張海林

蟲媒病毒(Arbovirus)是指一些通過吸血節(jié)肢動物叮咬敏感脊椎動物而傳播疾病的一群病毒，傳播媒介包括蚊、蜱、蠓、白蛉、虻、蚋、螨等，尤以蚊和蜱最為重要。根據(jù)美國蟲媒病毒委員會2002年報(bào)告[1]，在國際蟲媒病毒中心登記的蟲媒病毒有537種，其中約135種可引起人、獸疾病。蟲媒病毒至少隸屬 20個(gè)病毒科，其中，與人、獸疾病關(guān)系緊密的蟲媒病毒主要分布在黃病毒科、披膜病毒科、泛布尼亞病毒科、白纖病毒科、內(nèi)羅病毒科和呼腸孤病毒科[2]。近20年，登革熱、基孔肯雅熱、西尼羅熱、寨卡病毒病在全球肆虐，新的蟲媒病毒病也不斷被發(fā)現(xiàn)[3]，成為全球性公共衛(wèi)生問題，引起國際社會的高度關(guān)注[4]。我國主要存在流行性乙型腦炎(乙腦)、登革熱、森林腦炎、克里米亞-剛果出血熱(我國稱新疆出血熱)和發(fā)熱伴血小板減少綜合征等蟲媒病毒病流行[5-7]，還從新疆蚊蟲分離到西尼羅病毒[7]，貴州和江西蚊蟲分離到寨卡病毒[8]。1980和1990年代，云南曾在乙腦、登革、森林腦炎、基孔肯雅和辛德畢斯等病毒的發(fā)現(xiàn)、證實(shí)及其宿主媒介以及病毒生物學(xué)特性和血清學(xué)調(diào)查研究等方面取得了豐碩成果[9]。近20年(2001-2020年)云南省蟲媒病毒及其相關(guān)疾病調(diào)查研究又取得了較大進(jìn)展，不僅闡明了上述重要病毒病的病原學(xué)及流行病學(xué)特征，還相繼發(fā)現(xiàn)了一些能導(dǎo)致人、獸感染的蟲媒病毒(表1)，現(xiàn)綜述如下。

1 黃病毒科(Flaviviridae)黃病毒屬(Flavivirus)

1.1 乙腦病毒(Japanese encephalitis virus, JEV) 乙腦為一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的急性傳染病，對人、畜(豬、馬等)健康危害較大，主要分布于亞洲地區(qū)。云南省1952年開始有乙腦疫情報(bào)告，至今每年均有乙腦病例發(fā)生。1976-2019年云南省共報(bào)告乙腦病例32 216例，死亡3 448例，病死率為10.70%。其中1970、1980、1990、2000和2010年代發(fā)病率(病死率)依次為5.29/10萬(14.33%)、3.36/10萬(13.49%)、1.88/10萬(8.56%)、1.13/10萬(5.00%)、0.36/10萬(4.95%)，均呈下降趨勢，尤其是2008年乙腦疫苗納入兒童免疫規(guī)劃以來，發(fā)病率大幅下降(2018年為0.17/10萬)。云南所有州(市)和幾乎所有縣(區(qū)、市)均有乙腦流行，高發(fā)地區(qū)為西南和東北地區(qū)的西雙版納、普洱、昭通、德宏和文山州(市)，主要流行月份為6-9月，主要發(fā)病人群為散居兒童、學(xué)生和農(nóng)民，且成年人發(fā)病數(shù)有上升趨勢。1977—2020年從云南不同地區(qū)乙腦病人、蚊、蠓、豬、鳥類、蝙蝠分離到200多株JEV[9-23]。攜帶JEV的蚊種至少包括庫蚊9種、伊蚊4種、按蚊3種、阿蚊1種和曼蚊1種，三帶喙庫蚊(Culextriaeniorhynchus)為主要傳播媒介。臺灣蠛蠓(Lasioheleataiwana)和尖喙庫蠓(Culicoidesschultzei)等蠓類也可傳播JEV[9, 24]。

JEV分為5個(gè)基因型(G-I、II、III、Ⅳ和V)，我國流行G-I、G-III和G-V[5-6]。云南流行G-I和G-III，2005年之前主要為G-III，2005-2009年主要為G-I，2010年以來流行株均為G-I[15-17, 20-25]。G-I最早于1977年和1982年分離自云南省庫蚊[25-26]，該基因型可能起源于云南及相鄰東南亞國家，不同年代和地域的JEV存在明顯差異并具有遺傳多樣性，但有關(guān)病毒毒力和抗原性的關(guān)鍵位點(diǎn)無明顯改變[15, 22, 25-26]。

三帶喙庫蚊實(shí)驗(yàn)感染乙腦減毒活疫苗SA14-14-2株的研究表明，該蚊不能經(jīng)口感染該疫苗株，即使經(jīng)蚊蟲胸腔接種感染，疫苗株分子特征也未發(fā)生改變，無返祖現(xiàn)象，證實(shí)該疫苗廣泛使用具有安全性[27-29]。

表1 2001-2020年云南省節(jié)肢動物、家養(yǎng)和野生動物及病人標(biāo)本分離的蟲媒病毒種類Tab.1 Species of arboviruses isolated from arthropods, domestic and wild animals, and patient specimens in Yunnan Province, China, from 2001 to 2020

