李欣， 李小明， 黎小年， 林杰， 吉祥靈

(1.海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心兒科綜合內(nèi)科，海南省海口市570206；2.?？谑协偵絽^(qū)婦幼保健院兒科，海南省?？谑?71100)

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是兒科常見(jiàn)急性發(fā)熱出疹性傳染病，主要由腸道病毒感染引起，傳染性較強(qiáng)，以柯薩奇病毒A16型(Coxsackievirus A16，CA16)、A6型(CA6)和腸道病毒71型(Enterovirus 71，EV-71)最為常見(jiàn)，呼吸道、消化道以及密切接觸是主要的傳播方式。大部分HFMD患兒的病情呈自限性，1周內(nèi)會(huì)自行恢復(fù)，而少部分患兒病情發(fā)展迅速，進(jìn)入HFMD重癥階段，對(duì)患兒心腦血管構(gòu)成潛在風(fēng)險(xiǎn)，威脅患兒生命[1]。細(xì)胞免疫是預(yù)防病毒侵襲的重要屏障，HFMD的發(fā)生及進(jìn)展與機(jī)體細(xì)胞免疫功能抑制存在密切聯(lián)系[2]。因此，本研究就HFMD患兒的T淋巴細(xì)胞亞群和腸道病毒分型進(jìn)行分析，探討其與HFMD病情程度的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2017年3月—2020年7月本中心收治的HFMD患兒92例(HFMD組)，其中男53例，女39例，年齡(4.13±1.21)歲；均符合《手足口病診療指南》[3]診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型。對(duì)照組選取同期本院體檢的健康兒童40例，男24例，女16例，年齡(4.21±1.25)歲。兩組以上資料比較差異無(wú)顯著性(P<0.05)。HFMD組按照病情程度分為輕癥組59例，重癥組33例。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象家屬知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒的臨床體征符合手足口病診斷標(biāo)準(zhǔn)；患兒監(jiān)護(hù)人均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：入院前1周使用免疫抑制藥；合并嚴(yán)重臟器疾??；伴有免疫性疾病等。

1.2 腸道病毒分型檢測(cè)[4]

HFMD組于入院第2天清晨抽取2 mL靜脈血，離心后置于-20 ℃保存，具體檢驗(yàn)方法依據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[5]執(zhí)行。采用ABI 7500熒光定量 PCR儀(美國(guó)ABi 公司)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定CA16、CA6、EV-71及其他EV RNA，RNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海晅科生物科技有限公司，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

1.3 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)[6]

HFMD組于入院第2天清晨，對(duì)照組兒童于體檢當(dāng)日清晨抽取2 mL靜脈血，采用NovoCyte流式細(xì)胞儀[安捷倫生物(杭州)有限公司]檢測(cè)血清T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平，并計(jì)算CD4+/CD8+，T淋巴細(xì)胞亞群試劑盒購(gòu)自上海烜雅生物科技有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果2.1 輕癥組和重癥組一般資料的比較

輕癥組和重癥組受累器官分布差異有顯著性(P<0.05；表1)，其他指標(biāo)比較差異無(wú)顯著性(P>0.05；表1)。

表1 輕癥組與重癥組一般資料的比較

2.2 各組腸道病毒分型的比較

HFMD組患兒腸道病毒感染以單一感染為主，其中CA16和CA6構(gòu)成比較高。重癥組與輕癥組病毒分型情況比較差異無(wú)顯著性(P>0.05；表2)。

表2 不同病情程度HFMD患兒腸道病毒分型的比較 單位：例(%)

2.3 各組T淋巴細(xì)胞亞群水平的比較

CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平HFMD組低于對(duì)照組，重癥組低于輕癥組(P<0.05;圖2和表3)。

圖1 各組T淋巴細(xì)胞亞群的流式細(xì)胞圖

表3 各組T淋巴細(xì)胞亞群水平的比較

3 討 論

HFMD的臨床特征為發(fā)熱和手、足、口、臀等多部位皮疹，主要是由CA16和CA6引起，少部分由EV71和其他腸道病毒感染引起，中國(guó)腸道病毒感染病原體以CA16和C6型最為常見(jiàn)[7]。本研究分析發(fā)現(xiàn)，92例HFMD患兒以CA16感染為主，其次為CA6感染，少部分患者以EV71、CA16與CA6混合感染或其他EV感染所致，此結(jié)果與既往研究報(bào)道相吻合[8]。本研究同時(shí)對(duì)不同病情程度下的患兒腸道病毒分型統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，患兒的病情程度與病毒分型之間并無(wú)明顯聯(lián)系。

基于HFMD進(jìn)展為重癥后有較高致殘率和致死率，重癥HFMD病情進(jìn)展的早期診斷指標(biāo)成為近些年的關(guān)注點(diǎn)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，HFMD在3歲以下嬰幼兒中發(fā)病率較高，且極易發(fā)展為重癥，與患兒細(xì)胞免疫功能低下有關(guān)[9]。另有研究證明，機(jī)體在感染病毒后，淋巴細(xì)胞分泌的干擾素-γ、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8等多種炎癥因子表達(dá)水平顯著增高，且各炎癥因子水平增加程度與病情相關(guān)[10]。這說(shuō)明細(xì)胞免疫在HFMD的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，而T淋巴細(xì)胞的作用尤為重要。T淋巴細(xì)胞能夠反映機(jī)體免疫狀態(tài)，在免疫過(guò)程中分化為CD3+、CD4+等不同亞群，各亞群具有不同的作用。當(dāng)機(jī)體感染病毒時(shí)，免疫系統(tǒng)被激發(fā)，短時(shí)間內(nèi)清除病原，有助緩解病情[11]。故有學(xué)者認(rèn)為T淋巴細(xì)胞可作為HFMD的預(yù)測(cè)指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，HFMD患兒的CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+明顯低于健康兒童，說(shuō)明HFMD存在免疫異常，重癥HFMD患兒CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+低于輕癥患兒，提示患兒病情越重，T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)值越低，說(shuō)明在遭受病毒侵襲后，免疫系統(tǒng)激活的T淋巴細(xì)胞減少，亞群比例失衡，免疫功能發(fā)生紊亂而無(wú)法發(fā)揮作用，從而導(dǎo)致致病原進(jìn)一步擴(kuò)散，使病情加重，該結(jié)果與同類研究結(jié)論相一致[12]，表明外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化可為臨床診斷及病情程度的判斷提供科學(xué)依據(jù)。本研究較先前研究的優(yōu)勢(shì)在于，首次同時(shí)分析了HFMD患兒的EV型與T細(xì)胞亞類情況，從分子流行病學(xué)、免疫學(xué)和診斷學(xué)等多方面為HFMD的疾病認(rèn)知增添了解。

綜上所述，HFMD患兒存在T細(xì)胞免疫功能削弱，尤其是重癥HFMD患兒，盡早進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)可幫助早期診斷并區(qū)分輕重癥，從而及時(shí)采取干預(yù)措施以防病情向重癥轉(zhuǎn)化，在HFMD的診斷和治療過(guò)程中具有重要參考價(jià)值。