張聚民，卞蘇舒，蘇 鵬，高連軍

(1.杭州市臨安區(qū)畜牧農(nóng)機(jī)發(fā)展中心，杭州 臨安 311300；2.杭州市臨安區(qū)河橋動(dòng)物疫病診療所)

豬對(duì)豬瘟病毒(CSFV)具有較強(qiáng)的易感性[1]，無免疫力的豬群，一旦感染，通常引起大規(guī)模急性爆發(fā)，發(fā)病率和死亡率超過80%，損失十分嚴(yán)重[2]。全面實(shí)施疫苗免疫計(jì)劃，能有效地控制豬瘟的大規(guī)模爆發(fā)流行，但散發(fā)流行依然存在，甚至出現(xiàn)局部爆發(fā)[3]。臨安區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟一直實(shí)行程序化多次免疫，但即使這樣，臨床上慢性感染或非典型性感染也較為常見。在當(dāng)前豬病防控形勢(shì)下，探索豬瘟單針免疫而實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)久保護(hù)在生產(chǎn)上具有重要意義，為此，我們對(duì)斷奶仔豬進(jìn)行豬瘟單針免疫嘗試，并測(cè)定其不同日齡免疫抗體水平，驗(yàn)證單針免疫的可行性。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物 選擇臨安區(qū)某豬場(chǎng)，該場(chǎng)生產(chǎn)整體穩(wěn)定，豬瘟免疫長(zhǎng)期使用國(guó)產(chǎn)同一品牌豬瘟細(xì)胞弱毒苗，近兩年該場(chǎng)商品豬豬瘟二免抗體合格率80%以上，符合國(guó)家免疫要求，保育豬偶見持續(xù)慢性腹瀉致僵現(xiàn)象。本試驗(yàn)豬選取父本為同一杜洛克公豬，母本為經(jīng)產(chǎn)長(zhǎng)加母豬，于2021年8月9日所產(chǎn)的4窩健康仔豬共52頭作為試驗(yàn)基礎(chǔ)群。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì) 25日齡斷奶，30日齡按公母比例相近，體重接近的原則從基礎(chǔ)群選取仔豬40頭分成兩組，試驗(yàn)組和對(duì)照組各20頭(表1)，空腹稱重記錄，采集血樣2.5 mL/頭，而后試驗(yàn)組和對(duì)照組分別注射1頭份豬瘟弱毒苗(A)和2頭份豬瘟弱毒苗(B)。于60日齡采血(2.5 mL/份)檢測(cè)，采血后試驗(yàn)組注射生理鹽水2 mL，對(duì)照組注射豬瘟疫苗(B)4頭份(2 mL)；于90日齡和180日齡分別采血檢測(cè)，每份2.5 mL，并在180日齡兩組空腹秤重。

試驗(yàn)組豬瘟疫苗(A)：江蘇勃林格殷格翰生物制品有限公司生產(chǎn)，獸藥生字101597550批號(hào)FC2020002，(C株，PK/WRL傳代細(xì)胞源)。

對(duì)照組豬瘟疫苗(B): 某實(shí)業(yè)股份有限公司生物藥廠生產(chǎn)，獸藥生字140401115批號(hào)20201217，(細(xì)胞源)。

表1 試驗(yàn)分組

1.3試驗(yàn)環(huán)境及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)豬在同一育肥舍飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間其飼喂方式、飼料種類、飼養(yǎng)密度、溫度、通風(fēng)等條件完全一致，每欄10頭，密度0.83頭/m2，溫度在26-30 ℃之間，通風(fēng)良好；保育料喂至90日齡，而后改用育肥料至180日齡；試驗(yàn)期間兩組皆偶有腹瀉、咳嗽，采用口服或注射方式藥物治療，預(yù)后良好；除豬瘟免疫外其它免疫完全一致，其主要免疫有口蹄疫、偽狂犬、圓環(huán)病毒等。

1.4血樣采集及免疫抗體檢測(cè) 仔豬分別于30、60、90、180日齡時(shí)，用7 #采血器采集全血2.5 mL，離心分離血清，用ELISA方法檢測(cè)豬瘟抗體。

豬瘟抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性PI≥0.4，陰性PI<0.4。

豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒：北京金諾百泰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20210208。

1.5統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel軟件整理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05為差異顯著。*代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001。

2 結(jié)果與分析

2.1免疫后仔豬體重變化監(jiān)測(cè)與分析 30日齡的仔豬免疫前稱重，并于免疫后150 d(即為180日齡)時(shí)再次稱重，然后進(jìn)行比較。試驗(yàn)結(jié)果表明試驗(yàn)組與對(duì)照組仔豬在30日齡和180日齡的平均體重均沒有顯著性差異(P>0.05)(圖1)。通過對(duì)兩組仔豬體重的變異系數(shù)分析顯示，在180日齡時(shí)試驗(yàn)組仔豬體重的變異系數(shù)小于對(duì)照組，說明經(jīng)過免疫后試驗(yàn)組仔豬群體體重均一度更高(表2)。