1.2 登革病毒(Dengue virus, DENV) 登革熱是由4種血清型DENV引起的急性傳染病，經(jīng)伊蚊傳播，廣泛流行于全球熱帶和亞熱帶地區(qū)。1970和1980年代，云南邊境地區(qū)曾發(fā)生過登革熱流行[9]；2000年以來，云南每年都有來自相鄰東南亞國家的登革熱輸入性病例；2008年德宏州和臨滄市首次暴發(fā)輸入性登革熱疫情，局部地區(qū)發(fā)生零星本地病例[30-31]。2013年德宏州瑞麗市及西雙版納州景洪市和勐臘縣、2015年臨滄市耿馬縣、2019年紅河州河口縣和普洱市孟連縣分別首次暴發(fā)本地登革熱疫情[32]；瑞麗市2013-2020年、景洪市和勐臘縣2013-2019年、耿馬縣2015-2019年每年均發(fā)生登革熱本地流行，其他州、市、縣僅為輸入性病例。2013-2020年云南省共報(bào)告登革熱15 971例(輸入性病例4 918例，本地病例11 053例)，其中，西雙版納(8 478)、德宏(5 223)和臨滄(1 310)市(州)發(fā)病數(shù)占總病例數(shù)93.99%(15 011/15 971)[32]。主要流行月份為7-11月，主要發(fā)病人群為商業(yè)服務(wù)者、家務(wù)及待業(yè)者和農(nóng)民。2013年西雙版納州發(fā)生70例成年重癥登革熱病例，臨床表現(xiàn)包括嚴(yán)重出血(如大量陰道出血和消化道出血)、嚴(yán)重血漿滲漏(如胸腔積液、腹水或低蛋白血癥)和器官受累(如心肌炎和肺損傷)，其中21例最終惡化為休克[33]，隨后每年均有重癥病例發(fā)生。2020-2021年云南登革熱發(fā)病地區(qū)和發(fā)病數(shù)顯著下降，與新型冠狀病毒肺炎邊境管制，登革熱輸入病例減少以及地區(qū)間人群流動性降低有關(guān)[32,34-35]。埃及伊蚊(Aedesaegypti)和白紋伊蚊(Ae.albopictus)為主要傳播媒介，前者為輸入性蚊種，主要分布在中國-緬甸(中緬)和中國-老撾(中老)邊境地區(qū)，后者在云南省廣泛分布[32]。

2013-2020年DENV分離及全基因組或E基因序列分析表明，云南存在所有4種血清型及其至少8種基因型的DENV流行，其中DENV-1為G-I和G-III，DENV-2為AG-1、CG和AMG，DENV-3為G-I和G-II，DENV-4為G-I[34-41]。其中，瑞麗市、景洪市和勐臘縣存在4種血清型流行，以DENV-1、DENV-2和DENV-3為主，不同年份存在差異；耿馬、河口和孟連縣主要流行DENV-1。所有流行株均與東南亞國家流行株具有較高的同源性和較近的進(jìn)化關(guān)系，來自緬甸、老撾、泰國或越南的登革熱輸入性病例是導(dǎo)致云南省登革熱本地流行的主要原因[32-42]。云南自然界中可能不存在DENV全年和跨年傳播循環(huán)，登革熱在云南仍屬輸入性疾病[32,34]。2016年普洱市和西雙版納白紋伊蚊和騷擾阿蚊(ArmigeresSubalbatus)混合研磨液中檢測到3株DENV E基因序列[23]。

1.3 寨卡病毒(Zika virus, ZIKV) ZIKV起初被認(rèn)為是一種溫和病原體，僅流行于非洲局部地區(qū)。然而，2015-2016年ZIKV亞洲基因型在美洲引起了大規(guī)模的疫情暴發(fā)并擴(kuò)散至亞洲，患者主要表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)疾病及新生兒小頭畸形等。我國僅有輸入性病例和從蚊蟲中分離到ZIKV的報(bào)道[8]。從2015年采自瑞麗市本地發(fā)熱病人血清中分離到1株ZIKV，基因組全長10 804 bp[43]；從2016年采自普洱市和西雙版納白紋伊蚊和騷擾阿蚊混合研磨液中檢測到2株ZIKV NS3基因序列(ZIKV-China/YN2016-1和 ZIKV-China/YN2016-2)[23]；2019年昆明市1例輸入性病例中檢測到ZIKV[44]，同源性和進(jìn)化分析證實(shí)，上述分離株均為亞洲基因型(Asian genotype)并與緬甸和泰國流行株進(jìn)化關(guān)系較近。這些調(diào)查表明，2015-2016年云南局部地區(qū)發(fā)熱病人中存在ZIKV感染的散發(fā)病例。ZIKV垂直傳播研究表明，瑞麗市姐告開發(fā)區(qū)和耿馬縣孟定鎮(zhèn)的埃及伊蚊均具有ZIKV感染和垂直傳播能力[45]。

1.4 坦布蘇病毒(Tembusu virus, TMUV) TMUV可感染雞、鴨、鵝等多種家禽發(fā)病，病名為鴨坦布蘇病毒病，又名鴨產(chǎn)蛋下降綜合征或鴨傳染性卵巢炎。2012年云南省在中國-老撾和中國-緬甸邊境地區(qū)三帶喙庫蚊中分離到2株TMUV(YN12115和YN12193株)[19, 46]，病毒株基因組與TMUV原型株(MM1775)等的系統(tǒng)發(fā)育分析表明，TMUV分為東南亞進(jìn)化群和中國進(jìn)化群，我國的TMUV具有長距離和廣泛傳播的特點(diǎn)[46]。

