焦子洋，梁培鑫，薛占霞，鄭立卿，董曉華，吳苗苗，武海霞，侯勇

河北北方學(xué)院藥學(xué)院，河北省神經(jīng)藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 張家口 075000

重癥肌無(wú)力（myasthenia gravis，MG）是一種慢性獲得性自身免疫性疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制尚未闡明，地塞米松是目前臨床常用的MG 治療藥物［1］。研究［2-3］發(fā)現(xiàn)，胸腺淋巴細(xì)胞的凋亡失控可能是MG的主要發(fā)病機(jī)制之一。細(xì)胞凋亡（apoptosis）又稱細(xì)胞程序化死亡（programmed cell death，PCD），是指機(jī)體為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由多基因嚴(yán)格控制的細(xì)胞主動(dòng)死亡過(guò)程［4］。Fas、B 細(xì)胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）和半胱氨酸天冬氨酸特異蛋白酶（cysteinyl aspartate specific protease，Caspases）基因是調(diào)控淋巴細(xì)胞凋亡的相關(guān)基因［5-6］。凋亡相關(guān)因子Fas 能促進(jìn)胸腺細(xì)胞的陰性選擇，影響自身反應(yīng)性胸腺細(xì)胞的凋亡［7］。Bcl-2 可抑制細(xì)胞凋亡，而B細(xì)胞淋巴瘤-2相關(guān)X 蛋白（B-cell lymphoma-2 associated X protein，Bax）可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，二者均參與胸腺細(xì)胞成熟過(guò)程中的正負(fù)選擇［8］。Bcl-2 基因表達(dá)的上調(diào)可導(dǎo)致胸腺組織T 細(xì)胞具備抗凋亡能力，最終誘發(fā)MG［9］。Bax/Bcl-2 變化與MG 的預(yù)后密切相關(guān)［10］。此外，研究［11］表明，Caspase 家族也參與MG或?qū)嶒?yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力（experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG）胸腺細(xì)胞凋亡障礙的發(fā)生。細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞抗原4（cytotoxic T lymphocyte antigen-4，CTLA4）是一種負(fù)性調(diào)控分子，可通過(guò)CD28/B7 介導(dǎo)的共刺激通路，防止細(xì)胞無(wú)序或過(guò)度活化，將免疫應(yīng)答控制在可控范圍［12］。細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞抗原4 免疫球蛋白（cytotoxic T lymphocyte antigen-4 immunolobulin，CTLA4-Ig）是由CTLA4 胞外區(qū)與IgG 的Fc 段融合構(gòu)建而成的，可有效抑制初始T 細(xì)胞的活化，誘導(dǎo)T 細(xì)胞進(jìn)入無(wú)能狀態(tài)，表現(xiàn)為對(duì)特定抗原的不應(yīng)答［13］。本研究組前期研究［14］結(jié)果表明，CTLA4-Ig 可通過(guò)抑制CD28/B7 信號(hào)通路，減緩MG 的發(fā)生發(fā)展；CTLA4-Ig 可抑制EAMG大鼠淋巴細(xì)胞的增殖。CTLA4-Ig是否通過(guò)影響胸腺組織相關(guān)凋亡基因的表達(dá)，發(fā)揮MG 治療作用，目前尚未有相關(guān)報(bào)道。因此，我們觀察了CTLA4-Ig 腹腔注射對(duì)大鼠EAMG 的治療作用，并探討其可能作用機(jī)制，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑及儀器 45 只雌性Lewis 大鼠（7～8 周齡，體質(zhì)量140～160 g）購(gòu)自南京大學(xué)模型動(dòng)物研究中心，在無(wú)特定病原體（no specific pathogen，SPF）環(huán)境中飼養(yǎng)，室溫（24±2）℃，12 h 光/暗循環(huán)，40%～70%相對(duì)濕度，自由獲得食物和水。本研究期間動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格遵守動(dòng)物倫理要求。乙酰膽堿受體（AchR）α97-116肽序列、完全弗氏佐劑（CFA）、不完全弗氏佐劑（IFA）、AChRab 及AChR ELISA 試劑盒購(gòu)于美國(guó)Sigma 公司；磷酸鹽緩沖液（PBS）購(gòu)于湖北武漢華東生物科技有限公司；地塞米松購(gòu)于中國(guó)天津醫(yī)藥集團(tuán)有限公司；CTLA4-Ig 購(gòu)于美國(guó)BD公司；TRIzol 購(gòu)于美國(guó)Invitrogen 公司；TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver. 3.0 購(gòu)于中國(guó)大連寶生物工程有限公司。Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 活性檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京凱基生物發(fā)展有限公司產(chǎn)品。PCR擴(kuò)增儀（德國(guó)），低溫超速離心機(jī)（北京安亭儀器設(shè)備廠，中國(guó)）。

