陳 波，關(guān)亞娜，郭 偉，顧 輝，朱睿明，呂 琳，扈正桃，岑小波，2

（1.成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司，四川 成都 610041；2.四川大學(xué)華西醫(yī)院國(guó)家成都新藥安全性評(píng)價(jià)中心，四川 成都 610041）

信使 RNA（messenger RNA，mRNA）疫苗是將mRNA在體外進(jìn)行相關(guān)修飾后傳遞至機(jī)體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并產(chǎn)生蛋白抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)的一類(lèi)新型核酸疫苗。mRNA疫苗的研發(fā)可追溯至1990年，Wolff等［1］將體外轉(zhuǎn)錄的 β-半乳糖苷酶mRNA注射到小鼠骨骼肌，成功檢測(cè)到其表達(dá)的β-半乳糖苷酶蛋白。此后研究表明，體外轉(zhuǎn)錄的mRNA可在體內(nèi)編碼相應(yīng)蛋白并產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)［2-4］，提示mRNA具有潛在的治療和（或）預(yù)防疾病的效應(yīng)。但由于mRNA自身序列結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性差，免疫應(yīng)答及自發(fā)跨膜效率低，限制了mRNA疫苗的研發(fā)。近20年，隨著核酸修飾及遞送載體技術(shù)的快速發(fā)展，mRNA疫苗的臨床轉(zhuǎn)化及應(yīng)用發(fā)展迅速。2021年2月《麻省理工科技評(píng)論》發(fā)布的2021年“十大突破性技術(shù)”中，mRNA疫苗位居榜首。迄今，全球有2款mRNA疫苗獲美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）和歐洲藥品管理局（European Medicines Agency，EMA）批準(zhǔn)，分別為德國(guó)生物新技術(shù)公司（BioNTech）與美國(guó)輝瑞公司合作研發(fā)的BNT162b2和美國(guó)莫德納（Moderna）公司研發(fā)的mRNA-1273，兩者在全球新型冠狀病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）疫情中表現(xiàn)出從研發(fā)到臨床應(yīng)用的快速轉(zhuǎn)化能力、良好的人群保護(hù)力和安全性。本文從mRNA疫苗基本生物學(xué)特征出發(fā)，結(jié)合全球現(xiàn)有的相關(guān)指導(dǎo)原則、非臨床及臨床研究、相關(guān)研究評(píng)價(jià)資料，重點(diǎn)討論預(yù)防用mRNA疫苗在非臨床安全性研究中的一般原則和關(guān)注點(diǎn)，為預(yù)防用mRNA疫苗研發(fā)和臨床不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)預(yù)警提供參考。

1 mRNA疫苗基本生物學(xué)特征

1.1 基本生物學(xué)信息

mRNA是一類(lèi)攜帶編碼蛋白質(zhì)合成信息的單鏈核糖核酸。一個(gè)經(jīng)典的mRNA應(yīng)包括5個(gè)必要區(qū)域：從5′端至3′端依次是5′端帽（5′Cap）結(jié)構(gòu)、5′非編碼區(qū)（untranslated region，UTR）、開(kāi)放閱讀框（open reading frame，ORF）、3′UTR和多聚腺嘌呤核糖核苷酸〔Poly（A）〕序列。5′Cap保證mRNA以正確的方向指導(dǎo)蛋白質(zhì)翻譯，Poly（A）主要增加mRNA的穩(wěn)定性，5′UTR和3′UTR增強(qiáng)mRNA的翻譯效率，ORF是編碼蛋白質(zhì)的密碼子。mRNA疫苗則是基于mRNA編碼蛋白合成的特性，據(jù)特定蛋白抗原的密碼子序列設(shè)計(jì)ORF，在體外合成mRNA后通過(guò)適當(dāng)修飾和加工，遞送入機(jī)體細(xì)胞并表達(dá)相應(yīng)蛋白抗原，經(jīng)抗原呈遞細(xì)胞呈遞后引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)［5］。在此過(guò)程中，mRNA及其載體可引發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)，mRNA翻譯后生成的蛋白抗原可引發(fā)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，體液免疫反應(yīng)可生成針對(duì)病原體的中和抗體。mRNA疫苗在體內(nèi)免疫過(guò)程見(jiàn)圖1［6］。mRNA疫苗注射后，注射部位的免疫反應(yīng)導(dǎo)致大量免疫細(xì)胞招募，包括白細(xì)胞、髓樣樹(shù)突細(xì)胞、漿樣樹(shù)突細(xì)胞和單核細(xì)胞等。大多數(shù)類(lèi)型的免疫細(xì)胞均可攝取mRNA疫苗并表達(dá)抗原，同時(shí)分泌白細(xì)胞介素1（interleukin-1，IL-1）。免疫細(xì)胞遷移至引流淋巴結(jié)并呈遞抗原后，抗原與B細(xì)胞的相互作用導(dǎo)致生發(fā)中心形成，產(chǎn)生漿細(xì)胞和記憶型細(xì)胞隨淋巴系統(tǒng)遷移并駐留于骨髓中。

mRNA疫苗主要由編碼抗原的mRNA序列和遞送載體構(gòu)成。根據(jù)mRNA進(jìn)入體內(nèi)后能否進(jìn)行自我復(fù)制，將mRNA疫苗分為非復(fù)制型mRNA疫苗和自我擴(kuò)增型mRNA（self-amplifying mRNA，SAM）疫苗。前者mRNA的構(gòu)成與傳統(tǒng)mRNA類(lèi)似，其ORF僅包括編碼抗原的基因；后者mRNA的ORF除包含編碼抗原的核苷酸序列外，還包括來(lái)源于病毒的復(fù)制元件，翻譯后使mRNA進(jìn)行擴(kuò)增，從而持續(xù)表達(dá)抗原（≥2個(gè)月）［7］。

mRNA遞送載體對(duì)于mRNA疫苗的穩(wěn)定性和免疫應(yīng)答至關(guān)重要。目前常用于mRNA疫苗的遞送載體包括魚(yú)精蛋白、脂質(zhì)體及聚合物等。EMA和美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市的疫苗BNT162b2和mRNA-1273均采用脂質(zhì)納米粒（lipid nanoparticles，LNP）作為mRNA疫苗遞送載體。LNP通常由可電離脂類(lèi)、天然磷脂、膽固醇和聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）構(gòu)成［8］。