1.5 庫蚊黃病毒—廣平病毒(Quang Binh virus, QBV) 2012年西雙版納州勐?？h三帶喙庫蚊中分離到2株QBV(BNDL1205和BNDL1227)，均能引起C6/36細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE)，而不致BHK-21 細(xì)胞CPE，與分離自越南的QBV原型株VN180核苷酸同源性較高并處在同一進(jìn)化分支，而與既往國內(nèi)外分離的18株蚊蟲黃病毒核苷酸差異較大[47]。同期，云南多地三帶喙庫蚊和中華按蚊(Anophelessinensis)也分離到12株庫蚊黃病毒(Culexflaviviruses, CxFV)[48-50]，代表株LSFlaviV-A20-09的基因組全長10 865 bp，開放閱讀框?yàn)?0 080 bp，編碼3360-aa多聚蛋白，與VN180株同為一個(gè)進(jìn)化分支，核苷酸和氨基酸同源性分別為83.0%和93.8%[48]。

1.6 伊蚊黃病毒—勐海黃病毒和西雙版納黃病毒 云南省白紋伊蚊多次分離到伊蚊黃病毒(Aedesflaviviruses, AeFV)[49-50]。2010年西雙版納白紋伊蚊中分離到的2株黃病毒之間及其與以往蚊蟲黃病毒間存在較大差異，分別被命名為西雙版納黃病毒(Xishuangbanna flavivirus, XFV)和勐海黃病毒(Menghai flavivirus, MFV)[51-52]。

2 披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒屬(Alphavirus)

2.1 辛德畢斯病毒(Sindbis virus, SINV) 該病毒可引起人類疾病，臨床上主要為發(fā)熱、皮疹、頭痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛等，在非洲和歐洲均有病例報(bào)告。SINV為甲病毒屬代表株，可分為3個(gè)基因型，云南存在2種基因型。云南最早于1986年從景洪市發(fā)熱患者血清分離到SINV(YN87448)[9, 53]，1991年從大理州洱源縣腦炎患者也分離到1株SINV(Sindbis-IMB)[54]，全基因組序列由11 717個(gè)堿基組成，編碼3 773個(gè)氨基酸，均屬古北區(qū)-埃塞俄比亞型(Paleoarctic-Ethiopian genotype, PEG)。2005年勐?？h三帶喙庫蚊SINV分離株(MX10)和2013年德宏州芒市牛、羊養(yǎng)殖場蠓類SINV分離株(YN222)均為為澳大利亞東方型(Oriental-Australian genotype, OAG)[12, 55-56]。

2.2 基孔肯雅病毒(Chikungunya virus, CHIKV) 基孔肯雅熱是由CHIKV引起的急性傳染病，主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛/關(guān)節(jié)炎、皮疹等，經(jīng)伊蚊傳播，主要流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)。 1980年代，云南局部地區(qū)曾發(fā)生過CHIKV流行[32]。2018-2019年昆明市發(fā)生12例來自緬甸的基孔肯雅熱輸入病例，其中10例檢測到CHIKV東/中/南非基因型(East/Central/South Africa genotype，ECSA)[57]。2019年9-11月瑞麗市暴發(fā)基孔肯雅熱本地疫情，共確診121例，其中本地病例98例，緬甸輸入性病例23例，本地病例包括2例孕婦及其母嬰傳播的3例新生兒病例(2例雙胞胎男嬰和1例女嬰均為出生后第4～5 d發(fā)病，1周后痊愈)[58-59]?；颊叱l(fā)熱外，關(guān)節(jié)痛較常見(占90.08%)，其次為頭痛(44.63%)、皮疹(33.06%)，少數(shù)病例有出血現(xiàn)象，主要發(fā)生在瑞麗市主城區(qū)、勐卯鎮(zhèn)和姐告開發(fā)區(qū)[58]。從患者血清分離到37株CHIKV，全基因組序列分析表明，均為ECSA基因型印度洋進(jìn)化群(ECSA-IOL)[60]，E1 A226V位點(diǎn)未發(fā)生變異，提示白紋伊蚊對分離株可能不敏感。此為云南首次報(bào)告基孔肯雅熱本地暴發(fā)疫情，來自緬甸的輸入性病例是引起本地流行的主要原因。2018年從普洱市等地的3批埃及伊蚊和2批三帶喙庫蚊中檢測到5株CHIKV的E1(1 320 bp)和E2(1 269 bp)基因序列，同源性和進(jìn)化分析為ECSA-IOL，與印度株和斯里蘭卡株同源性較高，均不存在E1 A226V位點(diǎn)突變[61]，表明該地區(qū)當(dāng)年存在CHIKV隱匿性流行。

