李宗源 陳紅映 于澤玥 郝莉雨 孫建輝 李洪梅 陳 敏

(1 江蘇大學(xué)藥學(xué)院，鎮(zhèn)江，210023； 2 中國中醫(yī)科學(xué)院，北京，100700； 3 瓊海市中醫(yī)院，瓊海，571499； 4 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京，100700； 5 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心，北京，100700)

瑪咖(LepidiummeyeniiWalper，Maca)屬于十字花科獨(dú)行菜屬植物，能極好地適應(yīng)極端惡劣的高海拔條件，主要生長在海拔2 800～5 000 m的地方，如秘魯?shù)陌驳谒股矫}的中部地區(qū)，是安第斯山脈唯一的十字花科植物[1]，瑪咖在秘魯是一種傳統(tǒng)的糧食作物，可種植，且全株均可食用[2]。瑪咖的藥用部位主要是下胚軸，且下胚軸主要有13種顏色，其中黑色、黃色、紅色應(yīng)用較為廣泛，其下胚軸被作為功能性食品或藥物在全球廣泛使用[3]?，斂г?011年被我國批準(zhǔn)為新資源食品[4]?，斂Р坏胸S富的多糖、鞣質(zhì)、脂肪油、支鏈氨基酸等成分，還含有一些次生代謝物，如芥子油苷、瑪卡酰胺、瑪咖烯、黃酮類、萜類、甾醇類化合物等[5]，具有抗疲勞[6]、促進(jìn)性欲[7]、抑制前列腺增生[8]、降血糖和降血脂[9]、抗骨質(zhì)疏松[10]、提高記憶力[11]、提高免疫力[12]、抗氧化[13]、治療皮膚損傷[14]等作用。

在人們?nèi)粘Ｉ钪?，乙醇飲品的銷量日益增高，這種現(xiàn)象同時(shí)伴隨著疾病的產(chǎn)生，如酒精性肝損傷(Alcoholic Liver Disease，ALD)，ALD是一種由急性或慢性飲酒引起的肝臟代謝紊亂，已成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，嚴(yán)重危害人類健康[15]。據(jù)研究報(bào)道，瑪咖多糖能減輕乙醇對人肝細(xì)胞癌(Human Hepatocellular Carcinomas，HCC)HepG2細(xì)胞的損傷[16]；瑪咖醇提物可以改善刀豆蛋白(Concanavalin A，ConA)誘導(dǎo)的急性肝炎[17]。胃腸動(dòng)力作為消化系統(tǒng)中一項(xiàng)重要的功能，其發(fā)生疾病的概率在近年來不斷增加，中醫(yī)認(rèn)為，脾胃虛弱、氣機(jī)升降失調(diào)是胃腸動(dòng)力障礙性疾病發(fā)生的主要病機(jī)[18]。研究發(fā)現(xiàn)，瑪咖地上部分能提高小鼠血清胃動(dòng)素(Motillin，MTL)、促胃液素(Gastrin，GAS)，從而促進(jìn)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)[19]。其他相關(guān)文獻(xiàn)對瑪咖治療、促進(jìn)胃腸道功能報(bào)道甚少。在人的平均壽命中，大約有60噸食物通過人體胃腸道，同時(shí)環(huán)境中大量的微生物對腸道的完整性構(gòu)成了巨大的威脅，而在胃腸道定居的細(xì)菌、古菌和真核生物的集合稱為“腸道微生物群落”[20]，腸道菌群是人體中最大的消化器官，包括雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌等[21]，幾千年來它們與宿主共同進(jìn)化，形成了一種錯(cuò)綜復(fù)雜的互惠關(guān)系。目前未見瑪咖水提液對ALD、胃腸運(yùn)動(dòng)、腸道菌群影響的相關(guān)性報(bào)道。因此，作者通過ALD模型、胃腸動(dòng)力障礙模型、正常動(dòng)物，評價(jià)瑪咖水提液的保肝、通便、調(diào)節(jié)腸道菌群作用，為擴(kuò)大瑪咖應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 無特定病原體(Specific Pathogen Free，SPF)級ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2016-0006。飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動(dòng)物室，為屏障環(huán)境，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號：SYXK(京)2019-0003。本研究通過中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動(dòng)物倫理委員會(huì)審批(倫理審批號為：2020B072)