1.2 特點(diǎn)

與滅活疫苗和減毒活疫苗等傳統(tǒng)類(lèi)型疫苗相比，mRNA疫苗具有一些特殊的優(yōu)勢(shì)：①mRNA疫苗包括mRNA和遞送載體兩部分，其中遞送載體通用性較強(qiáng)；mRNA的免疫學(xué)效應(yīng)依賴(lài)于病原體蛋白和核苷酸序列，可通過(guò)核酸修飾提高病原體蛋白的翻譯效率，從而增強(qiáng)疫苗活性。理論上，經(jīng)過(guò)適當(dāng)修飾或改造的mRNA可編碼任何一種蛋白。②不同類(lèi)型mRNA疫苗的生產(chǎn)及純化工藝相似，無(wú)需類(lèi)似于傳統(tǒng)生物類(lèi)產(chǎn)品較長(zhǎng)的生產(chǎn)或發(fā)酵周期，生產(chǎn)過(guò)程簡(jiǎn)單高效，可快速應(yīng)對(duì)全球爆發(fā)的傳染性疾病。③與DNA疫苗相比，mRNA疫苗在胞質(zhì)中即可翻譯抗原，因此基因整合風(fēng)險(xiǎn)很低。④外源性mRNA本身具有免疫原性，通過(guò)激活模式識(shí)別受體引發(fā)固有免疫反應(yīng)，表現(xiàn)出“自我佐劑（self-adjuvant）”的特點(diǎn)。⑤ 遞送載體LNP除穩(wěn)定和保護(hù)mRNA外，也具有一定的免疫原性，可增強(qiáng)疫苗的免疫反應(yīng)。⑥在近年COVID-19疫情中，隨著新型冠狀病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）變異株德?tīng)査―elta）和奧密克戎（Omicron）的出現(xiàn)，與其他類(lèi)型疫苗相比，mRNA疫苗仍表現(xiàn)出有效性和安全性［9-10］。

但目前mRNA疫苗的儲(chǔ)運(yùn)條件較為苛刻，穩(wěn)定性較差。如已上市的2個(gè)mRNA疫苗的儲(chǔ)運(yùn)條件分別為-70℃（BNT162b2）和 -20℃（mRNA-1273），且因mRNA穩(wěn)定性較差，易被核酸酶降解，對(duì)接種環(huán)境的要求亦相對(duì)較高。此外，目前的臨床數(shù)據(jù)顯示，接種mRNA疫苗后仍存在一定的不良反應(yīng)［11］。上述因素使mRNA疫苗的應(yīng)用面臨較多的挑戰(zhàn)。

2 mRNA疫苗非臨床安全評(píng)價(jià)相關(guān)指南

mRNA疫苗作為疫苗的一種，應(yīng)遵循包括但不限于世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）針對(duì)疫苗及其佐劑的指導(dǎo)原則［12-13］和ICH S5（R3）中涉及疫苗的生殖毒性試驗(yàn)的指導(dǎo)原則［14］。mRNA作為基因治療的手段之一，還需參考基因和細(xì)胞治療相關(guān)的指導(dǎo)原則［15］。另外，由于mRNA疫苗具有特殊性，WHO于2021年頒布了專(zhuān)門(mén)針對(duì)mRNA疫苗研發(fā)的指南Evaluation of the Quality，Safety and Efficacy of Messenger RNA Vaccines for the Prevention of Infectious Diseases：Regulatory Considerations［16］。該指南著重對(duì)mRNA疫苗在生產(chǎn)、非臨床和臨床評(píng)價(jià)過(guò)程中的關(guān)鍵點(diǎn)提供指導(dǎo)。值得注意的是，該指導(dǎo)原則雖在COVID-19疫情的大背景下出臺(tái)，但并非僅適用于SARS-CoV-2疫苗，也并非適用于所有mRNA疫苗。鑒于LNP為目前最主要的mRNA遞送載體，該指導(dǎo)原則適用于由LNP遞送的mRNA或SAM預(yù)防用mRNA疫苗，其他類(lèi)型遞送載體的mRNA或SAM預(yù)防用mRNA疫苗則根據(jù)產(chǎn)品的實(shí)際情況靈活應(yīng)用。該指導(dǎo)原則不適用于由病毒蛋白包裝或質(zhì)粒DNA編碼的疫苗以及治療用mRNA疫苗。

我國(guó)藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心（Center for Drug Evaluation，CDE）于2005年制定了《預(yù)防用生物制品臨床前安全性評(píng)價(jià)技術(shù)審評(píng)一般原則》，主要適用于傳統(tǒng)疫苗如滅活疫苗、減毒活疫苗、純化疫苗、重組DNA技術(shù)制備的抗原疫苗、結(jié)合疫苗、合成肽疫苗以及使用新佐劑疫苗的非臨床安全性評(píng)價(jià)研究。為應(yīng)對(duì)COVID-19疫情，我國(guó)CDE于2020年制定了一系列指導(dǎo)原則，如《新型冠狀病毒預(yù)防用mRNA疫苗藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》《新型冠狀病毒預(yù)防用疫苗研發(fā)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》《新型冠狀病毒預(yù)防用疫苗非臨床有效性研究與評(píng)價(jià)技術(shù)要點(diǎn)》等，但目前尚無(wú)針對(duì)mRNA疫苗的非臨床安全性研究指導(dǎo)性文件。

3 預(yù)防用mRNA疫苗非臨床研究

mRNA疫苗的非臨床研究評(píng)價(jià)既要符合傳統(tǒng)疫苗研究的一般原則，也因其結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制的特點(diǎn)、按照“具體問(wèn)題具體分析”的原則進(jìn)行科學(xué)設(shè)計(jì)。參考WHO發(fā)布的相關(guān)研究指南［16］，本文就預(yù)防用mRNA疫苗的非臨床安全性研究的一般原則及關(guān)注點(diǎn)進(jìn)行討論。