2.3 蓋塔病毒(Getah virus, GETV) GETV可引起豬、馬等家畜嚴(yán)重疾病，廣泛分布于東亞、東南亞和澳大利亞等地區(qū)。2012年經(jīng)分子生物學(xué)鑒定證實(shí)，1998年云南河口縣白紋伊蚊分離的YN08病毒為GETV，此為我國繼1964年首次分離到GETV(M1)之后再次分離到GETV，也是云南最早分離的GETV[62]。2005-2019年在怒江州瀘水縣、保山市騰沖市、普洱市鎮(zhèn)源和江城縣、迪慶州維西縣以及梁河、瑞麗、勐海和勐臘縣(市)蚊蟲和師宗縣庫蠓中相繼分離到GETV[11, 13-16, 19, 50, 62]。除庫蠓分離到1株外，其余均分離自蚊蟲，至少有4屬7種蚊攜帶GETV，包括庫蚊4種(三帶喙庫蚊、偽雜鱗庫蚊Cx.pseudovishnui、棕頭庫蚊Cx.fuscocephalus和環(huán)帶庫蚊Cx.annulus)、阿蚊1種(騷擾阿蚊)、按蚊1種(中華按蚊)和伊蚊1種(白紋伊蚊)，三帶喙庫蚊和騷擾阿蚊為主要傳播媒介。曾從普洱市瀾滄縣以及景洪市和勐臘縣人及恒河猴血清中檢測到GETV抗體[9]，江城縣豬、牛感染率均較高且中和抗體滴度高達(dá)1∶640～1∶2 560[63]。GETV分為4個(gè)進(jìn)化種群(Group I、II、III和IV)，其中Group I和II分別為馬來西亞和日本早期流行株(1955-1956年)；Group III幾乎包括1960年代以來我國及其他國家所有分離株；Group IV僅于近期在云南省和俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)被發(fā)現(xiàn)[64]?？臻g動力學(xué)研究認(rèn)為，馬來西亞、日本和中國云南省是3個(gè)主要的GETV播散來源，而云南是GETV遷徙事件發(fā)起的重要地區(qū)，主要向河北、上海、甘肅、四川、貴州、湖南、湖北等省(市)以及俄羅斯、印度傳播，云南是維持GETV在中國內(nèi)陸省份的循環(huán)源泉地區(qū)[65]。

3 泛布尼亞病毒科(Peribunyaviridae)

3.1 巴泰病毒(Batai Orthobunyavirus, BATV) BATV可引起人、畜感染，在東非由該病毒基因重配后出現(xiàn)的變異株(Ngari病毒)引起發(fā)熱性疾病暴發(fā)流行，導(dǎo)致成千上萬人患病。1998年從普洱市瀾滄縣菲律賓按蚊(An.philippinensis)分離到1株能引起小鼠發(fā)病死亡以及BHK-21和Vero細(xì)胞CPE的布尼亞病毒(LC92-4)[10, 53]，全基因組序列測定和分析，證實(shí)該分離株為BATV[66]，此為我國首次分離到該病毒。LC92-4的L、M和S基因核苷酸序列全長分別為6 860、4 371和947核苷酸，并分別編碼2 239、1 435和336氨基酸。西雙版納和德宏州發(fā)熱患者血清中檢測到該病毒抗體[9, 67]，人群中可能存在該病毒感染。

3.2 阿卡斑病毒(Akabane Orthobunyavirus, AKAV) AKAV可引起牛、綿羊和山羊流產(chǎn)、早產(chǎn)以及新生牛、羊畸形和先天性關(guān)節(jié)彎曲和積水性無腦癥等疾病，主要分布在亞洲、非洲和澳大利亞等。2010年從瑞麗市三帶喙庫蚊和迷走按蚊(An.Vagus)分離到能引起B(yǎng)HK-21細(xì)胞CPE和乳鼠發(fā)病死亡的2株AKAV(DHL10M110和DHL10M117)[68]，此為云南首次分離到該病毒，也是國內(nèi)首次經(jīng)分子生物學(xué)鑒定證實(shí)的AKAV。新分離株L、M和S基因核苷酸序列全長分別為6 869 bp、4 309 bp和856 bp，其中開放讀碼框(Open reading frame)核苷酸序列依次為6 756 bp、4 206 bp和702 bp，并分別編碼2 252、1 402和234氨基酸[69]。DHL10M110和DHL10M117與日本、韓國和臺灣的AKAV分離株均具有較高的同源性和較近的進(jìn)化關(guān)系，均屬亞洲進(jìn)化群[68-69]。隨后，在曲靖市師宗縣和芒市等地的蟲媒病毒監(jiān)測哨兵山羊和牛血液標(biāo)本中多次分離到AKAV[70-71]，基因序列分析表明，這些分離株與瑞麗DHL10M110株及日本等亞洲流行株同屬亞洲進(jìn)化群[68-69]。

3.3 曼扎尼拉病毒(Manzanilla Orthobunyavirus, ManV) 該病毒可感染猴和人，但致病性不明。2010年瑞麗市三帶喙庫蚊中分離到1株能引起B(yǎng)HK-21細(xì)胞CPE和乳鼠發(fā)病死亡的布尼亞病毒(DHL10M107)[72]，其L、M和S片段全基因序列與GenBank中僅有的4株ManV(VN04-2108、TRVL3587、SA An 4165、AV 782)同在一個(gè)分支，但與越南的庫蚊分離株VN04-2108親緣關(guān)系最近。DHL10M107株L、M和S片段與VN04-2108的核苷酸(氨基酸)同源性分別為96.3%(99.5%)、97.7%(99.2%)和98.7%(100.0%)，證實(shí)為ManV[72]，此為我國首次分得該病毒。云南100份不明原因發(fā)熱病人血清中ManV IgG抗體陽性4份(1∶20～1∶40)，提示人群中可能存在該病毒感染。

