趙 棟

(滁州市食品藥品檢驗中心,安徽 滁州 239000)

現(xiàn)在國內(nèi)生產(chǎn)甲狀腺片是用豬、牛等的甲狀腺體作為原料,經(jīng)過一系列的生產(chǎn)工藝制成。臨床用于各種原因引起的甲狀腺功能減退癥[1]。本文使用鏈霉蛋白酶(P5147)-HPLC法檢驗其中的T3和T4含量及含量均勻度[2]。并對樣品進行質(zhì)量評價,從質(zhì)量方面考察臨床上治療效果差異[3]。本實驗在四年中檢驗了3家企業(yè)36批甲狀腺片樣品。

1 儀器、藥品與試劑

1.1 儀器

LC-20AD型高效液相色譜儀(SPD-20A檢測器, Labsolutions工作站);HC-3018高速離心機(安徽中科中佳公司);S220型pH計[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司];BT25S型半微量天平(北京賽多利斯);BSA224S分析天平(北京賽多利斯)。

1.2 試藥

甲狀腺片(基本藥物和高風險藥品專項抽驗樣品),T3、T4均來自中國食品藥品檢定研究院;HPLC淋洗劑級乙腈,鏈霉蛋白酶(P5147)、2-巰基-1-甲基咪唑、三(羥甲基)氨基甲烷都產(chǎn)自國藥公司,氨水、磷酸等為國藥集團生產(chǎn)的分析純。

2 方法與結果

2.1 系統(tǒng)適用性

試驗色譜柱:Diamonsil plus C18(250mm×4.6mm,5μm);調(diào)整流動相的比例,最終確定的流動相:水-乙腈-磷酸(700∶300∶5);檢測波長λ=230nm;流速1.0mL/min;進樣量:20μL,柱溫:30℃。在此條件下,T3、T4與相鄰峰分離良好,且峰形尖銳,無雜峰干擾。色譜峰見圖1、2。

圖1 空白液

2.2 重復性和理論

板數(shù)取同一混合對照品溶液連續(xù)進樣5次,T3峰面積RSD=0.2%,T4峰面積RSD=0.1%,左甲狀腺素峰的理論板數(shù)為14000。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品

溶液精密稱取左甲狀腺素對照品和碘塞羅寧對照品置100mL量瓶中,加水-乙腈-濃氨溶液(500∶500∶1)混合溶液50mL,渦旋使溶解,用50%乙腈溶液定容,搖勻,作為對照品儲備液。精密量取5mL,置250mL量瓶中,用還原性緩沖溶液[稱取氯化鈉6.435g,三羥甲基氨基甲烷4.846g和他巴唑5.708g,置1000mL量瓶中,用水溶解并定容,搖勻,用6mol/L鹽酸溶液調(diào)PH值至8.40]稀釋至刻度,搖勻,精密量取5mL,置帶螺帽試管中,精密加入1%磷酸乙腈溶液2mL,振蕩,用一次性針頭過濾器(0.45μm)過濾,取續(xù)慮液,即得。

圖2 甲狀腺片對照

2.3.2 供試品

溶液取甲狀腺片20片,精密稱定,研細,精密稱取適量,置預先充有氮氣的帶螺帽試管中,盡量減少在空氣中暴露的時間,精密加入蛋白水解酶溶液(1mg/mL)5mL,緩緩通入氮氣流5min,蓋上螺帽,搖勻,置帶蓋的水浴中38℃水解28小時(避光,注意確保其分散)后,精密加入1%磷酸乙腈溶液2mL,振蕩,以每分鐘2000轉離心5min,取上清液用微孔濾膜濾過(棄去初濾液1mL),即得供試品溶液。

2.3.3 陰性樣品

溶液的制備為考察試劑的干擾,不加供試品,其它與供試液同法操作,制得空白液。

2.4 樣品測定

按上述方法,四年時間分別測定36批甲狀腺片的含量及含量均勻度,見附圖3、4,結果見表1、2、3。

表1 不同廠家甲狀腺片含量測定結果

圖4 甲狀腺片樣品含量均勻度

3 討論

3.1 質(zhì)量標準提高的臨床意義

甲狀腺片為甲狀腺激素藥,能有效補充患者體內(nèi)缺乏的甲狀腺素(T4)和三碘甲狀腺原氨酸(T3),特別是T3。藥典標準的提高,用有效成分T3、T4作為質(zhì)控的指標,增加T3、T4含量均勻度的檢查,使甲狀腺片的質(zhì)控手段已與左甲狀腺素鈉片(LT4)一致[4],可以更安全、有效的在臨床上使用甲狀腺片。

3.2 統(tǒng)計分析

由表1可見:A、B、C廠甲狀腺片中T3(RSD<6.33%)和T4(RSD<5.88%)含量的批間差異不大。A廠T3、T4總體平均值要略高于B、C廠。因A廠家T4含量比B、C廠略高,T4在體內(nèi)脫碘轉為T3,發(fā)揮治療作用。A、B廠是薄膜衣片,C廠是薄膜衣片和糖衣片,規(guī)格都是40mg,A、B兩廠其產(chǎn)品為兩年的保質(zhì)期,C廠其產(chǎn)品為三年的保質(zhì)期,所有樣品均在保質(zhì)期內(nèi),結果能體現(xiàn)甲狀腺片的質(zhì)量現(xiàn)狀。表2、3可見:運用EXCEL軟件對甲狀腺片的T3、T4含量均勻度數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,根據(jù)t檢驗:雙樣本異方差假設計算結果表明,α<0.05,P>0.05,顯示A、B、C3廠T3、T4含量均勻度差異無統(tǒng)計學意義,結果見表4。

表2 不同廠家T3含量均勻度測定結果

表3 不同廠家T4含量均勻度測定結果

表4 t-檢驗:雙樣本異方差假設

3.3 其他成分

甲狀腺片含量圖譜中除T3、T4外,還有其他峰,可能為豬源蛋白、MIT、rT3及無機碘化合物的吸收峰。