1.1.2 藥物 黑瑪咖(會(huì)澤樞康中草藥種植有限公司)；聯(lián)苯雙酯滴丸(北京協(xié)和藥廠，批號：19120)；麻仁潤腸丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號：19015139)。

1.1.3 試劑與儀器 無水乙醇(分析純)(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20181210)；鹽酸洛哌丁胺(SIGMA公司，美國，批號：127M4884V)；活性炭粉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20190702)；阿拉伯樹膠(solarbio公司，批號：1010H021)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-pyruvic Transaminase，GPT)(北京安圖生物工程有限公司，批號：01112D11)；谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-oxaloacetic Transaminase，GOT)(北京安圖生物工程有限公司，批號：01015C11)；堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，ALP)(北京安圖生物工程有限公司，批號：01103C11)；TransStartFastpfu DNA Polymerase(北京全式金生物技術(shù)有限公司，批號：AP221-02)；總蛋白定量測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20201022)；谷胱甘肽(Glutathione，GSH)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20201019)；小鼠腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(cloud-clone公司，美國，批號：L201201225)；小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1(Monocyte Chemotactic Protein 1，MCP-1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(cloud-clone公司，美國，批號：L201203406)；小鼠MTL酶聯(lián)免疫試吸附試驗(yàn)劑盒(cloud-clone公司，美國，批號：L201224496)；環(huán)磷酸鳥苷(Cyclic Guanosine Monophosphate，cGMP)試劑盒(cloud-clone公司，美國，批號：L210212978)；EZNA Stool DNA Kit糞便DNA提取試劑盒(OMEGA公司，美國，批號：D4015-02)；AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒(AXYGEN公司，美國，批號：AP-GX-250)；冷凍離心機(jī)(KUBOTA公司，日本，型號：5922)；電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司，型號：BSA3202S-CW]；電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司，型號：PL203]；全自動(dòng)生化分析儀(東芝公司，日本，型號：TBA-120FR)；酶標(biāo)儀(Bio Tek Instruments，Inc，美國，型號：Epoch)；電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司，型號：98-I-B)；中草藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司，型號：FW177)；CO2培養(yǎng)箱(SANYO Electric Co.，Ltd，日本，型號：MCO-15AC)；電熱三用水箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠有限責(zé)任公司，型號：BDS260)；基因擴(kuò)增儀(ABI公司，美國，型號：GeneAmp970)；測序儀(Illumina公司，美國，型號：Illumina MiSeq)；藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)(Promega公司，美國，型號：QuantiFluor-ST)。

1.2 方法

1.2.1 瑪咖對小鼠ALD保護(hù)作用的研究

1.2.1.1 分組及模型制備 選取ICR小鼠71只，SPF級，雄性，體質(zhì)量18～22 g，自由飲水和飲食，動(dòng)物在屏障環(huán)境飼養(yǎng)，濕度為：40%～70%，溫度為22～27 ℃。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分別為正常組、模型組、聯(lián)苯雙酯滴丸組(0.006 g/kg)、瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量劑量組(6.50 g/kg、3.25 g/kg、1.63 g/kg)，每組12只。每天灌胃給予相應(yīng)受試物，正常組和模型組灌胃等量的純凈水(20 mL/kg)，連續(xù)14 d，末次藥后2 h，除正常組外，模型組和其他受試組單次灌胃給予18 mL/kg、50%乙醇造模，禁食不禁水12 h后進(jìn)行標(biāo)本采集和指標(biāo)檢測。

1.2.1.2 給藥方法 瑪咖水提液的制備[22]：將瑪咖切片粉碎成粗粉，稱取粗粉200 g放入圓底燒瓶，加入4 L純凈水，置電熱套中加熱，保持微沸100 min，過濾，濾液水浴濃縮(70 ℃)，得生藥質(zhì)量濃度為1 g/mL的水提液，4 ℃保存，臨用前稀釋至0.32 g/mL、0.16 g/mL、0.08 g/mL。正常組和模型組灌胃等量的純凈水(20 mL/kg)，其余各組給予相應(yīng)受試物灌胃，連續(xù)14 d。