3.4 肯科伊病毒(Kaeng Khoi orthobunyavirus，KKV) 該病毒可感染蝙蝠和人，但致病性不明。2012年從中緬邊境畹町地區(qū)和中老邊境勐臘縣瑤區(qū)鄉(xiāng)巖洞棕果蝠(Rousettusleschenaulti)體表采集的吸血節(jié)肢動物蛛蠅(Eucampsipodasundaica)中分離到2株KKV(WDBC1210和MLBC1215)[73-74]，此為首次從蝙蝠寄生蠅分離到KKV，亦為我國首次分離到該病毒。這兩株病毒均可引起B(yǎng)HK-21、Vero-E6細(xì)胞CPE和小鼠發(fā)病死亡，病毒顆粒呈球形，直徑70 nm，S、M和L片段編碼區(qū)序列長度分別為975 bp、4 568 bp和6 866 bp，均與分離自泰國的原型株P(guān)SC-19處于同一進(jìn)化分支，WDBC1210與PSC-19株S、M、L片段核苷酸同源性分別為96.9%、94.1%和95.2%，MLBC1215與PSC-19株S、M、L片段核苷酸(氨基酸)同源性分別為97.9%(98.7%)、94.4%(96.5%)和95.3%(98.4%)。當(dāng)?shù)?3份人血清中MLBC1215病毒IgG抗體陽性9份(1∶20～1∶80)，人群中可能存在該病毒感染。

4 呼腸孤病毒科(Reoviridae)

4.1 東南亞十二節(jié)段RNA病毒屬(South East Asian dodeca RNA virus,Seadornavirus)

4.1.1 版納病毒(Banna virus，BAV) 人、豬、牛中該病毒感染較普遍，可能是發(fā)熱性疾病和腦炎的病原體之一。BAV于1980年代首次分離自西雙版納發(fā)熱患者、腦炎患者、三帶喙庫蚊等多種蚊蟲、豬和牛血清中，當(dāng)時(shí)認(rèn)為可能是環(huán)狀病毒屬新成員，2000年這些分離株被命名為BAV[2, 75-76]。2005-2019年勐臘、勐海和江城縣以及怒江州、紅河州彌勒縣、文山州文山縣、大理州南澗縣、楚雄州元謀和武定縣蚊蟲相繼分離到BAV[11-12, 18-19, 49-50, 77]，三帶喙庫蚊和中華按蚊可能是主要媒介。還從師宗縣庫蠓分離到2株BAV，牛、豬血清中檢測到BAV中和抗體(1∶20～1∶320)[78]。BAV基因組全長約21 000 bp，為12節(jié)段雙鏈RNA病毒，各基因節(jié)段長度為759～3 747 bp不等。第12節(jié)段系統(tǒng)進(jìn)化分析可將BAV分為2個(gè)主要基因型，中國和越南分離株組成A型，印度尼西亞分離株組成B型。A型又進(jìn)一步可分為主要由北方株構(gòu)成的A1亞型(參考株02VN078b，2010年越南分離株)和主要由南方株構(gòu)成的A2亞型(參考株BAV_ch，1987年西雙版納分離株)，具有明顯南北差異的地域分布特征[79]。西雙版納、德宏、昭通和普洱市人群該病毒IgG抗體陽性率為3.8%(61/1 622)，滴度為1∶80～1∶640[49]。

4.1.2 卡地皮諾病毒(Kadipirovirus，KDV) 2006年從采自怒江州的三帶喙庫蚊、中華按蚊和騷擾阿蚊分離到5株該病毒，均能在C6/36細(xì)胞產(chǎn)生CPE，而在BHK-21細(xì)胞不產(chǎn)生CPE。病毒顆粒呈球形，直徑約70 nm，無包膜、表面存在明顯刺狀突起，為12節(jié)段雙鏈RNA病毒，基因組第12節(jié)段全長758 nt，與KDV原型株JKT-7075的同源性為90%，遺傳進(jìn)化分析顯示這5株病毒均為KDV[11, 80]。此為在印度尼西亞以外首次分離到該病毒。

4.1.3 芒市病毒(Mangshivirus, MSV) 2013年從芒市三帶喙庫蚊分離到1株病毒(DH13M041)，該分離株可引起C6/36細(xì)胞CPE，未能引起B(yǎng)HK-21和Vero細(xì)胞CPE，與BAV和Balaton virus同源性最近但又存在較大差異，提示為新型Seadornavirus，稱為芒市病毒[81]。2019年景洪市蟲媒病毒監(jiān)測哨兵牛血液中分得1株致C6/36細(xì)胞CPE的病毒(V301/YNJH/2019)，其與MSV(DH13M041)親緣關(guān)系最近，核苷酸序列相似度在97.4%(Seg-9)～98.5%(Seg-2)之間，氨基酸序列相似度在96.4%(VP9)～98.4%(VP2)之間，證實(shí)為MSV[82]。在監(jiān)測期第11～17周哨兵牛血液中可檢測到MSV核酸，第13～24周檢測到特異性中和抗體，第16～18周為高峰(1∶226)，牛是MSV易感動物。

4.2 環(huán)狀病毒屬(Orbivirus)