1.2 EAMG 模型構(gòu)建 取35 只大鼠，用AchR α 97-116 肽免疫法構(gòu)建EAMG 大鼠模型。50 μg 的AChR α97-116 肽和CFA 混合制備200 μL 乳液，然后將其皮下注射至大鼠的頸部、背部和足墊區(qū)域（注射當(dāng)天為第1 天）。第30、60 天分別在初次免疫注射部位等劑量進(jìn)行強(qiáng)化免疫。另外10 只大鼠為正常對(duì)照（對(duì)照組），于同期予等量生理鹽水。在第74 天評(píng)估EAMG 模型是否成功。依據(jù)大鼠臨床表現(xiàn)判斷EAMG 造模是否成功。與對(duì)照組比較，EAMG 模型大鼠造模2 周后出現(xiàn)爬行無(wú)力、背頸部皮毛松弛等MG 癥狀，4 周后癥狀明顯加重，包括呼吸困難，頭部震顫，背部出現(xiàn)腫塊，毛發(fā)倒豎，行走困難，奄奄一息。最終30 只大鼠造模成功。

1.3 大鼠分組及CTLA4-Ig 給予方法 將30 只EAMG 模型大鼠隨機(jī)分為CTLA4-Ig 組、EAMG 組及地塞米松組，每組各10 只。第74 天時(shí)CTLA4-Ig 組大鼠用2 mg/kg 的CTLA4-Ig 腹腔注射，地塞米松組用1 mg/kg的地塞米松腹腔注射，EAMG組及對(duì)照組大鼠腹腔注射同體積PBS，1 天1 次（間隔24 h），持續(xù)至第130 天。CTLA4-Ig 給予期間，EAMG 組大鼠死亡1只，對(duì)照組麻醉死亡1只。因此每組選取9只大鼠進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 各組大鼠體質(zhì)量及肌力觀察 分別于第74、102、130 天記錄各組大鼠體質(zhì)量，觀察并記錄大鼠肌力。Lennon 評(píng)分0 級(jí)：沒(méi)有顯著的MG 癥狀，計(jì)0分；1 級(jí)：活動(dòng)減少、輕微抓撓或哭聲減少，計(jì)1 分；2級(jí)：前肢屈曲、低頭、駝背、動(dòng)作不協(xié)調(diào)，計(jì)2分；3級(jí)：嚴(yán)重的MG 表現(xiàn)，無(wú)哭無(wú)爬，震顫，處于垂死狀態(tài)，計(jì)3分。如果大鼠的癥狀在上述4級(jí)之間，評(píng)分為0.5、1.5和2.5分。

1.5 標(biāo)本留取及指標(biāo)檢測(cè) 分別于第74、102、130天采集各組大鼠尾靜脈血，第130 天同時(shí)采集大鼠后肢肌肉組織和胸腺組織。