3.1 一般原則

3.1.1 試驗(yàn)類(lèi)型

預(yù)防用mRNA疫苗非臨床安全性評(píng)價(jià)一般應(yīng)至少進(jìn)行重復(fù)給藥毒性、免疫毒性、局部耐受、安全藥理和生殖毒性試驗(yàn)等［17-18］，其中免疫毒性、局部耐受和安全藥理試驗(yàn)可伴隨于重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中開(kāi)展?？紤]到mRNA疫苗缺少基因整合性，通常無(wú)需進(jìn)行遺傳毒性和致癌性試驗(yàn)。若疫苗組分中包含有新型的遞送載體、佐劑和（或）賦型劑時(shí)，應(yīng)考慮對(duì)新的組分單獨(dú)進(jìn)行全面的非臨床安全性評(píng)價(jià)，否則應(yīng)提供充分的理由。

在重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中，常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)通常包括動(dòng)物體重、攝食量、注射部位刺激性反應(yīng)、臨床病理學(xué)指標(biāo)（血液學(xué)、血生化、血凝和尿常規(guī)等）、安全藥理學(xué)指標(biāo)（體溫、心電圖、呼吸頻率和神經(jīng)行為）、臟器重量及組織病理學(xué)檢查等指標(biāo)。此外，還需特別關(guān)注免疫原性及免疫毒性指標(biāo)，檢測(cè)內(nèi)容一般包括與體液免疫（抗病原蛋白抗體及中和抗體）和細(xì)胞免疫反應(yīng)等相關(guān)的免疫細(xì)胞（如Th1，Th2，CD4+T和CD8+T細(xì)胞等）數(shù)量或比例的改變、細(xì)胞因子（白細(xì)胞介素、干擾素和集落刺激因子等）水平、急性期蛋白（C-反應(yīng)蛋白和血清淀粉樣蛋白等）和淋巴免疫組織（給藥部位淋巴結(jié)和脾）病理學(xué)檢查等指標(biāo)。若疫苗組分中有通過(guò)直接作用于免疫系統(tǒng)而發(fā)揮作用的成分，或者靶抗原與內(nèi)源性分子存在相似性，尚需關(guān)注由于免疫刺激過(guò)強(qiáng)導(dǎo)致超敏反應(yīng)或自身免疫反應(yīng)的可能性。此外，由于發(fā)熱是臨床上疫苗接種后常見(jiàn)的反應(yīng)之一，考慮到非臨床研究中試驗(yàn)操作的可實(shí)施性，可在大動(dòng)物（如猴和犬等）重復(fù)給藥中增加溫度監(jiān)測(cè)。

對(duì)于脂質(zhì)遞送系統(tǒng)的安全性研究包括組織分布和一般毒性研究。由于單一脂質(zhì)成分的生物分布與遞送系統(tǒng)中脂質(zhì)成分在體內(nèi)可能存在組織分布的差異，可在單次及重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中設(shè)置不含mRNA的脂質(zhì)遞送系統(tǒng)對(duì)照組，以檢測(cè)脂質(zhì)遞送系統(tǒng)的毒性反應(yīng)［18］。

為預(yù)測(cè)mRNA疫苗潛在的臨床風(fēng)險(xiǎn)，非臨床研究的試驗(yàn)樣品需使用能夠代表臨床擬用的疫苗制劑。如非臨床研究使用的樣品與臨床試驗(yàn)用樣品存在差異，需進(jìn)行相關(guān)橋接試驗(yàn)以評(píng)估這種差異對(duì)疫苗安全性和有效性帶來(lái)的潛在影響。

3.1.2 動(dòng)物種屬選擇

mRNA疫苗的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)一般需在2個(gè)相關(guān)動(dòng)物種屬（嚙齒類(lèi)和非嚙齒類(lèi)）中進(jìn)行，生殖毒性試驗(yàn)可僅在1個(gè)相關(guān)動(dòng)物種屬中進(jìn)行。在進(jìn)行動(dòng)物種屬選擇時(shí)，應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫系統(tǒng)或免疫應(yīng)答與人體的相似性及所引起免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱等。免疫系統(tǒng)或免疫應(yīng)答與人越相近或免疫反應(yīng)越強(qiáng)，則試驗(yàn)結(jié)果所獲得的毒性信息的評(píng)估權(quán)重越高。若非人靈長(zhǎng)類(lèi)是唯一可產(chǎn)生免疫反應(yīng)的動(dòng)物種屬，且無(wú)適宜的替代分子或人源化的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，則mRNA疫苗非臨床安全性評(píng)價(jià)應(yīng)考慮采用非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。

3.1.3 劑量設(shè)計(jì)

mRNA疫苗毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)通常選擇臨床試驗(yàn)擬用的最高劑量（按人份計(jì)），建議增設(shè)動(dòng)物免疫原性和（或）保護(hù)力試驗(yàn)中的最佳劑量，以考察治療劑量下疫苗的毒性風(fēng)險(xiǎn)。此外，高于臨床擬用劑量的設(shè)計(jì)可支持臨床研究中可能增加的劑量。若受實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥體積的限制，試驗(yàn)劑量難以達(dá)到臨床擬用劑量時(shí)，可采取相同途徑多點(diǎn)注射的方式；若仍不能達(dá)到臨床擬用劑量，至少采用臨床折算劑量（基于公斤體重）進(jìn)行試驗(yàn)。免疫次數(shù)和頻率可依據(jù)免疫原性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行設(shè)計(jì)，通常情況下免疫次數(shù)需比臨床擬定次數(shù)至少多1次。然而，為增強(qiáng)保護(hù)力或應(yīng)對(duì)病毒突變，在臨床試驗(yàn)或應(yīng)用中不排除使用比初期臨床試驗(yàn)中更多的免疫次數(shù)。因此，非臨床研究應(yīng)充分考慮臨床應(yīng)用中的可能性［19］。

除常規(guī)的劑量設(shè)計(jì)外，中和抗體滴度也可作為不同種屬動(dòng)物和臨床人體的“毒代暴露量”。為充分暴露疫苗的潛在風(fēng)險(xiǎn)，安全性試驗(yàn)中動(dòng)物產(chǎn)生抗體的滴度應(yīng)至少涵蓋臨床免疫的有效抗體滴度。