1.2.1.3 檢測指標(biāo)與方法 1)樣本采集：小鼠禁食不禁水12 h后，摘眼球取血，4 ℃中放置2 h，離心(1 710×g，15 min)，分離血清，-20 ℃保存。取血后，將小鼠頸椎脫臼處死，摘取肝臟，稱肝重，將肝在液氮速凍后置于-20 ℃保存。2)小鼠肝功能指標(biāo)檢測：采用TBA-120FR全自動(dòng)生化分析儀，檢測小鼠血清中GPT、GOT、ALP的含量。3)小鼠炎癥指標(biāo)檢測：按照酶聯(lián)免疫吸附試劑盒說明書操作，檢測小鼠2%肝勻漿中MCP-1和小鼠血清中TNF-α的含量。4)小鼠脂質(zhì)過氧化指標(biāo)檢測：按照試劑盒說明書操作，檢測小鼠10%肝勻漿中GSH的含量。

1.2.2 瑪咖通便功能的研究

1.2.2.1 分組與模型制備 選取ICR小鼠50只，SPF級，體質(zhì)量18～22 g，自由飲水和飲食，動(dòng)物在屏障環(huán)境飼養(yǎng)，濕度為：40%～70%，溫度為22～27 ℃。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分別為正常組、模型組、麻仁潤腸丸組(6.24 g/kg)、瑪咖水提液高、中劑量組(6.50 g/kg、3.25 g/kg)，每組10只。每天灌胃給予相應(yīng)受試物1次，正常組和模型組灌胃等量的純凈水(20 mL/kg)，連續(xù)給藥9 d。測定小腸推進(jìn)率前各組小鼠禁食不禁水16 h，正常組灌胃給予純凈水，其余各組灌胃給予鹽酸洛哌丁胺混懸液10 mg/kg造模。

1.2.2.2 給藥方法 造模30 min后，各組分別灌胃給予含相應(yīng)受試樣品的墨汁溶液(含5%活性炭粉、10%阿拉伯樹膠)，正常組和模型組灌胃墨汁溶液。給藥25 min后摘眼球取血，4 ℃中放置2 h，離心(1 710×g，15 min)，分離血清，-20 ℃保存。

1.2.2.3 檢測指標(biāo)與方法 脫頸椎處死動(dòng)物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長度”，計(jì)算小腸推進(jìn)率(%)=墨汁推進(jìn)度/小腸總長度×100%。

1.2.3 瑪咖調(diào)節(jié)腸道菌群功能的研究

1.2.3.1 動(dòng)物分組 選取ICR小鼠50只，SPF級，雄性，體質(zhì)量18～22 g，自由飲水和飲食，動(dòng)物在屏障環(huán)境飼養(yǎng)，濕度為40%～70%，溫度為22～27 ℃。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分別為空白組、模型組、麻仁潤腸丸組(6.24 g/kg)、瑪咖水提液高劑量、中劑量組(12.6 g/kg、8.4 g/kg)，每組10只。

1.2.3.2 給藥方法 給予各組相應(yīng)濃度瑪咖水提液灌胃，體積為20 mL/kg，連續(xù)給藥30 d。末次給藥后30 min脫頸椎處死小鼠，無菌條件下取盲腸內(nèi)容物，液氮速凍后于-80 ℃保存。

1.2.3.3 檢測指標(biāo)與方法 1)腸道內(nèi)容物DNA提取、16S rDNA擴(kuò)增及測序：按DNA提取試劑盒說明書提取盲腸內(nèi)容物DNA，使用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測提取DNA的質(zhì)量。對盲腸內(nèi)容物提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，本實(shí)驗(yàn)選用的擴(kuò)增引物為338F-806R，其中338F序列為5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′，806R序列為5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′。使用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增后的產(chǎn)物。選取450 bp左右的條帶，凝膠回收試劑盒回收擴(kuò)增產(chǎn)物。用Tris-HCl洗脫收集回收后的擴(kuò)增產(chǎn)物，定量后按比例混合不同樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物。通過PCR將接頭連接到混合好的樣品DNA上，使用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測并回收。再用1% NaOH溶液將產(chǎn)物變性為單鏈，完成文庫構(gòu)建。利用Miseq平臺對文庫進(jìn)行高通量測序。2)生物信息分析：使用FLASH進(jìn)行數(shù)據(jù)質(zhì)量控制；OTU(運(yùn)算分類單元)聚類使用Usearch，按照99%相似度進(jìn)行聚類；使用QIIME2(微生物生態(tài)學(xué)定量分析)進(jìn)行物種注釋及weighted-UniFrac矩陣,數(shù)據(jù)庫為Silva(Release128，https://www.arb-silva.de),使用LEfSe(線性判別分析效應(yīng)尺寸)方法對屬水平進(jìn)行豐度顯著差異分類單元篩選，判別標(biāo)準(zhǔn)為：Kruskal-Wallis檢驗(yàn)篩選值α<0.05，配對Wilcoxon檢驗(yàn)篩選值α<0.05，顯著判別值LDA>2。