1.5.1 各組大鼠血清AChR IgG、AChR IgG 2b 及后肢肌肉組織AChR 含量檢測(cè) ①采用ELISA 法檢測(cè)血清AChR IgG、AChR IgG 2b。所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，采用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm 處的光密度（OD）值，重復(fù)測(cè)定3 次取平均值。②取各組大鼠后肢肌肉組織，0.01 mol/L PBS 勻漿后離心20 min。棄上清，將沉淀物重新懸浮含有2% Triton X-100 的緩沖液中。根據(jù)說(shuō)明書，使用大鼠AChR ELISA 試劑盒檢測(cè)上清液AChR 含量，重復(fù)測(cè)定3 次取平均值。

1.5.2 各組大鼠胸腺組織凋亡相關(guān)基因mRNA 檢測(cè) 采用RT-PCR 法檢測(cè)各組大鼠胸腺組織Fas、FasL、Bcl-2、Bax、Caspases-3、Caspases-8和Caspases-9基因mRNA 表達(dá)。取各組大鼠胸腺組織，提取總RNA，紫外分光光度測(cè)定RNA濃度，參考文獻(xiàn)［15］測(cè)定凋亡相關(guān)基因mRNA，以TATA 盒式蛋白編碼基因（Tbp）為內(nèi)參。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書加入各反應(yīng)試劑進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄及cDNA 擴(kuò)增。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)程序：30 ℃、10 min，50 ℃、30 min，99 ℃、5 min，5 ℃、5 min；PCR擴(kuò)增：94 ℃預(yù)變性2 min；94 ℃變性40 s；51 ℃～57.5 ℃，復(fù)性40 s；72 ℃延伸40 s，循環(huán)35～40次，72 ℃延伸加時(shí)10 min。瓊脂糖凝膠電泳，F(xiàn)luorochem 5500成像系統(tǒng)采集圖像，以各凋亡相關(guān)基因mRNA吸光度和Tbp吸光度比值表示其mRNA相對(duì)表達(dá)量。凋亡相關(guān)基因和Tbp的引物序列見表1。

表1 凋亡相關(guān)基因和Tbp引物序列

1.5.3 各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8和Caspases-9 活性檢測(cè) 采用紫外分光法檢測(cè)各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8 和Caspases-9活性。所有操作均嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。測(cè)定405 nm時(shí)的最大吸收峰值即為Caspases-3、Caspases-8 和Caspases-9 活性值，重復(fù)測(cè)定3 次，取平均值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。采用Shapiro-Wilk 檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用方差分析，如組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義則采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 第74、102、130天各組大鼠體質(zhì)量及Lennon評(píng)分比較 第74、102、130 天各組大鼠體質(zhì)量及Lennon評(píng)分比較見表1、2。

表1 第74、102、130天各組大鼠體質(zhì)量及Lennon評(píng)分比較（g，±s）

表1 第74、102、130天各組大鼠體質(zhì)量及Lennon評(píng)分比較（g，±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與EAMG組比較，#P＜0.05。

體質(zhì)量組別CTLA4-Ig 組EAMG組地塞米松組對(duì)照組第74天151.66±4.72 150.43±3.32 149.76±4.31 147.21±4.52第102天222.15±11.68#176.44±10.87*221.34±9.01#212.43±13.71第130天230.28±11.46#184.32±12.43*232.06±10.52#222.73±12.09

表2 第74、102、130天各組大鼠Lennon評(píng)分比較（分，±s）

表2 第74、102、130天各組大鼠Lennon評(píng)分比較（分，±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與EAMG組比較，#P＜0.05。

組別CTLA4-Ig 組EAMG組地塞米松組對(duì)照組Lennon評(píng)分第130天1.56±0.38#2.76±0.39*1.45±0.26#0第74天1.32±0.23*1.08±0.12*1.26±0.17*0第102天1.43±0.21#2.14±0.34*1.37±0.15#0