3.1.4 免疫應(yīng)答

mRNA疫苗注射進(jìn)入機(jī)體后，遞送載體、單鏈mRNA、mRNA自發(fā)形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)、體外轉(zhuǎn)錄mRNA過(guò)程中形成的雙鏈mRNA和mRNA翻譯后形成的抗原均可能激發(fā)機(jī)體的固有免疫，而固有免疫對(duì)由靶抗原呈遞引起的適應(yīng)性免疫起著關(guān)鍵作用。固有免疫反應(yīng)過(guò)強(qiáng)，一方面會(huì)降低靶抗原的翻譯效率，起不到疫苗的預(yù)防作用；另一方面，可能會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生較高水平的細(xì)胞因子，甚至導(dǎo)致“細(xì)胞因子風(fēng)暴”。固有免疫過(guò)弱，則無(wú)法誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生適應(yīng)性免疫。因此，平衡固有免疫反應(yīng)對(duì)mRNA疫苗的安全性與臨床應(yīng)用至關(guān)重要。

在非臨床安全性研究中，可從以下方面考察mRNA疫苗的免疫反應(yīng)：①T細(xì)胞依賴(lài)性抗體反應(yīng)（T cell dependent antibody response，TDAR）是B細(xì)胞針對(duì)T細(xì)胞依賴(lài)性抗原產(chǎn)生的抗體應(yīng)答，需要Th2細(xì)胞的輔助方可產(chǎn)生特異性抗體。TDAR試驗(yàn)可通過(guò)引入外來(lái)抗原檢測(cè)機(jī)體產(chǎn)生的IgM和IgG水平，從而反映受試疫苗潛在的免疫毒性。②外周血單個(gè)核細(xì)胞及全血細(xì)胞體外細(xì)胞因子檢測(cè)可用于篩選有潛在藥理或毒理作用的細(xì)胞因子，有助于明確候選疫苗的臨床非預(yù)期效應(yīng)，一般在研發(fā)早期進(jìn)行。③關(guān)注補(bǔ)體的檢測(cè)。寡核苷酸鏈中帶電荷的骨架可能會(huì)激活非人靈長(zhǎng)類(lèi)的補(bǔ)體旁路途徑［20-22］，因此在猴重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中需關(guān)注補(bǔ)體的檢測(cè)。

此外，若mRNA所編碼的抗原在抗原呈遞細(xì)胞中未表達(dá)，而在其他細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，則可能發(fā)生免疫無(wú)能（immune anergy），進(jìn)而導(dǎo)致免疫耐受。但目前尚無(wú)較好的針對(duì)免疫耐受評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法，組織分布試驗(yàn)可能有助于判定靶抗原在呈遞細(xì)胞中的表達(dá)譜，對(duì)是否產(chǎn)生免疫耐受有提示作用。

3.1.5 組織分布

研究表明，人體所有細(xì)胞均表達(dá)低密度脂蛋白受體［23-24］，這些受體可介導(dǎo)LNP包裹的mRNA疫苗的內(nèi)吞作用，因此大多數(shù)細(xì)胞均可能是mRNA疫苗的受體細(xì)胞。編碼抗原的mRNA在受體細(xì)胞中表達(dá)及mRNA疫苗自身在相應(yīng)的組織或器官中的異常聚集和代謝，可能會(huì)引發(fā)機(jī)體潛在的安全性風(fēng)險(xiǎn)。mRNA納米粒遞送載體材料的組成、表面電荷、粒徑的大小以及疫苗注射方式等均可能影響mRNA疫苗的生物分布。例如，脂質(zhì)體中的PEG可延長(zhǎng)體內(nèi)遞送載體的半衰期，減少載體和血漿蛋白的非特異性作用并提供空間位阻增強(qiáng)載體的穩(wěn)定性，但高濃度PEG也可能會(huì)抑制LNP與質(zhì)膜的相互作用，從而阻礙細(xì)胞對(duì)LNP的吸收［25］。帶正電荷的LNP優(yōu)先靶向小鼠肺，帶負(fù)電荷的LNP主要靶向脾，不帶電荷的LNP優(yōu)先靶向肝［26-27］。注射到機(jī)體組織中粒徑＜200 nm的mRNA疫苗顆粒更易被輸運(yùn)到淋巴系統(tǒng)，而更大的顆粒則保留在注射部位［28］。因此，mRNA疫苗的組織分布評(píng)價(jià)，對(duì)潛在靶器官及毒性作用的發(fā)現(xiàn)具有重要意義。

目前常用于mRNA疫苗組織分布研究的方法包括免疫熒光法、放射性同位素標(biāo)記法、近紅外成像技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real time-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）。免疫熒光法通常是將LNP作為遞送系統(tǒng)包裹螢火蟲(chóng)熒光素酶mRNA的疫苗注射至動(dòng)物體內(nèi)，然后通過(guò)活體成像觀察熒光素酶的分布而判斷mRNA疫苗的組織分布。由于熒光素酶的表達(dá)無(wú)法完全模擬編碼抗原mRNA的表達(dá)譜，因此免疫熒光法主要評(píng)價(jià)遞送載體對(duì)mRNA疫苗組織分布的影響，具有一定的局限性。放射性同位素標(biāo)記法和近紅外成像技術(shù)分別是用放射性同位素和近紅外探針標(biāo)記編碼抗原的mRNA，將mRNA疫苗注射至體內(nèi)后，利用正電子發(fā)射斷層掃描/計(jì)算機(jī)斷層掃描（PET/CT）和近紅外成像技術(shù)追蹤其組織分布情況，兩者可避免免疫熒光法的缺陷，同時(shí)評(píng)價(jià)遞送載體和抗原mRNA的組織分布，可較全面地檢測(cè)mRNA疫苗的分布器官或組織。RT-qPCR是在擬定時(shí)間點(diǎn)解剖動(dòng)物后檢測(cè)組織臟器中靶抗原mRNA的水平。RT-qPCR定量準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)單，是開(kāi)展組織分布研究常用的方法之一。但該方法以解剖為終點(diǎn)，難以在同一只動(dòng)物中對(duì)疫苗分布情況進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