2 結(jié)果

2.1 瑪咖對小鼠ALD保護(hù)作用的研究

2.1.1 小鼠肝功能指標(biāo) 正常組和聯(lián)苯雙酯滴丸組分別有一只動(dòng)物意外死亡。與正常組比較，模型組小鼠血清中GPT、GOT、ALP含量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，瑪咖水提液中劑量能明顯降低小鼠血清中GPT、GOT的含量(P<0.05)，低劑量能明顯降低小鼠血清中ALP的含量(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 瑪咖對小鼠肝功能指標(biāo)的影響

2.1.2 小鼠炎癥指標(biāo) 與正常組比較，模型組小鼠血清中TNF-α含量明顯增加(P<0.05)；與模型組比較，瑪咖水提液高、中劑量能明顯降低小鼠血清中TNF-α的含量(P<0.05或P<0.01)。見表2。與模型組比較，瑪咖水提液高劑量、低劑量能明顯降低小鼠肝臟組織中MCP-1的含量(P<0.05或P<0.01)。見表3。

表2 瑪咖對小鼠血清中炎癥介質(zhì)含量的影響

表3 瑪咖對小鼠肝組織中炎癥介質(zhì)含量的影響

2.1.3 小鼠脂質(zhì)過氧化指標(biāo) 與正常組比較，模型組小鼠肝臟組織中GSH含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量劑量均能明顯升高小鼠肝臟組織中GSH的含量(P<0.05或P<0.01)。見表4。

表4 瑪咖對小鼠肝臟組織中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)的影響

2.2 瑪咖通便功能的研究

2.2.1 瑪咖對小鼠小腸推進(jìn)率的影響 與正常組比較，模型組小鼠小腸推進(jìn)率明顯減小(P<0.001)，表明小鼠小腸運(yùn)動(dòng)抑制模型造模成功；與模型組比較，瑪咖水提液高劑量能明顯增加小鼠小腸推進(jìn)率(P<0.05或P<0.01)。見表5。

表5 瑪咖對小鼠小腸推進(jìn)率的影響

2.2.2 瑪咖對小鼠血清中MTL和cGMP的影響 與模型組比較，瑪咖水提液中劑量組能明顯增加小鼠血清中MTL的含量(P<0.05)，同時(shí)，瑪咖水提液能降低cGMP水平。見表6。

表6 瑪咖對小鼠血清中MTL和cGMP的影響

2.3 瑪咖調(diào)節(jié)腸道菌群功能的研究

2.3.1 物種注釋及評估 通過Pan/Core物種分析得出：隨著樣本量的增加，Pan物種增加，并趨于平緩，Core物種減少，并趨于平緩，表明本次實(shí)驗(yàn)小鼠的樣本量足夠，可信度高。見圖1。通過樣本Alpha多樣性分析，simpson指數(shù)反映微生物群落物種多樣性，瑪咖水提液中劑量組simpson指數(shù)高于空白組。見圖2。