2.2 各組大鼠血清AChR IgG、AChR IgG 2b 及后肢肌肉組織AChR含量比較 第74、102、130天各組大鼠血清AChR IgG、AChR IgG 2b 水平比較見表3、4。第130天CTLA4-Ig 組、EAMG組、地塞米松組及對(duì)照組大鼠后肢肌肉組織中AChR 含量分別為（4.84 ±0.37）、（2.54 ± 0.24）、（5.69 ± 0.48）、（7.43 ±0.87）μg/L，與對(duì)照組比較，EAMG 組大鼠后肢肌肉組織中AChR 含量降低（P＜0.05）；與EAMG 組比較，地塞米松組和CTLA4-Ig組大鼠后肢肌肉組織AChR含量增加（P＜0.05）。

表3 第74、102、130天各組大鼠血清AChR IgG水平比較（μg/L，±s）

表3 第74、102、130天各組大鼠血清AChR IgG水平比較（μg/L，±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與EAMG組比較，#P＜0.05。

組別AChR IgG CTLA4-Ig 組EAMG組地塞米松組對(duì)照組第130天0.17±0.04#0.64±0.08*0.15±0.04#0.17±0.02第74天0.27±0.04*0.26±0.02*0.25±0.03*0.12±0.03第102天0.12±0.01#0.42±0.05*0.11±0.02#0.17±0.04

2.3 各組大鼠胸腺組織Fas、FasL、Bcl-2、Bax、Caspases-3、Caspases-8 和Caspases-9 mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較 各組大鼠胸腺組織Fas、FasL、Bcl-2、Bax、Caspases-3、Caspases-8 和Caspases-9 的mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較見表5、6。CTLA4-Ig 組、EAMG 組、地塞米松組及對(duì)照組Bax/Bcl-2 分別為（1.88±0.08）、（0.60±0.02）、（1.65±0.09）、（0.99±0.08），與對(duì)照組比較，EAMG 組大鼠Bax/Bcl-2 降低（P＜0.05）；與EAMG 組比較，地塞米松組和CTLA4-Ig 組大鼠Bax/Bcl-2 增加（P＜0.05）。

表4 第74、102、130天各組大鼠血清AchR IgG 2b水平比較（μg/L，±s）

表4 第74、102、130天各組大鼠血清AchR IgG 2b水平比較（μg/L，±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與EAMG組比較，#P＜0.05。

組別CTLA4-Ig 組EAMG組地塞米松組對(duì)照組AchR IgG 2b第130天0.14±0.02#0.58±0.07*0.11±0.03#0.09±0.02第74天0.19±0.02*0.18±0.01*0.20±0.03*0.06±0.01第102天0.12±0.04#0.35±0.02*0.13±0.02#0.11±0.03

表5 各組大鼠胸腺組織Fas、FasL、Bcl-2、Bax的mRNA相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

表5 各組大鼠胸腺組織Fas、FasL、Bcl-2、Bax的mRNA相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與EAMG組比較，#P＜0.05。

組別CTLA4-Ig 組EAMG 組地塞米松組對(duì)照組Bax mRNA 0.79±0.01#0.44±0.02 0.73±0.03#0.43±0.01 Fas mRNA 0.59±0.04*0.57±0.03*0.61±0.02*0.35±0.01 FasL mRNA 0.82±0.06#0.56±0.03 0.83±0.05#0.54±0.01 Bcl-2 mRNA 0.42±0.04#0.73±0.02*0.44±0.03#0.44±0.01

表6 各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8和Caspases-9的mRNA相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

表6 各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8和Caspases-9的mRNA相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與EAMG組比較，#P＜0.05。

組別CTLA4-Ig 組EAMG 組地塞米松組對(duì)照組Caspases-9 mRNA 0.88±0.07#0.52±0.02*0.86±0.05#0.84±0.06 Caspases-3 mRNA 0.68±0.03#0.43±0.01*0.72±0.03#0.71±0.02 Caspases-8 mRNA 0.88±0.07#0.51±0.01*0.87±0.06#0.83±0.05

2.4 第130 天時(shí)各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8 和Caspases-9 活性比較 第130 天各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8 和Caspases-9活性比較見表7。

表7 第130天各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8和Caspases-9活性比較（±s）

表7 第130天各組大鼠胸腺組織Caspases-3、Caspases-8和Caspases-9活性比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與EAMG組比較，#P＜0.05。