4.2.1 藍(lán)舌病病毒(Bluetongue virus，BTV) BTV為環(huán)狀病毒屬代表種，是引起反芻動物(綿羊、山羊和牛)嚴(yán)重傳染病藍(lán)舌病的病原，庫蠓為主要傳播媒介。我國1979年首次在曲靖市師宗縣從庫蠓中分離到BTV，2014-2016年師宗縣45只監(jiān)控黃牛和山羊中有16只感染BTV，從其中7只動物中分離到該病毒，并發(fā)現(xiàn)該縣長期存在多種血清型BTV的流行[83]。BTV在云南省廣泛分布，2019年景洪市和普洱市西盟縣牛血清和庫蠓中也能檢測到該病毒[84-85]。2014年云南微小按蚊也分離到該病毒(BTV-YN14)[49]。

4.2.2 云南環(huán)狀病毒(Yunnan orbivirus，YUOV) 從秘魯患病牛、羊和犬中分離出YUOV[86]，對家畜有致病性。1999年從普洱市思茅區(qū)和瀾滄縣三帶喙庫蚊等4種蚊分離到9株環(huán)狀病毒，可在C6/36細(xì)胞中復(fù)制，但不能在BHK-21細(xì)胞復(fù)制，不致乳鼠發(fā)病但可檢出病毒血癥[10]，基因組含有10個(gè)節(jié)段雙鏈RNA。2005年對分離株全基因組序列測定及系統(tǒng)進(jìn)化分析，證實(shí)為環(huán)狀病毒屬新成員，被命名為云南環(huán)狀病毒[2, 87]。2005-2009年從勐?？h(5株)和勐臘縣(7株)三帶喙庫蚊中分離到Y(jié)UOV[12]，發(fā)熱患者血清中檢測到該病毒IgM和IgG抗體，提示人群中可能存在YUOV感染。2016年普洱和玉溪市三帶喙庫蚊、騷擾阿蚊和庫態(tài)按蚊(An.culicifacies)中各分離到1株YUOV[49]。

4.2.3 西藏環(huán)狀病毒(Tibet orbivirus, TIBOV) 該病毒可能對牛和羊有致病性。2009年首次從西藏林芝市墨脫縣圓斑按蚊分離到TIBOV[7]，2010年瑞麗市和2011年勐臘縣的中華按蚊各分離到1株TIBOV[14-15,49]，2012年勐?？h庫蠓(YN12246)、2013年芒市的庫蠓(DH13C120)[50,88-89]及師宗縣牛舍和羊舍庫蠓(YNSZ/V 291/2019)[90]中各分離到1株TIBOV。其中，DH13C120和 YNSZ/V 291/2019病毒能引起C6/36、BHK-21、Vero或MDBK細(xì)胞CPE，還可導(dǎo)致乳鼠發(fā)病死亡。病毒顆粒呈球形，直徑55～75 nm，基因組為十節(jié)段雙鏈RNA，呈3-3-3-1帶型。YNSZ/V290/2019株與其他TIBOV株的核苷酸和氨基酸序列差異較大，可能是新型TIBOV，當(dāng)?shù)?0份黃牛和68份山羊血清TIBOV中和抗體陽性率分別為22.50%和4.41%[90]。2007年西雙版納三帶喙庫蚊中分離到1株重組TIBOV，被稱為版納環(huán)狀病毒(Banna orbivirus, BAOV)，認(rèn)為可能由多株TIBOV(XZ0906)與Fengkai orbivirus重組而出現(xiàn)的新的基因重組TIBOV[91]。

4.2.4 其它環(huán)狀病毒 2016年從西雙版納、2019年從梁河縣和西盟縣中華按蚊和三帶喙庫蚊中分離到多株與已知環(huán)狀病毒差異較大的病毒，分別被命名為版納環(huán)狀病毒(Banna orbivirus, BAOV)和梁河環(huán)狀病毒(Lianghe orbivirus, LHOV)[49-50]。

4.3Coltivirus該病毒屬包括5種病毒[2]，可引起人類疾病如發(fā)熱、頭痛、肌痛和腦炎。1980和1990年代從景洪市、耿馬縣、思茅區(qū)和瀾滄縣等地蚊蟲(中華按蚊、三帶喙庫蚊、迷走按蚊和菲律賓按蚊)、豬、?；虬l(fā)熱和腦炎病人中共分離到100多株Coltivirus[10, 53, 92]，有待進(jìn)行全基因序列分析及種型鑒定。

5 細(xì)小病毒科(Parvoviridae)濃核病毒亞科(Densovinae)

云南各地蚊蟲中常能分離到蚊濃核病毒(Mosquito Densoviruses, MDV)，其中大多為淡色庫蚊濃核病毒(Culexpienspallensdensovirus，CppDNV)，攜帶該病毒的蚊種包括三帶喙庫蚊、騷擾阿蚊、致倦庫蚊(Culexpipiensquinquefasciatus)、中華按蚊、偽雜鱗庫蚊(Cx.pseudovishnui)和環(huán)帶庫蚊等[11-12, 14-16, 19, 77]。CppDNV能引起C6/36細(xì)胞CPE，為無包膜二十面體病毒，直徑約24 nm。云南分離株NS1和NS2基因與其他省市分離株的核苷酸(氨基酸)同源性為99.9%～100%(99.7%～100%)，進(jìn)化關(guān)系最接近[93]。