3.1.6 生殖毒性

疫苗對(duì)機(jī)體生殖發(fā)育的不良反應(yīng)主要是由疫苗與母體免疫系統(tǒng)的直接作用或繼發(fā)作用造成的，如增強(qiáng)的Th1型免疫反應(yīng)可導(dǎo)致妊娠失敗或流產(chǎn)［29］。此外，如果母體產(chǎn)生的抗體與胚胎或胎仔組織臟器產(chǎn)生交叉反應(yīng)，特別是抗原分子對(duì)處于發(fā)育關(guān)鍵期的器官產(chǎn)生較大影響時(shí)，可能使胎仔發(fā)育的器官產(chǎn)生畸形。隨著疫苗應(yīng)用范圍及人群的擴(kuò)大，有些疫苗可應(yīng)用于孕婦，因此開(kāi)展疫苗生殖與發(fā)育毒性評(píng)價(jià)非常必要。但由于疫苗給藥劑量較小，尤其是mRNA疫苗在理論上不會(huì)進(jìn)入細(xì)胞核，其生殖毒性的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)傳統(tǒng)疫苗較低。

單一周期的疫苗注射周期多在妊娠后10～14 d，如傳統(tǒng)的嚙齒類(lèi)及兔胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn)。但需注意的是，在該周期內(nèi)疫苗一般尚不能充分誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生充分的疫苗抗體暴露，而且在特定的胚胎發(fā)育周期內(nèi)，不同種屬動(dòng)物的胎盤(pán)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制不同，會(huì)導(dǎo)致疫苗中和抗體轉(zhuǎn)運(yùn)效率不同［30］。因此，mRNA疫苗生殖和發(fā)育毒性研究采用全周期的設(shè)計(jì)方式可能是較好的選擇。

全周期的生殖毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)通常需要雌、雄鼠從交配前開(kāi)始給藥，雌鼠需持續(xù)給藥至妊娠及哺乳結(jié)束，檢測(cè)指標(biāo)至少包括親代雌、雄鼠母體毒性指標(biāo)（體重和攝食量）、生殖毒性指標(biāo)（生殖系統(tǒng)重量及組織學(xué)檢查、精子活力及形態(tài)學(xué)檢查）、胚胎-胎仔發(fā)育毒性（活胎、吸收胎和死胎計(jì)數(shù)，胎仔外觀，骨骼和內(nèi)臟檢查）及F1代大鼠生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)（存活率、體重、生理發(fā)育指標(biāo)、條件反射指標(biāo)和學(xué)習(xí)記憶行為等）。

3.2 其他考慮因素

3.2.1 遞送載體

目前mRNA疫苗最常用的遞送載體為基于平臺(tái)技術(shù)的LNP，其組成較為復(fù)雜［21］。如前所述，LNP可影響mRNA疫苗的吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程，進(jìn)而影響其藥理和毒理效應(yīng)。此外，LNP本身也具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。因此，當(dāng)LNP的脂質(zhì)成分、構(gòu)成比例發(fā)生改變或存在新的結(jié)構(gòu)修飾時(shí)，需考慮對(duì)載體進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，通常包括一般毒性和遺傳毒性研究。

3.2.2 多聯(lián)多價(jià)疫苗

mRNA疫苗作為一種新型疫苗，隨著病毒抗原的變異，疫苗的臨床應(yīng)用方案可能處于不斷完善和調(diào)整中，在實(shí)際臨床應(yīng)用中也可能遇到各種疑問(wèn)或挑戰(zhàn)，而這些疑問(wèn)難以在早期的非臨床研究中得到考察或解釋。例如，①對(duì)于多次接種的疫苗，不同技術(shù)路線的疫苗或不同平臺(tái)相同靶抗原的mRNA疫苗是否可混合使用？②針對(duì)不同靶抗原的mRNA疫苗是否可同時(shí)接種？③針對(duì)同一病原體的不同亞型的mRNA疫苗是否可同時(shí)接種？④同一遞送載體是否可包裹不同靶抗原mRNA？就以上問(wèn)題，目前國(guó)際上尚無(wú)明確的指導(dǎo)原則或法規(guī)建議。因此，進(jìn)行全面的非臨床研究時(shí)，除參考我國(guó)《聯(lián)合疫苗臨床前和臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》外，應(yīng)結(jié)合疫苗作用機(jī)制、疫苗非臨床或（和）臨床數(shù)據(jù)，綜合評(píng)估多聯(lián)多價(jià)疫苗應(yīng)用時(shí)的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

4 預(yù)防用mRNA疫苗非臨床安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

4.1 基于非臨床試驗(yàn)結(jié)果的綜合評(píng)估

mRNA疫苗誘導(dǎo)的免疫功能異?；蛎庖叨拘孕枰攸c(diǎn)關(guān)注。不同種屬動(dòng)物及人體的免疫功能存在一定差異，故疫苗產(chǎn)生的免疫反應(yīng)也可能不同。同一疫苗在相同劑量條件下，不同種屬動(dòng)物產(chǎn)生的中和抗體滴度可能存在較大差異，甚至在某一動(dòng)物種屬可能不會(huì)產(chǎn)生特異性中和抗體。因此，非臨床試驗(yàn)中需選擇疫苗敏感的動(dòng)物種屬且中和抗體滴度超過(guò)臨床研究的有效抗體滴度，一般才能為安全性評(píng)價(jià)提供更充分的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。同時(shí)，不同種屬間免疫毒性研究結(jié)果的差異也需進(jìn)行綜合評(píng)估。

除體液免疫反應(yīng)外，mRNA疫苗還可調(diào)節(jié)部分T細(xì)胞的免疫功能。mRNA疫苗在一定程度上模擬病毒感染，因而可促進(jìn)CD8+T細(xì)胞反應(yīng)；CD4+T細(xì)胞也可參與B細(xì)胞分化從而建立疫苗的免疫記憶反應(yīng)。例如，某編碼RABVG基因的mRNA疫苗在體外系統(tǒng)、小鼠及小型豬中可誘導(dǎo)RABVG特異性的CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，干擾素γ、腫瘤壞死因子、IL-2和CD107a表達(dá)明顯升高［31］。而該疫苗在Ⅰ期臨床試驗(yàn)中僅在第3次接種后可見(jiàn)一過(guò)性的RABVG特異性的CD4+T細(xì)胞反應(yīng)［32］。Moderna公司的預(yù)防SARS-CoV-2感染的mRNA疫苗在小鼠體內(nèi)可誘導(dǎo)明顯的CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，包括刺突糖蛋白（spike glycoprotein，S蛋白）或受體結(jié)合區(qū)域特異性干擾素γ分泌增加［33-35］，而在猴和人體內(nèi)僅可見(jiàn)特異性CD4+T細(xì)胞反應(yīng)［36-37］。

