月23 日至2022 年2 月，湖北省襄陽(yáng)市某養(yǎng)殖場(chǎng)的犢牛出現(xiàn)腹瀉并死亡，經(jīng)當(dāng)?shù)孬F醫(yī)治療，效果不明顯。為查明發(fā)病原因，提出針對(duì)性防控建議，2022 年2 月底至3 月中旬，湖北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心聯(lián)合襄陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心和?？悼h動(dòng)物檢疫和疫病防控中心組成聯(lián)合調(diào)查組，先后3 次到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 病例定義

1.1.1 可疑病例 2021 年12 月23 日至2022 年3月15 日，該養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)的動(dòng)物中，出現(xiàn)白痢、黃痢、糞便帶血等癥狀之一的，為可疑病例。

1.1.2 確診病例 經(jīng)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診為隱孢子蟲核酸陽(yáng)性的可疑病例為確診病例。

1.2 調(diào)查范圍

對(duì)發(fā)病養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行調(diào)查，同時(shí)對(duì)襄陽(yáng)市轄區(qū)內(nèi)的牛養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行犢牛腹瀉發(fā)病情況排查。

1.3 調(diào)查方法

1.3.1 現(xiàn)場(chǎng)查看 查看養(yǎng)殖場(chǎng)的養(yǎng)殖生產(chǎn)記錄、消毒記錄以及采取的生物安全措施，現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查欄舍構(gòu)造布局、動(dòng)物飼養(yǎng)情況和周邊環(huán)境。

1.3.2 訪談和問卷調(diào)查 通過與養(yǎng)殖場(chǎng)主、獸醫(yī)座談以及問卷調(diào)查[7]，了解養(yǎng)殖場(chǎng)地理位置、存欄數(shù)、生產(chǎn)管理模式、牛只調(diào)入/調(diào)出情況、發(fā)病經(jīng)過、人員流動(dòng)、流浪犬活動(dòng)及采取的措施等。

1.4 采樣及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

調(diào)查組采集養(yǎng)殖場(chǎng)動(dòng)物的肛拭子、糞便和環(huán)境樣品，采樣范圍涉及每棟養(yǎng)殖舍和生活區(qū)域。樣品送至華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室，采用熒光定量PCR方法，對(duì)牛病毒性腹瀉（BVDV）、牛輪狀病毒（BRV）、牛冠狀病毒（BCoV）以及隱孢子蟲進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)對(duì)產(chǎn)毒性大腸桿菌和致病性沙門氏菌進(jìn)行分離培養(yǎng)鑒定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

用Excel 軟件整理收集到的數(shù)據(jù)，對(duì)調(diào)查問卷數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，繪制疫病流行曲線，使用Google Earth 軟件繪制疫點(diǎn)地理位置圖。

2 調(diào)查結(jié)果

2.1 基本情況

2.1.1 飼養(yǎng)情況 養(yǎng)殖場(chǎng)位于大山深處（經(jīng)度111.190 123、緯度31.975 127），距離公路干道直線距離2 km（圖1），周邊5 km 范圍內(nèi)沒有其他養(yǎng)殖戶。2016 年養(yǎng)殖場(chǎng)建成后養(yǎng)牛，2021 年6—7 月引入羊和豬。調(diào)查時(shí)，養(yǎng)殖場(chǎng)存欄牛119 頭、豬10 頭、羊90 只。養(yǎng)殖場(chǎng)現(xiàn)有牛舍3 棟，羊舍和豬舍各1 棟（圖2），其中A 棟為母牛舍，存欄牛39 頭（母牛23 頭、犢牛16 頭），混養(yǎng)生豬5 頭；B 棟為保育牛舍，存欄牛50 頭；C 棟為育肥牛舍，存欄牛30 頭。養(yǎng)殖場(chǎng)牛羊的養(yǎng)殖方式為圈養(yǎng)和放養(yǎng)相結(jié)合，豬為圈養(yǎng)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場(chǎng)管理較為混亂，沒有規(guī)范的生產(chǎn)記錄和消毒記錄，場(chǎng)區(qū)衛(wèi)生狀況較差（圖3）。