組別CTLA4-Ig 組EAMG 組地塞米松組對(duì)照組Caspases-9 10.58±0.44#9.72±0.64*10.36±0.49#13.78±0.92 Caspases-3 5.39±0.48#2.38±0.15*5.73±0.37#4.63±0.62 Caspases-8 9.22±0.46#4.83±0.42*9.57±0.63#9.37±0.54

3 討論

CD28/B7 介導(dǎo)的共刺激是淋巴細(xì)胞活化的重要輔助信號(hào)，并在MG 初次免疫反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用［16］。CTLA4是B7分子的另一種天然受體，其介導(dǎo)的共刺激信號(hào)可防止細(xì)胞無(wú)序或過(guò)渡活化，將免疫應(yīng)答控制在可控的范圍內(nèi)［12］。研究［13］證明，CTLA4 以比CD28 更大的親和力結(jié)合B7-1 和B7-2，從而使其能比CD28 競(jìng)爭(zhēng)其配體，最終將抑制信號(hào)傳遞給T 細(xì)胞。CTLA4 作為負(fù)性調(diào)控分子，其在自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展中的作用受到廣泛關(guān)注［17］。將CTLA4 作為免疫靶點(diǎn)來(lái)治療自身免疫性疾病的新途徑已漸成趨勢(shì)［14］。 CTLA4-Ig 是由CTLA4 其胞外區(qū)與IgG 的Fc 段融合構(gòu)建而成。本研究結(jié)果表明，CTLA4-Ig 腹腔注射可明顯改善EAMG 大鼠臨床癥狀，并顯著降低AChR IgG 和AChR IgG 2b 血清水平同時(shí)恢復(fù)后肢肌肉中AChR 含量。CTLA4-Ig發(fā)揮MG 治療作用的機(jī)制可能與細(xì)胞凋亡機(jī)制密切相關(guān)。

研究［18］證實(shí)，F(xiàn)as 及FasL 基因突變可導(dǎo)致T 細(xì)胞凋亡障礙，使某些自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞無(wú)法被清除，從而導(dǎo)致Fas 及FasL 基因缺陷的大鼠易感EAMG。合并胸腺瘤的MG 患者胸腺組織Fas 表達(dá)升高［19］；但另有研究［20］報(bào)道，MG 患者胸腺淋巴樣濾泡組織中Fas 抗原表達(dá)降低。MG 患者胸腺組織Fas表達(dá)異常已達(dá)成共識(shí)，但其表達(dá)水平至今仍有爭(zhēng)議，尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。該研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，EAMG 組大鼠胸腺Fas mRNA 表達(dá)上調(diào)，但FasL mRNA表達(dá)無(wú)顯著變化；Caspases-3和Caspases-8的mRNA 表達(dá)均下調(diào)且活性下降；與EAMG 組比較，CTLA4-Ig 組和地塞米松組FasL mRNA 表達(dá)上調(diào)；Caspases-3 和Caspases-8 的mRNA 表達(dá)均上調(diào)且活性增加。Caspases-8 是由Fas/FasL 家族介導(dǎo)，參與外源性細(xì)胞凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)［21］。研究［22］報(bào)道，F(xiàn)as與FasL 結(jié)合，F(xiàn)as 通過(guò)胞內(nèi)區(qū)的死亡結(jié)構(gòu)域（death domain，DD）招募有死亡結(jié)構(gòu)域的Fas 相關(guān)蛋白（Fas-associated protein with death domain，F(xiàn)ADD），F(xiàn)ADD 氨基端的死亡效應(yīng)域（death effector domain，DED）與Caspase-8氨基端原域（prodomain）中的DED相互作用，把Caspase-8 酶原募集到Fas 區(qū)域，形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體（death-inducing signal complex，DISC）。從而導(dǎo)致Caspases-8 自身水解活化，活化的Caspases-8 進(jìn)一步激活其下游Caspases-3［23］。本研究結(jié)果顯示，EAMG大鼠胸腺Fas mRNA表達(dá)上調(diào)，F(xiàn)asL mRNA 表達(dá)無(wú)顯著變化，Caspases-8 mRNA表達(dá)下調(diào)，活性下降。推測(cè)Fas mRNA 表達(dá)以可溶型Fas（soluble Fas，sFas）表達(dá)上調(diào)為主。sFas 是由細(xì)胞膜表面Fas 分子從膜表面脫落而形成，sFas 與Fas 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合FasL，干擾Fas/FasL 途徑，導(dǎo)致“凋亡缺損”，其下游基因Caspases-8 因無(wú)激活信號(hào)而表達(dá)下調(diào)，活性下降［24］。CTLA4-Ig 干預(yù)后重新激活Fas/FasL 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路，進(jìn)而Caspases-8 和Caspases-3的mRNA表達(dá)上調(diào)，活性增加。