除免疫毒性外，也應(yīng)關(guān)注疫苗的一般毒性，尤其是新型遞送系統(tǒng)帶來(lái)的潛在毒性。例如，在毒性試驗(yàn)中，mRNA疫苗給藥動(dòng)物肝組織出現(xiàn)與LNP遞送載體相關(guān)的空泡性改變［38-40］，這可能與LNP遞送載體在肝分布濃度較高或留存時(shí)間較長(zhǎng)相關(guān)，提示應(yīng)關(guān)注并評(píng)估m(xù)RNA疫苗臨床接種后的風(fēng)險(xiǎn)。

4.2 基于臨床-非臨床的綜合評(píng)估

mRNA疫苗的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)基于對(duì)已有臨床數(shù)據(jù)的分析，尤其是臨床使用中出現(xiàn)的不良反應(yīng)及其機(jī)制對(duì)指導(dǎo)mRNA疫苗非臨床研究具有重要的指導(dǎo)意義。臨床試驗(yàn)及應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，mRNA疫苗接種者常見(jiàn)的疫苗不良反應(yīng)包括疲勞、發(fā)冷、頭痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛、發(fā)熱和頭暈等。有研究認(rèn)為，LNP組分如PEG和電離脂質(zhì)體等可激活不同的炎癥途徑，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子如IL-1和IL-6的產(chǎn)生，且LNP可擴(kuò)散至全身各處，進(jìn)而導(dǎo)致局部或全身炎癥，可能是造成mRNA疫苗不良反應(yīng)的主要因素之一［41］。此外，近期的一些研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組人群相比，mRNA疫苗接種人群腦血管疾病、栓塞性卒中、短暫腦缺血、深靜脈血栓、心肌炎（心包炎）和過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生率略微升高［12，42-45］。腦血管疾病、栓塞性卒中、短暫腦缺血和腦靜脈血栓可能是由免疫性血栓性血小板減少癥（vaccine-induced immune thrombotic thrombocytopenia，VITT）導(dǎo)致［46］。VITT在疫苗接種人群的發(fā)生率并不高，然而由于其導(dǎo)致的后果較為嚴(yán)重，需密切關(guān)注。VITT致病機(jī)制并不明確，可能的原因包括由血小板因子4（platelet factor 4，PF4）抗體和S蛋白作用導(dǎo)致，其中PF4為荷正電的血小板蛋白，與荷負(fù)電的分子如mRNA疫苗的組分結(jié)合后，形成具有免疫原性的復(fù)合物，可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生PF4-聚陰離子抗體，進(jìn)一步激活下游通路導(dǎo)致血小板減少和（或）血栓形成［43，47］。對(duì)于S蛋白導(dǎo)致VITT的作用機(jī)制，可能是SARS-CoV-2疫苗特異性作用導(dǎo)致。研究表明，SARS-CoV-2游離的S蛋白可直接活化血小板，導(dǎo)致凝血因子釋放，最終導(dǎo)致血栓和（或）血小板減少［47-48］。關(guān)于VITT的致病機(jī)制還需進(jìn)一步研究，如在mRNA疫苗非臨床研究中，可通過(guò)檢測(cè)PF4-聚陰離子抗體及游離S蛋白的含量評(píng)估疫苗的潛在毒性?；赩ITT發(fā)病率較低，在非臨床研究中少數(shù)個(gè)體動(dòng)物PF4-聚陰離子抗體及游離S蛋白含量的升高，可能具有相關(guān)潛在毒性的提示性。

心肌炎（心包炎）和過(guò)敏反應(yīng)是目前報(bào)道較多的mRNA疫苗相關(guān)的另外2類(lèi)不良反應(yīng)［12，42］。有研究表明，心肌炎（心包炎）發(fā)生人群多為青少年群體，且mRNA-1273（美國(guó)Moderna）所致心肌炎（心包炎）發(fā)生率高于BNT162b2（德國(guó)BioNTech/美國(guó)輝瑞）［48］。臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，BNT162b2在5～11歲兒童中具有良好的安全性，未發(fā)現(xiàn)心肌炎（心包炎）等與疫苗相關(guān)的嚴(yán)重不良事件［49］。因此，德國(guó)衛(wèi)生部門(mén)建議≤30歲人群接種BNT162b2，而非mRNA-1273。小鼠靜脈注射BNT162b2后雖可見(jiàn)急性心肌炎（心包炎），然而考慮到與臨床給藥方式的差異，此研究對(duì)mRNA疫苗導(dǎo)致心肌炎（心包炎）的原因探索仍然有限［50］。另一方面，mRNA疫苗過(guò)敏反應(yīng)與個(gè)人的過(guò)敏史以及過(guò)敏原接觸史相關(guān)［51］，過(guò)敏原包括mRNA疫苗中的PEG、與PEG結(jié)構(gòu)類(lèi)似的聚山梨醇酯以及常用于其他疫苗或治療用藥物的賦形劑［52-53］。由于上述2種不良反應(yīng)的機(jī)制尚不明確，非臨床研究中進(jìn)行針對(duì)性的毒性試驗(yàn)與評(píng)估較為困難，主要通過(guò)臨床使用前及使用后進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)把控，如心肌炎（心包炎）發(fā)病后對(duì)癥治療及接種前對(duì)擬接種人群的過(guò)敏史進(jìn)行調(diào)研等［51］。

值得一提的是，有學(xué)者認(rèn)為接種SARS-CoV-2 mRNA疫苗并不會(huì)導(dǎo)致上述如心肌炎（心包炎）和VITT等不良反應(yīng)，接種疫苗后一些不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)有某種程度的降低［54］。因此，累計(jì)更多mRNA疫苗的臨床數(shù)據(jù)對(duì)于科學(xué)評(píng)估m(xù)RNA疫苗的不良反應(yīng)具有重要價(jià)值。

mRNA疫苗遞送至體內(nèi)后，其自身會(huì)誘發(fā)細(xì)胞免疫，引起Ⅰ型干擾素升高。Ⅰ型干擾素本身即作為多種疾病的治療靶點(diǎn)［55］，其升高或降低會(huì)導(dǎo)致人體免疫失衡。此外，Ⅰ型干擾素升高可抑制mRNA的翻譯效率，從而影響mRNA疫苗預(yù)防感染的效果［56-57］。因此，mRNA疫苗在老、弱、婦、幼及免疫反應(yīng)過(guò)高或過(guò)低的人群中使用的可能性和（或）劑量范圍，應(yīng)通過(guò)非臨床和臨床研究數(shù)據(jù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)-收益的權(quán)衡分析。