6 整體病毒科(Totiviridae)整體病毒屬(Totivirus)

2007-2016年在昭通市、西雙版納州勐臘縣、紅河州元江縣以及南澗、武定和雙柏縣等地三帶喙庫蚊共分離到13株能在C6/36細(xì)胞增殖的雙鏈RNA病毒，經(jīng)鑒定屬于整體病毒(ToV)[18, 49-50, 94-95]，其中的代表株ML-13和YJ株與ToV中奧莫諾河病毒(Omono River virus，ORV)和ToV-TJ處于同一進(jìn)化分支，同源性較高，提示ML-13和YJ均為ORV[94-95]。云南省蝙蝠糞便中也檢測到到該病毒[96]。

7 Mesoniviridae病毒科、Alphamesonivirus病毒屬

2007-2012年在南澗、永善、元江、勐海、江城、武定和雙柏縣三帶喙庫蚊和致倦庫蚊分離到10多株套式病毒(Nidoviruses)，經(jīng)分子鑒定均為南定病毒(Nam Dinh virus, NdiV)[18-19,49-50,97]，當(dāng)?shù)厝巳篒gG抗體陽性率為3.0%(49/1 622)。這些分離株能引起C6/36細(xì)胞CPE，而不致BHK-21細(xì)胞CPE，病毒顆粒呈球形，直徑60～80nm，有包膜，表面有刺突。云南分離株與NdiV的RdRp、HEL1的S蛋白核苷酸和氨基酸序列同源性均為98%以上，進(jìn)化樹為同一進(jìn)化分支[19, 98]。

8 彈狀病毒科(Rhabdoviridae)

2018年在勐?？h白紋伊蚊分離到2株彈狀病毒，與已知彈狀病毒差異較大，被命名為勐海彈狀病毒(Menghai rhabdovirus, MRV)[50, 99]。2015年和2017年在怒江州瀘水縣等地采集蜱類標(biāo)本中檢測到多株不同類型的彈狀病毒基因序列[100-101]，其中LS82病毒被命名為云南蜱病毒2(Yunnan tick virus 2)[100]。

9 公共衛(wèi)生重要性、防治研究建議及亟待加強(qiáng)的調(diào)查研究工作

9.1 需要高度重視和加強(qiáng)防控的蟲媒病毒病 JEV、DENV、CHIKV和ZIKV均為對人類危害較大的蚊媒病毒。雖然乙腦發(fā)病率呈下降趨勢，但各地每年都有缺乏免疫的大量新生豬群和抗性蚊蟲的出現(xiàn)，且部分人群免疫覆蓋率低，局部地區(qū)暴發(fā)乙腦的可能性依然存在，仍需加強(qiáng)傳染源管理、防蚊滅蚊和重點(diǎn)人群免疫接種以及成年人乙腦預(yù)防。東南亞地區(qū)為登革熱和基孔肯雅熱地方性流行區(qū)，云南仍然存在這2種疾病再次流行或大流行的風(fēng)險(xiǎn)，今后應(yīng)開展這2種病毒的遺傳變異、溯源、臨床學(xué)、人群抗體水平和媒介伊蚊可持續(xù)控制的深入研究。云南尚無寨卡病毒病本地病例報(bào)告，但云南蚊蟲和不明原因發(fā)熱病人中存在ZIKV感染，表明局部地區(qū)存在隱匿性流行。由于ZIKV感染通常為自限性疾病，大多為輕型病例，未能引起臨床醫(yī)生的注意，應(yīng)加強(qiáng)病例監(jiān)測包括不明原因病例或可疑病例的檢測以及媒蚊病毒分離等，以掌握寨卡病毒病的流行特征。總之，加強(qiáng)中老、中緬和中國-越南邊境地區(qū)DENV、CHIKV和ZIKV跨境傳播的防控和防蚊滅蚊仍是當(dāng)前面臨的重要任務(wù)。

9.2 需要高度關(guān)注的家畜蟲媒病毒病 TMUV、GETV、AKV和BTV是引起畜、禽疾病的重要病原體，云南多地蚊、蠓和畜、禽中均存在這些病毒的感染和傳播，但相關(guān)疾病的流行病學(xué)和臨床特征研究較少，其危害有待調(diào)查、評估。今后應(yīng)加強(qiáng)病原學(xué)、流行病學(xué)和臨床學(xué)研究，為防治工作提供依據(jù)。

9.3 需要特別關(guān)注的蟲媒病毒及其感染 SINV、MAYV、BATV、BAV、KKV、ManV、YUOV、TIBOV、MSV、MRV、Mayaro virus和Coltivirus可導(dǎo)致人和家畜感染，人的感染可能出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹、關(guān)節(jié)炎或腦炎等。不僅從云南的蚊、蠓或蝠蠅中分離到這些病毒，還多次從病人血清或腦脊液中分離到此類病毒或檢測到特異性抗體，還檢測到羅斯河病毒(Ross River virus)和巴馬森病毒(Barmah forest virus)IgM抗體[31]，提示夏秋季發(fā)生的一些不明原因發(fā)熱或腦炎病人可能與這些病毒感染有關(guān)。因此，加強(qiáng)這些蟲媒病毒的病毒學(xué)和血清學(xué)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)和證實(shí)相關(guān)病毒感染的臨床病例及其流行狀況，對防控蟲媒病毒病有積極意義。以往從蚊蟲分離到的Coltivirus有待開展遺傳進(jìn)化特征、種型鑒定的研究；TIBOV、MSV、MRV有待國際病毒分類委員會分類收錄；患者腦脊液和蚊蟲分離到的NDiV以及蚊、蝙蝠糞便中分離到的ToV對人或動物致病性亦有待研究。