2.3.2 物種組成分析 小鼠腸道菌群的群落結(jié)構(gòu)在門水平上，豐度較高的菌群為厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、放線菌門(Actinobacteria)、螺旋體菌門(Saccharibacteria)和變形菌門(Proteobacteria)，其中Firmicutes與Bacteroidetes占絕對優(yōu)勢。與空白組比較，瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量劑量減少了Firmicutes的豐度；瑪咖水提液高劑量、低劑量增加了Bacteroidetes的豐度。見圖3。在屬水平上，乳桿菌屬(Lactobacillus)和擬桿菌屬(norank_f__Bacteroidales_S24-7_group)的豐度占絕對優(yōu)勢。其他豐度較高的菌群依次為毛螺菌屬(norank_f__Lachnospiraceae、Lachnospiraceae_NK4A136_group、unclassified_f__Lachnospiraceae)、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)和擬普雷沃菌屬(Alloprevotella)。與空白組比較，瑪咖水提液中劑量增加了Lactobacillus的豐度；瑪咖水提液中劑量、低劑量增加了Alloprevotella的豐度。見圖4。不同樣本中物種(屬水平、OTU水平上)組成相似性及重疊情況通過韋恩圖直觀展現(xiàn)。見圖5。

2.3.3 小鼠腸道微生物群落結(jié)構(gòu)的變化情況 基于Beta多樣性分析中的PcoA分析表明，在OTU分類水平上，空白組與瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量組的腸道微生物群落有顯著性差異。基于weighed-UniFrac矩陣的PerMANOVA分析同樣得到：在OTU水平，空白組與瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量組間物種組成存在一定差異。見圖6，表7。

表7 與空白組比較小鼠腸道微生物群落結(jié)構(gòu)差異(n=10)

2.3.4 物種差異分析 利用LEfSe方法在屬水平上篩選空白組與瑪咖水提液組小鼠中豐度變異的腸道菌。與空白組比較，瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量組變化趨勢一致且相對豐度大于0.01%，即被認(rèn)為豐度顯著差異分類單元。經(jīng)Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，獲得組間顯著性差異物種。差異顯著的物種有脫硫弧菌屬(Desulfovibrio)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、螺桿菌屬(Helicobacter)、顫螺旋菌屬(Oscillibacter)、氣球菌屬(Aerococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、毛螺菌屬(Lachnospiraceae_NK4A136_group)、產(chǎn)丁酸菌屬(Alistipes)、消化球菌(norank_f__Peptococcaceae)、瘤胃球菌屬(norank_f__Ruminococcaceae)、普雷沃氏菌屬(Prevotellaceae_UCG-001)、硬壁菌屬(unclassified_p__Firmicutes)、真桿菌屬(Eubacterium_brachy_group)、unclassified_f__Coriobacteriaceae、Family_XIII_UCG-001。與空白組比較，瑪咖水提液高劑量、低劑量能明顯增加Alistipes的豐度(P<0.05)；瑪咖水提液中劑量能明顯降低Desulfovibrio、Eubacterium_brachy_group的豐度(P<0.01)；瑪咖水提液低劑量能明顯降低Desulfovibrio、norank_f__Peptococcaceae的豐度(P<0.01)。見圖7～8。

2.3.5 代謝功能預(yù)測 使用PICRUSt軟件進(jìn)行功能預(yù)測，與空白組比較，瑪咖水提液高劑量組RNA加工和修飾、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞外結(jié)構(gòu)、細(xì)胞骨架項(xiàng)降低，其他代謝功能升高；瑪咖水提液中劑量組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞骨架項(xiàng)降低，其他代謝功能升高；瑪咖水提液低劑量組僅RNA加工和修飾、細(xì)胞外結(jié)構(gòu)、細(xì)胞骨架項(xiàng)降低，其他代謝功能升高。見圖9。

3 討論

GPT、GOT、ALP是血清中評價(jià)肝臟功能的重要標(biāo)志性因子，從小鼠肝功能指標(biāo)結(jié)果來看，用18 mL/kg、50%乙醇造模后，與正常組比較，模型組小鼠血清中GPT、GOT、ALP含量增加，表明造模成功，與模型組比較，瑪咖水提液中劑量組能明顯降低小鼠血清中GPT、GOT的含量，瑪咖水提液低劑量組能明顯降低小鼠血清中ALP的含量。