總之，非臨床和臨床研究人員需及時(shí)關(guān)注相關(guān)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究，找到合適的毒性評(píng)估手段，以降低mRNA疫苗臨床應(yīng)用及轉(zhuǎn)化的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是潛在的遠(yuǎn)期毒性風(fēng)險(xiǎn)。

5 加快預(yù)防用mRNA疫苗上市以應(yīng)對(duì)重大突發(fā)公共衛(wèi)生事件的可能性

近期肆虐全球的COVID-19疫情事件中，EMA授權(quán)mRNA疫苗BNT162b2和mRNA-1273緊急使用（Emergency Use Authorization），整個(gè)審批周期＜80 d。我國(guó)CDE建立了“研審聯(lián)動(dòng)，隨研發(fā)隨提交，隨提交隨審評(píng)”的審評(píng)工作機(jī)制，僅用時(shí)4個(gè)月就有4個(gè)滅活疫苗和1個(gè)重組腺病毒載體疫苗獲準(zhǔn)進(jìn)入臨床試驗(yàn)。除審評(píng)機(jī)制外，結(jié)合mRNA疫苗在技術(shù)和作用機(jī)制方面的特點(diǎn)，在此探討加快審評(píng)的技術(shù)可行性。

相對(duì)傳統(tǒng)疫苗而言，mRNA疫苗具有一個(gè)較大的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，即快速研發(fā)與臨床轉(zhuǎn)化。基于成熟的平臺(tái)技術(shù)及積累的非臨床和（或）臨床數(shù)據(jù)，是表征疫苗安全性的一個(gè)重要參考因素。WHO關(guān)于預(yù)防用mRNA疫苗的指導(dǎo)原則中提及以下情況可考慮適當(dāng)縮減非臨床評(píng)估過(guò)程以加快審批［17］。①對(duì)于已有臨床數(shù)據(jù)的mRNA疫苗，如果只是修改靶抗原的mRNA序列而不改變疫苗的其他方面者，如LNP結(jié)構(gòu)、組成比例和LNP/mRNA比例等。例如，流感病毒疫苗有可能針對(duì)變異SARS-CoV-2病毒的疫苗，如其生產(chǎn)工藝經(jīng)批準(zhǔn)，其非臨床研究可適當(dāng)減少。此類(lèi)情況應(yīng)盡可能收集相關(guān)疫苗的臨床和非臨床數(shù)據(jù)，包括已有相關(guān)的獸用疫苗，其非臨床研究也有一定的參考意義。此外，非良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范（Good Laboratory Practice，GLP）條件下的組織分布研究、攻毒實(shí)驗(yàn)等數(shù)據(jù)也可作為參考。值得注意的是，最新研究表明，LNP的大小可能會(huì)影響疫苗的免疫原性，因此若LNP粒徑發(fā)生改變，至少應(yīng)評(píng)估其對(duì)免疫原性的潛在影響［58］。②基于平臺(tái)技術(shù)的mRNA疫苗，若該平臺(tái)其他產(chǎn)品（如相同遞送載體的mRNA疫苗）已有夯實(shí)的、可供監(jiān)管機(jī)構(gòu)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)-收益評(píng)估的資料信息，包括非臨床毒理學(xué)數(shù)據(jù)及臨床試驗(yàn)和（或）應(yīng)用的經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)，其非臨床重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)可與Ⅰ期臨床試驗(yàn)同步進(jìn)行。值得注意的是，如果mRNA疫苗本身針對(duì)的病原體與免疫反應(yīng)相關(guān)，則靶抗原mRNA可能會(huì)導(dǎo)致免疫毒性增強(qiáng)，在非臨床研究中應(yīng)予以充分評(píng)價(jià)。

若mRNA疫苗由新型遞送載體和新靶抗原mRNA構(gòu)成，則減免非臨床研究的可能性較小。但在面對(duì)重大突發(fā)公共衛(wèi)生安全事件時(shí)，應(yīng)充分與監(jiān)管機(jī)構(gòu)溝通，探討可能快速推進(jìn)臨床試驗(yàn)的方案和策略。

6 mRNA疫苗BNT162b2和mRNA-1273的非臨床研究

以下總結(jié)了目前全球已上市的針對(duì)COVID-19的2款mRNA疫苗BNT162b2和mRNA-1273的非臨床試驗(yàn)及相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果。在此需明確的是，該總結(jié)僅基于EMA官方網(wǎng)站公開(kāi)的信息［38-39］，是否存在其他未公開(kāi)的資料尚不清楚。還需強(qiáng)調(diào)的是，疫苗關(guān)系人民的健康安全，由于各國(guó)國(guó)情不同，mRNA疫苗研發(fā)技術(shù)平臺(tái)與產(chǎn)業(yè)化成熟度不同，監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)mRNA疫苗的技術(shù)要求可能存在差異。

6.1 BNT162b2

BNT162b2于2020年12月被EMA有條件批準(zhǔn)上市用于≥16歲人群預(yù)防感染SARS-CoV-2。BNT162b2是全球首款獲批上市的mRNA疫苗，由遞送載體LNP及編碼全長(zhǎng)SARS-CoV-2 S蛋白的mRNA構(gòu)成，其中遞送載體包含ALC-0315和ALC-0159 2種新脂質(zhì)輔料。臨床免疫方案為2次間隔21 d肌內(nèi)注射，每人每劑30 μg。

有含2種新LNP輔料的LNP包裹替代分子熒光素酶mRNA，用大鼠研究了2種新輔料的藥動(dòng)學(xué)和生物分布特征。結(jié)果顯示，肝為2種新輔料的主要分布器官。以Wistar Han大鼠進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)，每周1次肌內(nèi)注射，共3次，毒性反應(yīng)主要表現(xiàn)為注射部位的免疫反應(yīng)（水腫和紅斑），免疫細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞）增加，紅細(xì)胞系輕度減少，脾、引流淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)增大及可逆性的肝毒性。其中，肝毒性主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫大和空泡變及谷酰轉(zhuǎn)肽酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶水平升高，這可能與LNP在肝的分布相關(guān)；其他毒性反應(yīng)與大多數(shù)mRNA疫苗相同。BNT162b2重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)mRNA疫苗特異的毒性反應(yīng)。