9.4 加強(qiáng)對昆蟲黃病毒和濃核病毒的研究 云南蚊蟲中常能分離到庫蚊黃病毒、伊蚊黃病毒以及蚊濃核病毒，這些病毒專營寄生于蚊蟲，僅在蚊細(xì)胞中增值，對人及脊椎動物不敏感，宿主較為單一，可能不具有蟲媒病毒在脊椎動物間傳播的特性。需要開展這些病毒的遺傳進(jìn)化特征、蚊蟲感染及傳播特性的研究，以評估它們的公共衛(wèi)生意義以及昆蟲黃病毒作為病毒載體和蚊濃核病毒在生物滅蚊中的應(yīng)用價(jià)值。

9.5 加強(qiáng)蜱媒、蠓媒和白蛉媒病毒的研究 蜱主要寄生在陸棲脊椎動物體表，為僅次于蚊蟲的蟲媒病毒傳播媒介。1980年代，云南高黎貢山卵形硬蜱中曾分離到類似森林腦炎病毒[9]，還從病人分離到類似蜱媒科薩努爾森林病病毒(Kyasanur forest disease virus)[7]，人及動物血清中檢測到多種蜱媒病毒抗體[9]。經(jīng)病毒宏基因組法分析發(fā)現(xiàn)，2015年和2017年在云南采集的微小牛蜱(Rhipicephalusmicroplus)攜帶有多種類型的病毒[100-101]；2013-2017年在云南采集的庫蠓攜帶病毒種類繁多并存在較多新型(種)黃病毒和布尼亞病毒等[102]。白蛉能傳播多種蟲媒病毒，2018年山西省武鄉(xiāng)縣采集的白蛉中分離到一種被命名為武鄉(xiāng)病毒(Wuxiang virus, WUXV)的新病毒[103]，隸屬白纖病毒科、白蛉病毒屬，為我國首次從白蛉中分離到白蛉病毒屬病毒。云南省蜱、蠓和白蛉種類多，分布廣，今后應(yīng)加強(qiáng)它們的分布及其攜帶病毒的研究。

9.6 加強(qiáng)蝙蝠體表寄生蟲及其蟲媒病毒調(diào)查研究 蝙蝠是病毒的重要自然儲存宿主，云南省蝙蝠種類多、分布廣，還攜帶多種重要病毒[104]。蝙蝠體表寄生蟲包括蛛蠅、蝠蠅、臭蟲和革螨等，均為吸血節(jié)肢動物[73-74, 105]，它們不僅寄生在蝙蝠體表，有些還存在于爬行動物、鳥類和其他哺乳動物體表，甚至還叮咬吸食人血，因此，開展蝙蝠體表寄生蟲及其攜帶病毒研究對預(yù)防蝙蝠源病毒的傳播擴(kuò)散具有重要公共衛(wèi)生意義。

10 結(jié) 語

綜上所述，云南各地采集的蚊、蜱、蠓、蝠蠅、豬、牛、羊、鳥、蝙蝠和病人樣本中共分離到至少8科10屬28種病毒，其中至少有17種病毒可引起人的感染或嚴(yán)重疾病，4種病毒可引起畜、禽嚴(yán)重疾病，其它7種昆蟲特異性病毒可能有潛在應(yīng)用價(jià)值或在自然界病毒遺傳變異中起一定作用。云南省蟲媒病毒種類多，分布廣，是國內(nèi)已發(fā)現(xiàn)蟲媒病毒種類最多的省份。云南蟲媒病毒媒介中，尤以三帶喙庫蚊分布廣，種群數(shù)量大，攜帶病毒種類多，為最為重要的傳播媒介；白紋伊蚊、埃及伊蚊、中華按蚊、致倦庫蚊和騷擾阿蚊不僅種群密度大，而且攜帶多種病毒，媒介意義較大；蜱和蠓在某些重要病毒和新發(fā)病毒傳播中具有重要作用，尚需加強(qiáng)監(jiān)測和深入研究。

近20年，隨著病毒檢測技術(shù)的不斷提高，世界各地發(fā)現(xiàn)了許多新的蟲媒病毒，如與蚊媒相關(guān)的黃病毒科、泛布尼亞病毒科和呼腸孤病毒科病毒多達(dá)數(shù)十種，其中有的對人、畜健康構(gòu)成威脅，有的可能是潛在病原[2-3]。針對云南蚊、蜱和蠓的病毒宏基因組檢測和序列分析發(fā)現(xiàn)，這些節(jié)肢動物攜帶的病毒種類較多，其中還存在許多新型(種)黃病毒、布尼亞病毒、白蛉病毒、環(huán)狀病毒、Mivirus、Negevirus、整體病毒、套式病毒、濃核病毒和彈狀病毒等[49-50, 101-102]。因此，進(jìn)一步闡明云南蟲媒病毒的分布特征及其宿主媒介，評估其危害，對邊疆建設(shè)、保護(hù)人民健康和生命安全具有重要意義。

利益沖突：無