ALD的病理變化包括脂肪肝、肝炎、肝纖維化和肝硬化，最后到肝癌，脂肪肝是ALD的最早反應(yīng)[23]，乙醇能誘導(dǎo)肝細(xì)胞色素P450 2E1(Cytochrome P450 2E1，CYP2E1)，CYP2E1的氧化導(dǎo)致活性氧的過度產(chǎn)生，由此導(dǎo)致氧化應(yīng)激[24]，引發(fā)脂肪酸β-氧化出現(xiàn)障礙，肝臟內(nèi)大量游離脂肪酸(Free Fat Acid，F(xiàn)FA)出現(xiàn)堆積，導(dǎo)致肝臟代謝紊亂。本研究發(fā)現(xiàn)，瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量劑量均能明顯升高小鼠肝臟組織中GSH的含量。瑪咖水提液高劑量、中劑量能明顯降低小鼠血清中TNF-α的含量，瑪咖水提液高劑量、低劑量組能有效降低ALD小鼠肝組織中MCP-1的含量。上述結(jié)果顯示瑪咖對ALD小鼠的肝功能、脂質(zhì)過氧化及炎癥具有保護(hù)作用。

瑪咖通便功能的研究結(jié)果顯示，瑪咖能通過增加MTL分泌和抑制cGMP的生成，從而增加小鼠的小腸推進(jìn)率。MTL主要由小腸中的Mo細(xì)胞分泌，主要分布于十二指腸近端和空腸的隱窩以及垂體前葉、松果體、大腦皮質(zhì)、小腦和下丘腦等神經(jīng)組織，能改善小腸的運(yùn)動(dòng)，MTL是通過增加結(jié)腸運(yùn)動(dòng)來促進(jìn)胃腸內(nèi)容物運(yùn)動(dòng)的一種重要因子[25]。它能夠提高胃腸道的收縮力和張力[26]，增加平滑肌收縮和胃蛋白酶分泌，促進(jìn)胃排空及促進(jìn)消化等[27-28]。

cGMP是細(xì)神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)中細(xì)胞內(nèi)一種重要的第二信使，是調(diào)節(jié)平滑肌的重要因素，平滑肌細(xì)胞中cGMP含量升高，使細(xì)胞中Ca2+濃度降低，引起平滑肌舒張[29-30]。瑪咖減少cGMP生成，可能通過抑制sGC(可溶性鳥苷酸環(huán)化酶)/cGMP、CNP(C型利尿鈉肽)/cGMP信號通路，從而改善小鼠胃腸動(dòng)力障礙。

小鼠腸道菌群的微生物群落結(jié)構(gòu)分析表明，在門水平上，瑪咖水提液高劑量、中劑量、低劑量劑量降低了小鼠腸道菌群中厚壁菌門相對豐度；瑪咖水提液高劑量、低劑量增加了擬桿菌門相對豐度。在屬水平上，瑪咖水提液中劑量提高了乳桿菌屬相對豐度，瑪咖水提液中劑量、低劑量增加了擬普雷沃菌屬的相對豐度。

擬桿菌門是腸道菌群中的有益菌，其在腸道菌群的比例為15%～90%，而厚壁菌門在腸道菌群的比例為70%～5%[31]。有研究發(fā)現(xiàn)厚壁菌門多于擬桿菌門時(shí)會(huì)高效吸收熱量導(dǎo)致肥胖[31]，因此，瑪咖能否通過調(diào)節(jié)腸道菌群從而達(dá)到減肥的效果，這需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來證明。乳桿菌屬作為腸道菌群中的一種有益菌屬，具有調(diào)節(jié)腸道，降低膽固醇，增強(qiáng)免疫力的功能[32]。如拮抗腸球菌和白色念珠菌等有害菌，對提高抗菌療法的療效[33]、減輕腸易激綜合征癥狀[34]、抗高血糖活性、治療糖尿病等具有積極作用[35]。擬普雷沃菌屬具有降解多種植物多糖的能力，它在消化富含碳水化合物的食物中起關(guān)鍵作用[36]。以上表明瑪咖可能通過調(diào)節(jié)腸道菌群來增加乳酸菌屬和擬普雷沃菌屬的相對豐度，從而促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)。

綜上所述，瑪咖水提液對ALD小鼠的肝功能、脂質(zhì)代謝異常、過氧化及炎癥具有保護(hù)作用，可促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)，調(diào)節(jié)腸道菌群，為擴(kuò)大瑪咖應(yīng)用提供了參考，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。