生理?xiàng)l件下，胸腺組織T 淋巴細(xì)胞的陽(yáng)性選擇過(guò)程中Bcl-2 表達(dá)下降，促進(jìn)CD4+CD8+雙陽(yáng)性細(xì)胞凋亡，而CD4+及CD8+單陽(yáng)性T 淋巴細(xì)胞中的Bcl-2表達(dá)水平上升，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的進(jìn)一步發(fā)育成熟，從而建立穩(wěn)定的人體正常免疫系統(tǒng)［25］。Caspases-9是由Bcl-2家族介導(dǎo)的線粒體凋亡通路的啟始因子。當(dāng)細(xì)胞受到一些體內(nèi)外信號(hào)刺激時(shí)，Bcl-2 家族相關(guān)蛋白活化，使線粒體膜通透性增加，細(xì)胞色素C（cytochrome c，Cytc）釋放增加，其與Caspases-9 及凋亡活化因子-1（apoptosis activating factor -1，Apaf-1）結(jié)合，形成凋亡體，凋亡體再水解并釋放Cytc，后者使Apaf-1進(jìn)一步聚集，形成七聚復(fù)合物，具有較強(qiáng)的Caspase-9 激活活性，最終促進(jìn)Caspase-9 自我剪切并活化?；罨腃aspase-9 啟動(dòng)Caspase 級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活Caspase-3，從而啟動(dòng)細(xì)胞調(diào)亡，Caspase-3 是執(zhí)行細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因子［26-27］。研究［28］證明，Bax 與Bcl-2 的比例決定了線粒體膜的完整性及細(xì)胞凋亡的易感性。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，EAMG 組大鼠胸腺Bcl-2 mRNA 表達(dá)上調(diào)，Bax mRNA 表達(dá)無(wú)明顯變化，Bax/Bcl-2 顯著降低；Caspases-3 和Caspases-9 的mRNA 表達(dá)均下調(diào)且活性下降；與EAMG 組比較，CTLA4-Ig 組和地塞米松組Bax mRNA 表達(dá)上調(diào)，Bcl-2 mRNA 表達(dá)下調(diào)，Bax/Bcl-2 升 高，Caspases-3 和Caspases-9 的mRNA表達(dá)均上調(diào)且活性增加。ALAKOU 等研究［6］表明，在接受胸腺切除術(shù)的MG 患者Bax/Bcl-2 增加，進(jìn)而上調(diào)Caspase-3表達(dá)，最終調(diào)節(jié)與疾病進(jìn)展相關(guān)的細(xì)胞凋亡，且Bax/Bcl-2 的大小可以預(yù)測(cè)MG 患者病情改善的情況，可視為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素［6］。

綜上所述，CTLA4-Ig 腹腔注射可改善EAMG 大鼠的臨床癥狀。CTLA4-Ig 可能通過(guò)上調(diào)胸腺組織FasL mRNA、Bax mRNA 、Bcl-2mRNA、Caspases-3 mRNA、Caspases-8 mRNA 和Caspases-9 mRNA 表達(dá)，發(fā)揮MG治療作用。