范 婭，王鵬思，牛洺鑫，宋霜雨，張宇鑄，張繼偉，馮文英，張 博

(中化化工科學(xué)技術(shù)研究總院有限公司，北京 100083)

調(diào)環(huán)酸鈣(prohexadione calcium)和烯效唑(uniconazole)作為植物生長調(diào)節(jié)劑，可以抑制植物營養(yǎng)生長，促進(jìn)植物光合作用，顯著提高作物產(chǎn)量[1]。調(diào)環(huán)酸鈣的分析方法主要采用高效液相色譜法，鄭先福、李巖等分別報(bào)道了調(diào)環(huán)酸鈣原藥和5%調(diào)環(huán)酸鈣泡騰片劑法分析方法[2-3]。烯效唑的分析方法比較 常見的有液相色譜法和氣相色譜法，丁明偉等對(duì)2種方法進(jìn)行了對(duì)比[4]。調(diào)環(huán)酸鈣在水中的溶解度為174 mg/L (20 ℃)，微溶于其他有機(jī)溶劑，而烯效唑在水中的溶解度為8.41 mg/L (25 ℃)，甲醇中溶解度為88 g/kg (25 ℃)，溶于丙酮、乙酸乙酯等多種有機(jī)溶劑[5]。基于兩者的理化性質(zhì)差異，為了讓2者都充分溶解且有響應(yīng)，調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑的復(fù)配制劑多數(shù)采用逐項(xiàng)檢測(cè)各個(gè)有效成分含量的方法，其檢測(cè)效率較低。有關(guān)2種活性組分一次性分離檢測(cè)方法尚未見報(bào)道?；诖?，本文采用高效液相色譜法開展了同時(shí)分離檢測(cè)15%調(diào)環(huán)酸鈣·烯效唑懸浮劑中有效成分的方法研究，以期為調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑復(fù)配農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試劑

調(diào)環(huán)酸鈣標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.5%，山東中科睿譜技術(shù)有限公司)；烯效唑標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.3%，上海市農(nóng)藥研究所)；15%調(diào)環(huán)酸鈣·烯效唑懸浮劑(中化化工科學(xué)技術(shù)研究總院有限公司)；蒸餾水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)；甲醇，色譜純(賽默飛世爾科技有限公司)；磷酸，分析純(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；溶液A為甲醇-0.3%磷酸水溶液(60∶40，體積比)。

1.2 儀器

LC-20型高效液相色譜儀配有DAD檢測(cè)器(日本島津公司)；微孔濾膜(孔徑約0.45 μm)(天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；電子天平(ME204E/02、MS-105) (梅特勒托利多科技有限公司)；VGT-1730QT型小型超聲波清洗器(廣東固特超聲股份有限公司)。

1.3 色譜操作條件

色譜柱為Inert Sustain AQ-C18色譜柱(4.6 mm× 150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.3%磷酸溶液，采用梯度洗脫程序：甲醇-0.3%磷酸溶液(55∶45，體積比)保持8.0 min，8.1～18.0 min 甲醇-0.3%磷酸溶液(80∶20，體積比)，18.1～26 min甲醇-0.3%磷酸溶液(55∶45，體積比)。柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長：260 nm；進(jìn)樣體積：5.0 μL。在上述色譜條件下，調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑的保留時(shí)間分別約為5.1、15.9 min?；旌蠘?biāo)樣及樣品的典型高效液相色譜圖見圖1和圖2。

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

在同一100 mL容量瓶中，加入0.05 g調(diào)環(huán)酸鈣標(biāo)樣和0.10 g烯效唑標(biāo)樣(均精確至0.000 1 g)，用溶液A溶解，超聲，冷卻后定容，搖勻，過濾，備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

在100 mL容量瓶中稱取約1.0 g (精確至0.000 1 g)試樣，用溶液A稀釋至刻度，在超聲波中超聲振蕩5 min，取出，恢復(fù)至室溫，過濾，備用。

1.4.3 測(cè)定

在1.3節(jié)色譜條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)數(shù)針標(biāo)樣溶液并計(jì)算，直至相鄰2針調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)的峰面積相對(duì)變化小于1.5%后，方可進(jìn)樣，進(jìn)樣順序按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液進(jìn)行。

1.4.4 計(jì)算

將2針試樣溶液中調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)峰面積以及其前后2針標(biāo)樣溶液中調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)峰面積分別計(jì)算平均值。試樣中調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω1(%)按下式計(jì)算：