圖1 發(fā)病牛場(chǎng)地理位置

圖2 養(yǎng)殖場(chǎng)布局示意圖

圖3 牛舍環(huán)境

2.1.2 飼養(yǎng)牲畜調(diào)入/調(diào)出情況 牛養(yǎng)殖采用自繁自養(yǎng)，2016、2018、2019 和2020 年分別從襄陽(yáng)市本地引入牛30、10、10 和5 頭，其中種公牛3 頭，引入牛只未進(jìn)行寄生蟲檢測(cè)；2020 年開始采用人工授精進(jìn)行牛繁殖，精液來源于本地供精。養(yǎng)殖場(chǎng)出生的健康母牛育成種用，公牛和病弱母牛育肥后在襄陽(yáng)市內(nèi)銷售。2021 年6 月，養(yǎng)殖場(chǎng)從湖北省羅田縣引入羊61 只，采用自繁自養(yǎng)，中間未出售，現(xiàn)存欄90 只；2021 年7 月，從本地購(gòu)入9 頭仔豬育肥，2022 年1 月中旬出欄5 頭至本地屠宰，2 月上旬又購(gòu)入6 只仔豬飼養(yǎng)。

2.1.3 牛免疫情況 養(yǎng)殖場(chǎng)牛于2021 年12 月2日免疫羊痘疫苗，間隔1 個(gè)月免疫口蹄疫滅活疫苗（O 型+A 型，懷孕牛和5 月齡以下小牛未免），2022 年3 月5 日補(bǔ)免口蹄疫滅活疫苗（O 型+A 型），未免疫腹瀉病毒疫苗。

2.1.4 飼料與飲水 養(yǎng)殖場(chǎng)牛飼料來源于當(dāng)?shù)氐霓r(nóng)作物秸稈、青貯飼料、酒糟和從河南省購(gòu)入的花生秧，水源為本地山泉水。

2.1.5 人員與車輛 養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)有專職養(yǎng)殖人員2名，均為本地人，每月回家1 次，其余時(shí)間均在場(chǎng)內(nèi)；場(chǎng)內(nèi)有運(yùn)輸車輛1 臺(tái)，用于拉飼草和拖運(yùn)糞便。

2.1.6 流浪動(dòng)物及野生動(dòng)物 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場(chǎng)未飼養(yǎng)犬和貓，但相距1.5 km 農(nóng)戶家的1 只2 歲犬會(huì)到場(chǎng)區(qū)及周邊游蕩。經(jīng)詢問場(chǎng)主，養(yǎng)殖場(chǎng)周邊有野豬、野兔、果子貍、刺猬、狐貍、狗獾、野雞和蛇等野生動(dòng)物出沒。

2.2 發(fā)病及治療情況

2.2.1 臨床癥狀及既往發(fā)病 犢牛主要表現(xiàn)腹式呼吸，體格消瘦，皮膚彈性稍差，肛周毛發(fā)帶有不成型干糞便，鼻部、口腔及蹄部未見潰瘍（圖4）；出現(xiàn)腹瀉癥狀，表現(xiàn)白痢、黃痢，部分出現(xiàn)血便。因場(chǎng)地和生物安全原因，調(diào)查組未對(duì)病死牛只進(jìn)行剖檢。另?yè)?jù)調(diào)查，2019 年冬至2020 年春、2020 年冬至2021 年春，該養(yǎng)殖場(chǎng)70%的犢牛曾出現(xiàn)腹瀉，部分腹瀉犢牛死亡，病因不明，其他生產(chǎn)階段的牛未發(fā)病。

圖4 發(fā)病犢牛臨床表現(xiàn)

2.2.2 治療用藥情況 腹瀉發(fā)生后，所在鎮(zhèn)畜牧中心防疫員對(duì)腹瀉犢牛注射頭孢噻肟鈉、氟苯尼考、恩諾沙星等藥物，同時(shí)口服復(fù)合維生素B、“得瀉?！薄最^翁和楊樹花，未對(duì)病牛進(jìn)行隔離保溫，上述治療均無效果。

2.2.3 時(shí)間分布 2021 年12 月23 日開始，養(yǎng)殖場(chǎng)犢牛出現(xiàn)腹瀉癥狀，但未引起養(yǎng)殖人員的足夠重視；2022 年1 月7 日，因腹瀉死亡犢牛1 頭；2022 年1 月中下旬和2 月中下旬，犢牛腹瀉發(fā)病分別形成2 個(gè)高峰，各有8 頭犢牛發(fā)病，其中2 月下旬死亡3 頭。截至3 月10 日，養(yǎng)殖場(chǎng)25 頭新生犢牛除非正常死亡3 頭外，其余22 頭均發(fā)生腹瀉，其中6 頭死亡（圖5）。

