褚玲娜，韓 強(qiáng)，蔣曉莉，王爭光

(1.長興縣畜牧獸醫(yī)站，浙江 長興 313100； 2.浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院)

湖羊原產(chǎn)于太湖流域的浙江、江蘇等地，終年舍飼，是江南唯一的優(yōu)良地方綿羊品種。湖羊性成熟早、四季發(fā)情，二年三胎，繁殖力強(qiáng)、泌乳性能高，早期生長快，適應(yīng)性強(qiáng)，耐受濕熱高溫，也適應(yīng)各地不同氣候，因此湖羊從太湖流域已經(jīng)擴(kuò)展到全國各地飼養(yǎng)。目前我國湖羊規(guī)模化養(yǎng)殖處于快速發(fā)展階段，大型規(guī)模化羊場逐步發(fā)展，日趨成熟。但母羊發(fā)情不集中，非繁殖季節(jié)發(fā)情率低、常規(guī)人工授精受胎率低等已成為規(guī)?；a(chǎn)業(yè)發(fā)展的制約。為此，羊定時人工授精技術(shù)的研究與應(yīng)用已列入國家重點研發(fā)計劃。定時人工授精技術(shù)包括同期發(fā)情技術(shù)和人工授精技術(shù)，該技術(shù)用在生產(chǎn)中，可免去試情這一環(huán)節(jié)，在撤栓后的固定時間內(nèi)進(jìn)行輸精，提高了配種效率，加快了羊群繁育速度，為種質(zhì)資源的規(guī)?；a(chǎn)發(fā)揮重要作用。本文綜述了國內(nèi)湖羊定時人工授精技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀，為湖羊繁殖技術(shù)的應(yīng)用研究提供參考依據(jù)。

1 定時人工授精技術(shù)

定時人工授精技術(shù)(TAI)是指采用一些外源性生殖激素來調(diào)控母羊的發(fā)情周期,使母畜的發(fā)情具有可控性和同步化，在預(yù)定時間、使母羊集中發(fā)情并排卵，然后進(jìn)行人工授精[1]。定時輸精技術(shù)包括同期發(fā)情技術(shù)和人工授精技術(shù)，該技術(shù)大大提高了優(yōu)秀種公羊的利用率和母羊的受胎率，加速了羊群的改良進(jìn)程，同時減少了疾病的傳播。

2 同期發(fā)情

2.1同期發(fā)情原理 下丘腦-垂體-卵巢軸是一個完整而協(xié)調(diào)的神經(jīng)內(nèi)分泌體系，在神經(jīng)內(nèi)分泌和生殖激素的共同作用下，促使母畜發(fā)情和排卵。在自然狀態(tài)下，初情期后或產(chǎn)后母羊的發(fā)情活動呈現(xiàn)周期性，卵巢黃體的形成與退化反復(fù)出現(xiàn)。在綿羊的發(fā)情環(huán)節(jié)中有兩種途徑可以實現(xiàn)同期發(fā)情。一是對一群母羊使用孕酮等外源激素，母羊受到高濃度孕酮對卵巢功能的抑制作用，卵泡發(fā)育停止，并處于一個類似的人工黃體期。當(dāng)統(tǒng)一解除孕酮的抑制作用后，其卵泡活動恢復(fù)正常，形成優(yōu)勢卵泡。此時生長卵泡會集中分泌大量的雌激素，集中出現(xiàn)發(fā)情，最終成熟而排卵。二是利用前列腺素及其類似物,作用于黃體，待其溶解消退后，孕酮水平也隨之降低，解除對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制，使得下丘腦GnRH得以釋放，卵泡發(fā)育恢復(fù)正常，形成優(yōu)勢卵泡并排卵，實現(xiàn)同期[2-3]。

2.2同期發(fā)情應(yīng)用 我國綿羊同期發(fā)情試驗開始于20世紀(jì)80年代，先后采用了前列腺素(PG)注射、孕酮埋植以及其他中草藥催情進(jìn)行同期發(fā)情試驗{4}。目前,同期發(fā)情采用最多的方法是孕酮陰道栓法(CIDR)，此外還有注射前列腺素(PG)法、耳皮下埋植法、注射孕酮法、口服孕酮法等。據(jù)統(tǒng)計，國內(nèi)外羊同期發(fā)情處理方法中，陰道栓緩釋法所占的比例在80%以上[5]。