BNT162b2的生殖毒性試驗(yàn)中采用全周期設(shè)計(jì)，大鼠分別于交配前21和14 d以及妊娠第9和20天肌內(nèi)注射給藥，雄鼠交配結(jié)束后解剖，雌鼠于妊娠期21 d及產(chǎn)后21 d分批解剖。結(jié)果顯示，BNT162b2對(duì)親代生殖、胚胎-胎仔形成和子代發(fā)育均未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)。

6.2 mRNA-1273

mRNA-1273于2021年1月由EMA有條件批準(zhǔn)上市用于≥18歲人群預(yù)防感染SARS-CoV-2。mRNA-1273由LNP包裹編碼全長(zhǎng)SARS-CoV-2 S蛋白mRNA構(gòu)成，其遞送載體中包含新型輔料SM-102。臨床免疫方案為2次間隔28 d肌肉注射，每人每劑100 μg。

mRNA-1273重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，其毒性反應(yīng)與BNT162b2基本類(lèi)似。該研究雖在非GLP條件下進(jìn)行，但申辦方提供了其他6個(gè)GLP條件下與mRNA-1273遞送載體相同、但編碼抗原不同的mRNA疫苗的非臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)，通過(guò)對(duì)比其毒性反應(yīng)的相似性，推測(cè)mRNA-1273的毒性反應(yīng)主要與遞送載體相關(guān)，與編碼抗原的mRNA無(wú)關(guān)。mRNA-1273的生殖毒性試驗(yàn)也采用全周期設(shè)計(jì)，在大鼠交配前和妊娠期間各肌內(nèi)注射2次。結(jié)果顯示，mRNA-1273對(duì)親代生殖、胚胎-胎仔形成和子代發(fā)育均未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)。

對(duì)以上資料分析可見(jiàn)，BNT162b2重復(fù)給藥試驗(yàn)的給藥周期（共17 d）并未完全涵蓋人體的臨床免疫方案（間隔21 d）；mRNA-1273的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)為非GLP試驗(yàn)。生殖毒性試驗(yàn)中，未見(jiàn)考察mRNA本身、遞送載體本身及mRNA疫苗所誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體胎盤(pán)轉(zhuǎn)運(yùn)及乳汁分泌的資料。此外，未見(jiàn)針對(duì)其中所含新型輔料的相關(guān)毒性研究，僅通過(guò)藥代數(shù)據(jù)和查閱的資料說(shuō)明其安全性。未見(jiàn)mRNA-1273單獨(dú)的組織分布研究，僅以相同LNP包裹的一種巨細(xì)胞病毒糖蛋白mRNA疫苗進(jìn)行了類(lèi)比評(píng)價(jià)。

通過(guò)以上資料推測(cè)，在面臨全球重大公共衛(wèi)生事件時(shí)，BNT162b2和mRNA-1273似采用簡(jiǎn)化的非臨床研究、基于已有的科學(xué)證據(jù)（疫苗本身和平臺(tái)技術(shù)）加快審批及臨床轉(zhuǎn)化，最終實(shí)現(xiàn)了有條件批準(zhǔn)緊急使用。

7 mRNA疫苗非臨床研究面臨的挑戰(zhàn)和展望

隨著mRNA-1273獲得緊急批準(zhǔn)使用以及BNT162b2全面批準(zhǔn)上市，全球包括我國(guó)有越來(lái)越多的制藥企業(yè)和研發(fā)機(jī)構(gòu)投入該領(lǐng)域。我國(guó)艾博生物研發(fā)的首個(gè)國(guó)產(chǎn)mRNA疫苗ARCoVaX（ARCoV）Ⅰ期臨床試驗(yàn)表明，ARCoV安全性和耐受性良好，且能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。此外，ARCoV較BNT162b2和mRNA-1273表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性，可在2～8℃保持穩(wěn)定≥6個(gè)月，這為mRNA疫苗的臨床應(yīng)用提供了較大的便利［59］。雖然mRNA疫苗具有較大的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，但與其他類(lèi)型的疫苗相比，其臨床轉(zhuǎn)化仍面臨不小的挑戰(zhàn)，其中一個(gè)較大的擔(dān)憂(yōu)是非臨床研究數(shù)據(jù)外推至臨床應(yīng)用的局限性。不同動(dòng)物種屬的同類(lèi)受體在結(jié)構(gòu)和（或）功能上可能存在差異，因而導(dǎo)致疫苗在不同種屬間可能存在生物活性的差異，甚至導(dǎo)致不同的免疫反應(yīng)。其次，自身免疫反應(yīng)的評(píng)價(jià)尚無(wú)較好的動(dòng)物模型，導(dǎo)致非臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)的局限性。第三，對(duì)于一類(lèi)新型傳染性疾病的疫苗，非臨床試驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床使用的劑量及免疫反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間提供的數(shù)據(jù)支持有限，疫苗臨床使用的安全性和有效性更多依賴(lài)于Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ期臨床試驗(yàn)。

在全球范圍內(nèi)，mRNA疫苗一直在持續(xù)地創(chuàng)新發(fā)展，如用含有內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列（internal ribosome entry site）的環(huán)狀RNA代替mRNA編碼抗原，及以選擇性?xún)?nèi)源性衣殼化的細(xì)胞遞送（selective endogenous encapsidation for cellular delivery）系統(tǒng)為代表的新型載體等將成為下階段的研究熱點(diǎn)之一［60］?，F(xiàn)有針對(duì)mRNA疫苗的指導(dǎo)原則并不一定適用于創(chuàng)新性mRNA疫苗，這勢(shì)必給mRNA疫苗的非臨床和臨床研究帶來(lái)挑戰(zhàn)。因此，在創(chuàng)新型mRNA疫苗的非臨床安全性評(píng)價(jià)中，應(yīng)遵循逐案分析原則，在遵循GLP規(guī)范性的前提下，科學(xué)合理地開(kāi)展非臨床研究，更全面地提示mRNA疫苗臨床應(yīng)用中的潛在風(fēng)險(xiǎn)。