2.2.4 空間和群間分布 據(jù)排查，本次疫病只在該養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生，周邊地區(qū)畜群未發(fā)病。發(fā)病犢牛集中在A 棟牛舍（母牛舍），而B 棟和C 棟牛舍均未發(fā)病。羊舍為封閉圈舍，地面采用漏糞板，現(xiàn)場(chǎng)未發(fā)現(xiàn)羊舍有異常情況。養(yǎng)殖場(chǎng)依山北而建，3 棟牛舍靠近山邊，冬季陽(yáng)光照射時(shí)間比羊舍和豬舍少，溫度偏低。出現(xiàn)腹瀉癥狀和死亡的均為犢牛。

2.3 檢測(cè)結(jié)果

采集的樣品經(jīng)檢測(cè)，2 份犢牛肛拭子以及1 份犢牛糞便、2 份羊糞便和1 份犬糞便樣品為隱孢子蟲核酸陽(yáng)性，其他病原均未檢出。

3 病因假設(shè)與驗(yàn)證

根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和檢測(cè)結(jié)果，確定引起此次疫病的病原為隱孢子蟲，因生產(chǎn)管理水平低下導(dǎo)致犢牛體質(zhì)虛弱，抵抗力低，在寒冷天氣應(yīng)激下引起發(fā)病死亡。

圖5 病例數(shù)量時(shí)間分布

根據(jù)病因假設(shè)，3 月10 日起，調(diào)查組指導(dǎo)該養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)腹瀉發(fā)病犢牛注射阿奇霉素，投喂大蒜素和“瀉立?！保瑢?duì)重癥病牛進(jìn)行輸液治療，同時(shí)對(duì)發(fā)病犢牛進(jìn)行隔離保溫，提升生物安全水平，規(guī)范場(chǎng)區(qū)和牛舍的清潔、消毒措施，清理牛舍和場(chǎng)區(qū)糞污，用聚維酮碘和復(fù)合酚對(duì)場(chǎng)區(qū)和養(yǎng)殖舍進(jìn)行消毒；加強(qiáng)養(yǎng)殖場(chǎng)的生產(chǎn)管理，清理牛舍并將A 棟牛舍內(nèi)的豬趕至豬舍喂養(yǎng)；加大襄陽(yáng)市轄區(qū)內(nèi)其他牛養(yǎng)殖場(chǎng)的牛腹瀉情況排查。腹瀉病情約在治療措施實(shí)施4 d 后得到基本控制，6 d 后回訪，該養(yǎng)殖場(chǎng)經(jīng)采取干預(yù)措施，犢牛腹瀉病情得到完全控制，未新增死亡病例，由此初步驗(yàn)證了病因假設(shè)。

4 討論

4.1 病原來源

通過現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查推斷，引起此次腹瀉病情的隱孢子蟲由外購(gòu)牛羊引入的可能性最大，也不排除來自周邊野生動(dòng)物的可能性。

4.1.1 牛羊等易感動(dòng)物調(diào)入 養(yǎng)殖場(chǎng)2016—2020年多次從本地引入牛只飼養(yǎng)，引進(jìn)的牛只未進(jìn)行隱孢子蟲檢測(cè)；2019 年秋冬，該養(yǎng)殖場(chǎng)出現(xiàn)過犢牛腹瀉死亡情況，之后每年的秋冬均出現(xiàn)犢牛腹瀉病情，且臨床癥狀和流行特征高度一致。成年牛感染隱孢子蟲的臨床癥狀不明顯，但新生犢牛對(duì)隱孢子蟲高度敏感，發(fā)生腹瀉，嚴(yán)重時(shí)脫水死亡。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，2021 年6 月購(gòu)入的羊也感染了隱孢子蟲，因此也不能排除購(gòu)入羊引入病原的可能。綜合流行病學(xué)調(diào)查推測(cè)，引入牛羊?qū)㈦[孢子蟲帶入養(yǎng)殖場(chǎng)的可能性最大。

4.1.2 野生動(dòng)物活動(dòng) 隱孢子蟲可以感染人及多種動(dòng)物。研究[8]表明，犢牛的微小隱孢子蟲（C.parvum）感染率最高可達(dá)80%。而C.parvum能廣泛感染嚙齒類、?？?、駱駝科、馬科、犬科和非人類靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物[9]，放牧區(qū)的牛、羊和野生動(dòng)物能同時(shí)檢出C.parvum[10]。該養(yǎng)殖場(chǎng)附近有多種野生動(dòng)物出沒，牛只在大山中放養(yǎng)，與野生動(dòng)物排泄物接觸的概率較高，也不排除通過野生動(dòng)物造成隱孢子蟲感染的可能。