式中：A2為試樣溶液中調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)面積的平均值；m1為調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；ω為標(biāo)樣中調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)的含量，%；A1為標(biāo)樣溶液中調(diào)環(huán)酸鈣(或烯效唑)峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長的選擇

采用島津LC-20自帶的DAD檢測(cè)器，在190～ 400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，得到調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑的紫外吸收光譜圖(圖3)?？紤]溶劑和雜質(zhì)的干擾，檢測(cè)波長選定為260 nm。

2.2 樣品溶劑的選擇

調(diào)環(huán)酸鈣易溶于水，微溶于有機(jī)溶劑；而烯效唑則相反。依據(jù)兩者理化性質(zhì)，樣品在配制過程中溶劑使用甲醇和磷酸水的混合溶液。經(jīng)過多次調(diào)整甲醇和磷酸水溶液的配比，選定溶劑為甲醇∶0.3%磷酸水溶液=60∶40 (體積比)。

2.3 流動(dòng)相的選擇

采用Inert Sustain AQ-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)進(jìn)行分析。依據(jù)調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑的理化性質(zhì)，采用甲醇-0.3%磷酸水體系和乙腈-0.3%磷酸水體系作為流動(dòng)相。在等度洗脫條件下，篩選不同配比的流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)流動(dòng)相中有機(jī)相比例低時(shí)，采集時(shí)間過長；而有機(jī)相比例高時(shí)，樣品中目標(biāo)峰又無法與雜質(zhì)峰分離，因此采用梯度洗脫程序。而甲醇成本相對(duì)較低，故選擇甲醇-0.3%磷酸水體系作為流動(dòng)相。經(jīng)多次調(diào)整比例及采集時(shí)間，選擇1.3節(jié)所示梯度洗脫程序，流速為1.0 mL/min。此條件下，調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑均能較好分離，基線平穩(wěn)，峰形尖銳且對(duì)稱，保留時(shí)間適當(dāng)。

2.4 方法的線性相關(guān)性測(cè)定

在1.3節(jié)色譜條件下，按1.4.1節(jié)中方法配制多個(gè)不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液進(jìn)行測(cè)定，以調(diào)環(huán)酸鈣(烯效唑)濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖(圖4、圖5)，分別得到調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑線性回歸方程：調(diào)環(huán)酸鈣，y=8 741.7x+ 18 709，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 7；烯效唑，y=13 273x+ 433 292，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 1，說明兩者線性關(guān)系均較為良好。

2.5 方法的精密度測(cè)定

在1.3節(jié)色譜條件下，從同一個(gè)15%調(diào)環(huán)酸鈣·烯效唑懸浮劑試樣中稱取5個(gè)平行試樣，進(jìn)行分析測(cè)試，計(jì)算調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，試驗(yàn)結(jié)果見表1。可見，調(diào)環(huán)酸鈣的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.013%、變異系數(shù)為0.25%，烯效唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.011%、變異系數(shù)為0.11%，說明該方法的精密度高，重現(xiàn)性良好，可滿足該復(fù)配產(chǎn)品的分析要求。

表1 15%調(diào)環(huán)酸鈣·烯效唑懸浮劑的精密度試驗(yàn)

2.6 方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

將除原藥以外的所有助劑和填料等混和均勻，并嚴(yán)格按配方的比例要求，制作制劑空白。在制劑空白中加入與制劑標(biāo)稱值相同量的有效成分，制得5個(gè)新的制劑樣品[6]。在上述色譜條件下，測(cè)定試樣中調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑的質(zhì)量，回收率結(jié)果見表2。可見，調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑的平均回收率分別為100.33%和100.25%。

表2 15%調(diào)環(huán)酸鈣·烯效唑懸浮劑的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

3 結(jié) 論

采用反相高效液相色譜法建立了同時(shí)測(cè)定15%調(diào)環(huán)酸鈣·烯效唑懸浮劑中有效成分的定性定量方法。該方法可使調(diào)環(huán)酸鈣和烯效唑2種有效成分得到有效分離，且線性關(guān)系良好，表現(xiàn)出較高的精密度和準(zhǔn)確度，適于對(duì)調(diào)環(huán)酸鈣與烯效唑復(fù)配制劑產(chǎn)品質(zhì)量的定性定量分析。