圖1 不同日齡仔豬體重差異性分析

表2 不同日齡仔豬體重均勻度分析

2.2仔豬免疫后豬瘟抗體水平

2.2.1母源抗體 免疫前即30日齡時(shí)試驗(yàn)組與對(duì)照組仔豬豬瘟母源抗體PI值均小于0.4，抗體水平檢測(cè)呈陰性，且試驗(yàn)組與對(duì)照組不存在顯著性差異(P>0.05)，故試驗(yàn)?zāi)冈纯贵w干擾差異性影響較小；

2.2.2免疫抗體水平 對(duì)兩組仔豬進(jìn)行豬瘟抗體水平的檢測(cè),結(jié)果表明在免疫后的各階段試驗(yàn)組與對(duì)照組仔豬豬瘟抗體PI值均大于0.4，說明抗體水平檢測(cè)皆呈陽(yáng)性，但試驗(yàn)組抗體上升更快，高位平穩(wěn)維持時(shí)間更長(zhǎng)，且抗體平均水平試驗(yàn)組均明顯高于對(duì)照組(圖2)。同時(shí)在60日齡和90日齡時(shí)試驗(yàn)組抗體水平顯著性高于對(duì)照組(P<0.001)；但在180日齡時(shí)試驗(yàn)組與對(duì)照組抗體水平不存在顯著性差異(P>0.05)(圖3)。

圖2 不同免疫組仔豬豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

圖3 不同免疫組仔豬豬瘟抗體平均值加減標(biāo)準(zhǔn)差

2.2.3抗體的合格率和均一度 對(duì)兩組仔豬免疫后抗體的合格率和均一度進(jìn)行分析，結(jié)果表明試驗(yàn)組仔豬免疫后不同日齡抗體合格率均為100%，而對(duì)照組仔豬在60、90和180日齡時(shí)抗體合格率分別為80%、100%和90%；此外試驗(yàn)組仔豬在60、90和180日齡時(shí)群體抗體水平的變異系數(shù)均明顯小于對(duì)照組，從而說明試驗(yàn)組仔豬免疫后整體的抗體水平均一度較好，均維持在較高水平(表3)。

表3 不同免疫組仔豬豬瘟抗體合格率及均勻度

2.3經(jīng)濟(jì)效益分析 從表4可見綜合人工成本因素，試驗(yàn)組相比對(duì)照組節(jié)約成本1.2元/頭，對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)而言使用單針免疫方法有較好地節(jié)約人工成本的效果。

表4 疫苗使用成本分析

3 討論

豬瘟是影響生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要疫病，預(yù)防該疾病的有效措施是接種疫苗，而抗體監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)疫苗接種效果的重要手段之一[4]。本研究結(jié)果顯示仔豬30日齡時(shí)豬瘟抗體水平即為免疫前仔豬的母源抗體的水平，試驗(yàn)組和對(duì)照組合格率均為0，說明在30日齡時(shí)仔豬的母源抗體基本耗盡，不存在對(duì)本試驗(yàn)產(chǎn)生干擾。試驗(yàn)組與對(duì)照組免疫后豬瘟抗體合格率均高于國(guó)家要求的70%合格率，試驗(yàn)組單針免疫在60日齡時(shí)就可以使整體的合格率達(dá)到100%，且群體有很高的抗體整齊度。而對(duì)照組在60日齡時(shí)豬瘟抗體合格率為80%，未達(dá)到涂長(zhǎng)春[5]提出的豬瘟群體免疫保護(hù)率高于85%時(shí)才能避免豬瘟發(fā)生的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組二次免疫之后即仔豬90日齡和180日齡抗體合格率分別為100%和90%，說明二次免疫與一次免疫相比,免疫效果有了明顯的提升。而對(duì)于試驗(yàn)組的免疫疫苗，一次免疫后豬瘟抗體就可以達(dá)到理想的水平，且群體的抗體水平整齊度較高，說明對(duì)于豬瘟的防控來說，疫苗的選擇非常重要，這與李滿等[6]的研究結(jié)論一致。

本研究表明,選擇合適的豬瘟疫苗對(duì)當(dāng)前的豬場(chǎng)僅僅實(shí)施一次免疫即可使免疫豬群獲得較高和整齊的免疫抗體水平,有效地防控豬瘟疫病的發(fā)生，同時(shí)也可減少免疫次數(shù)，降低人力成本和生物安全風(fēng)險(xiǎn)，這在生產(chǎn)實(shí)際中具有較大的推廣意義。