4.2 發(fā)病因素

4.2.1 天氣寒冷 養(yǎng)殖場(chǎng)牛只采用圈養(yǎng)和山區(qū)放養(yǎng)結(jié)合方式飼養(yǎng)。2021 年12 月初，當(dāng)?shù)爻霈F(xiàn)過一次大幅度降溫天氣，加之山區(qū)氣溫較平原地區(qū)偏低，牛只能在牛舍內(nèi)投喂飼草圈養(yǎng)，污染的圈舍為新生犢牛感染隱孢子蟲提供了理想條件。北愛爾蘭相關(guān)研究[11]報(bào)道，冬季圈養(yǎng)是污染場(chǎng)區(qū)犢牛感染隱孢子蟲的因素之一。

4.2.2 飼養(yǎng)管理 養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全措施不到位，生產(chǎn)管理混亂，牛舍內(nèi)糞便未及時(shí)清理，場(chǎng)區(qū)消毒措施不到位，且用同一輛車運(yùn)輸糞污和飼草，這為隱孢子蟲感染創(chuàng)造了條件。羊舍為封閉舍，保溫條件好且采用漏糞板，而牛舍為半開放舍，緊靠山北，冬季陽(yáng)光照射不足，保溫措施較差，犢牛機(jī)體免疫力低下，易感染隱孢子蟲，同時(shí)感染后早期的治療方式不正確，病情得不到有效控制，病程延長(zhǎng)，因欄舍保溫條件差、發(fā)病犢牛體質(zhì)虛弱，最后因腹瀉死亡。

4.3 局限性

該養(yǎng)殖場(chǎng)連續(xù)3 年在秋冬季出現(xiàn)犢牛腹瀉發(fā)病死亡情況，現(xiàn)有的調(diào)查數(shù)據(jù)無法準(zhǔn)確判定前兩年的腹瀉是由犢牛隱孢子蟲引起的，只能從流行特征上進(jìn)行推斷。因時(shí)間原因，此次流行病學(xué)調(diào)查未開展牛只來源地和養(yǎng)殖場(chǎng)周邊山區(qū)環(huán)境的溯源。此次調(diào)查時(shí)間距首次發(fā)病時(shí)間較長(zhǎng)，因養(yǎng)殖場(chǎng)生產(chǎn)記錄不全，相關(guān)信息只能從場(chǎng)主和獸醫(yī)的回憶采集。

4.4 建議

養(yǎng)殖場(chǎng)合理布局，做好冬季犢牛舍的保溫措施，避免出現(xiàn)應(yīng)激導(dǎo)致隱孢子蟲病發(fā)生；提升生物安全管理水平，受污染的養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)經(jīng)常清除產(chǎn)犢區(qū)和牛舍的糞便和受污染的墊料，建議結(jié)合使用合適的消毒劑（過氧化氫消毒劑）進(jìn)行消毒，同時(shí)用熱水清洗飼喂?fàn)倥５钠骶?，避免發(fā)生感染；出現(xiàn)犢牛腹瀉的養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)隱孢子蟲檢測(cè)，同時(shí)對(duì)發(fā)病犢牛進(jìn)行保溫、補(bǔ)液，投喂益生菌，以降低感染后的發(fā)病率和死亡率；養(yǎng)牛場(chǎng)注射BVDV、BRV、BCoV 疫苗和預(yù)防大腸桿菌乳房炎的疫苗，以降低多種腹瀉病原混合感染的概率，同時(shí)做好新生犢牛的初乳灌服。

5 結(jié)論

根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果以及干預(yù)措施效果綜合判斷：此次犢牛腹瀉死亡的病因是隱孢子蟲感染；病原由調(diào)入牛羊引入可能性最大，也不排除周邊野生動(dòng)物帶入的可能；飼養(yǎng)管理水平低下導(dǎo)致犢牛抵抗力低，寒冷天氣導(dǎo)致應(yīng)激，因而造成犢牛發(fā)?。话l(fā)病犢牛因治療方式不當(dāng)，病期延長(zhǎng)而死亡。提示，加強(qiáng)養(yǎng)殖場(chǎng)生產(chǎn)管理，提升生物安全水平，在隱孢子蟲病防控中具有重要意義。