3 操作要點

3.1動物及物品準(zhǔn)備

3.1.1湖羊選擇 通常選擇7月齡以上的后備母羊、斷奶后未配種的空懷母羊、分娩后40 d以上的哺乳母羊以及長期不發(fā)情的母羊作為同期發(fā)情處理備用母羊。采集體質(zhì)健康、符合種用標(biāo)準(zhǔn)、年齡在2-5歲的種公羊精液或引進(jìn)外場優(yōu)良種公羊精液作為人工授精用精液[6]。

3.1.2物品準(zhǔn)備 孕酮激素(P4)、馬絨毛膜促性腺激素(eCG)、氯前列醇鈉注射液(PG)、一次性導(dǎo)管式陰道栓；止血鉗、小噴壺、生理鹽水、新潔爾滅、潤滑劑等。人工授精所需設(shè)備：羊假陰道、羊輸精槍、羊內(nèi)窺鏡、羊精液稀釋液、專用恒溫加熱器、電子顯微鏡等。

3.2主要操作流程

3.2.1放栓 用噴壺將含0.05%新潔爾滅的生理鹽水配成的消毒劑噴灑在母羊外陰部，之后用清潔紙巾擦干；逐支取出一次性導(dǎo)管式陰道栓，用止血鉗夾住外導(dǎo)管的后端，然后在外導(dǎo)管的前端噴灑少量潤滑劑。左手分開陰門，右手持止血鉗將導(dǎo)管插入陰道，插入深度為外導(dǎo)管后端比陰門深1～2 cm, 左手拇指將推桿推到底，然后右手持止血鉗將外導(dǎo)管和推桿一起抽出。放栓后，連續(xù)3 d在母羊采食時巡查是否脫栓，正常情況下有2%～3%的脫栓率。對脫栓母羊進(jìn)行補(bǔ)放。

3.2.2撤栓 放栓當(dāng)天計為0 d, 在放栓后第11 d上午注射eCG和PG，可將兩種激素按比例混合后使用連續(xù)注射器進(jìn)行頸部肌肉注射。在注射eCG和PG 24～30 h即放栓后的第12 d下午撤栓。

3.2.3采精 發(fā)情母羊集中在10∶00進(jìn)行配種，采精前對假陰道、擴(kuò)張器、輸精槍槍頭、量杯等器械進(jìn)行酒精消毒, 水浴鍋中蒸餾水恒溫至30～31.5 ℃。采精時在種公羊爬跨母羊過程中，采精員戴一次性橡膠防護(hù)手套右手持假陰道、左手握陰莖先釋放分泌物，然后將陰莖引入假陰道，待公羊前沖即表明射精。公羊射精完畢，取下假陰道，準(zhǔn)備驗精。1只種公羊1次取精量約為3 mL, 1天采集1次，可配母羊10～15只[7]。

精子收集后觀察顏色、辨別氣味，正常為乳白色，無膿、無腐敗氣味，肉眼能看到云霧狀，可通過電子顯微鏡查看精子活力和密度。

3.2.4輸精 在撤栓后48～52 h (即放栓后的第14 d下午)和60～64 h(即放栓后的第15 d早上) 用鮮精進(jìn)行兩次常規(guī)子宮頸輸精，每次輸精劑量為0.2 mL,前進(jìn)運動精子數(shù)不少于5000萬個。

4 統(tǒng)計指標(biāo)

4.1不返情率 不返情率是指TAI后21 d內(nèi)未出現(xiàn)發(fā)情的母羊數(shù)占試驗?zāi)秆驍?shù)的百分率。母羊配種后第14～21 d，每天用帶試情布的公羊試情兩次，將返情母羊挑出。記錄可追蹤到的母羊的不返情情況，并計算不返情率。

4.2受胎率 配種后50～60 d, 用便攜式B型超聲波儀經(jīng)腹外壁進(jìn)行妊娠診斷，統(tǒng)計受胎母羊數(shù)，并計算受胎率。TAI的受胎率是指TAI后50～60 d, 確認(rèn)妊娠的母羊數(shù)占試驗?zāi)秆驍?shù)的百分率。

5 應(yīng)用現(xiàn)狀

5.1二次PG注射法 用二次PG注射法誘導(dǎo)本地綿羊同期發(fā)情,結(jié)果發(fā)現(xiàn)同期發(fā)情效果較為理想,達(dá)到82.97%[8]。桑潤滋等[9]研究發(fā)現(xiàn)，河北細(xì)毛羊在第1次PG處理后，經(jīng)過24～36 h,羊同期發(fā)情率為44.8%～75%；第2次PG處理后，羊同期發(fā)情率為86.2%～92.5%。

5.2P4-PG-eCG法 張長興等[10]為了評估以P4-PG-eCG為基礎(chǔ)的湖羊定時人工授精技術(shù)在規(guī)?；驁鲋械膽?yīng)用效果。試驗期TAI的受胎率達(dá)到82.0%(3874/4724)，累計TAI受胎母羊數(shù)和TAI后出現(xiàn)第一次返情并輸精而受胎的母羊數(shù)，總受胎率達(dá)到91.7%(4332/4724)。季節(jié)因素與21 d不返情率相互獨立(P>0.05)，季節(jié)因素對返情率無顯著影響，而與TAI受胎率(P<0.01)和總受胎率(P<0.01)存在極顯著的關(guān)聯(lián)性，即發(fā)情季節(jié)TAI受胎率及總受胎率均高于乏情季節(jié)，分別為85.6%vs81.4%和94.4%vs91.2%。

5.3CIDR+孕馬血清促性腺激素(PMSG)+PG法 采用CIDR+PG+PMSG法對湖羊和小尾寒做同期發(fā)情處理,研究其同期性和人工授精效果。在同期發(fā)情處理并撤栓后,湖羊組和小尾寒羊組的發(fā)情率分別為88%和87%[11]。

5.4輸精技術(shù) 定時輸精技術(shù)可有效提高優(yōu)良種羊的利用率，同時提高母羊的繁殖效力。對發(fā)情的母羊分別采用不同的輸精方法及輸精時間，效果最好的是采用子宮角輸精法，最佳輸精時間為撤栓處理后的48 h[12]。

本文綜述了湖羊定時人工授精技術(shù)的基本概念、操作要點及應(yīng)用效果等，湖羊的同期發(fā)情研究主要是針對激素的種類和處理方法，一般不單獨使用孕酮陰道栓，常常配合溶解黃體、促進(jìn)卵泡發(fā)育及排卵激素來提高同期效果。同期發(fā)情的輔助激素包括孕酮激素、PMSG、PG、FSH、GnRH等，其中PMSG使用率最高。陰道栓和二次PG法的發(fā)情效果均好于一次PG法，陰道栓中的進(jìn)口硅膠栓要好于國產(chǎn)硅膠栓和海綿栓。考慮到成本和發(fā)情效果，同期發(fā)情處理方法中CIDR+PMSG和二次PG較好，且較穩(wěn)定[13]。定時人工授精技術(shù)，最佳的輸精方式是子宮角輸精，但是操作繁瑣,成本高，易對子宮角造成損傷，規(guī)模化羊場普遍使用的子宮頸口輸精，易操作、效率高。無論是子宮頸口輸精還是子宮角輸精，使用鮮精輸精的受胎率都很高，最佳輸精時間范圍為發(fā)情后的48 h內(nèi)，建議隔8 h復(fù)配1次。根據(jù)全國畜禽遺傳資源改良計劃(2021-2025)的要求,在規(guī)模羊場積極推廣定時人工授精技術(shù)等繁殖技術(shù)，有利于推動湖羊種業(yè)自主創(chuàng)新和技術(shù)進(jìn)步，提高遺傳改良效果，助推湖羊產(chǎn)業(yè)向高效化、數(shù)字化、良種化方向發(fā)展。