張金鵬 天津市河西醫(yī)院檢驗(yàn)科 （天津 300202）

內(nèi)容提要： 自動(dòng)化檢驗(yàn)的不斷完善也進(jìn)一步促進(jìn)了臨床醫(yī)學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)室安全與檢驗(yàn)結(jié)果可溯源的要求。臨床中應(yīng)用自動(dòng)免疫檢驗(yàn)后，充分減輕了檢驗(yàn)人員的工作強(qiáng)度，同時(shí)也減少了人工操作容易發(fā)生生物危害的問(wèn)題。可以預(yù)見(jiàn)：自動(dòng)免疫檢驗(yàn)在醫(yī)療檢驗(yàn)中將發(fā)揮更為重要的作用。而現(xiàn)代自動(dòng)化免疫技術(shù)也由單一檢測(cè)分析，進(jìn)入了多基因分析與微量通化道路的時(shí)代，檢驗(yàn)的精確度進(jìn)一步提升，不僅在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，在其他領(lǐng)域中也發(fā)揮了重要的作用?；诖?，本次研究針對(duì)自動(dòng)化檢驗(yàn)的研究情況做出了梳理，針對(duì)研究進(jìn)展與臨床應(yīng)用做出了針對(duì)性分析，以期為促進(jìn)免疫自動(dòng)化檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展提供相應(yīng)的參考。

臨床調(diào)查顯示[1]：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展速度較快，且大部分檢驗(yàn)項(xiàng)目已實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化檢查，臨床檢驗(yàn)的特異性與靈敏性均實(shí)現(xiàn)了一定程度的提升。而基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中提示的新型生物標(biāo)記物也被逐漸應(yīng)用到自動(dòng)化的檢查中，進(jìn)一步提升了檢查能力?；谧詣?dòng)化免疫檢測(cè)的高靈敏性與高特異性，自動(dòng)化免疫檢測(cè)逐漸成為臨床中的首要檢測(cè)方法。從檢測(cè)水平的角度分析[2]：檢測(cè)也進(jìn)入了多基因分析與微量通化道路的時(shí)代，檢驗(yàn)的精確度進(jìn)一步提升，不僅在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，在其他領(lǐng)域中也發(fā)揮了重要的作用?；诖?，本次研究針對(duì)自動(dòng)化檢驗(yàn)的研究情況做出了梳理，針對(duì)研究進(jìn)展與臨床應(yīng)用做出了針對(duì)性分析，具體報(bào)道如下。

1.自動(dòng)化免疫檢查的概念及應(yīng)用情況

1.1 自動(dòng)化免疫檢查的概念

自動(dòng)化免疫檢查是以完成免疫分析工作為核心目的，以機(jī)械代替人工為核心的一類(lèi)免疫檢查方法。自動(dòng)化免疫檢查具體包括三部分內(nèi)容[3]：①在試劑分配、洗滌及加樣的過(guò)程中均應(yīng)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。②在進(jìn)行數(shù)據(jù)處理的過(guò)程中實(shí)現(xiàn)全數(shù)據(jù)處理的自動(dòng)化。③在發(fā)生問(wèn)題時(shí)能為機(jī)械操作人員清晰提示故障的位置，并能在發(fā)揮計(jì)算能力的基礎(chǔ)上，提示解決問(wèn)題的策略。

1.2 自動(dòng)化免疫檢查的應(yīng)用情況

臨床研究提示：目前臨床檢測(cè)的工作量處于不斷增加的趨勢(shì)中，但隨著檢測(cè)工作量的增加，人工操作感染樣本風(fēng)險(xiǎn)也在不斷增大?；诖?，醫(yī)學(xué)管理對(duì)臨床檢驗(yàn)提出了更高的要求[4]。進(jìn)入20世紀(jì)70年代，全自動(dòng)分析設(shè)備被較為廣泛地應(yīng)用到了臨床檢測(cè)中，取得了較好的臨床效果。進(jìn)入20世紀(jì)90年代，自動(dòng)化免疫分析技術(shù)經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐，取得了較多的臨床經(jīng)驗(yàn)，并在臨床經(jīng)驗(yàn)與學(xué)術(shù)研究的支持下進(jìn)入了自動(dòng)化免疫分析的成熟時(shí)期。在這一時(shí)期，開(kāi)發(fā)出了較多的免疫分析方法。如熒光分析測(cè)定法，化學(xué)發(fā)光測(cè)定法與熒光偏振免疫測(cè)定法等方法。上述方法不斷被引入到自動(dòng)免疫分析技術(shù)中，取得了較好的臨床效果。不僅提示了較高的靈敏性，同時(shí)也提示出了較強(qiáng)的特異性[5]。且在充分排除人工干預(yù)的情況下，提示了良好的抗干擾能力。

在目前的情況下，我國(guó)的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)均取得了較為充分的發(fā)展。在這一背景下，關(guān)于免疫學(xué)的相關(guān)研究也取得了相應(yīng)的發(fā)展。在臨床免疫檢查運(yùn)用過(guò)程中，也逐漸在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)全面推廣。而隨著醫(yī)療科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的先進(jìn)自動(dòng)化設(shè)備也應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)工作中，不僅充分緩解了檢驗(yàn)工作人員的壓力，同時(shí)減少了臨床檢查中的工作流程，提升了檢驗(yàn)結(jié)果的精確性、靈敏性[6]。

2.免疫檢驗(yàn)自動(dòng)化的研究進(jìn)展

20世紀(jì)70年代后期，臨床免疫技術(shù)取得了長(zhǎng)足的發(fā)展，現(xiàn)代化的免疫分析儀不斷應(yīng)用新的免疫分析技術(shù)。臨床研究提示：現(xiàn)代化的免疫分析儀器一般使用一種或兩種免疫分析技術(shù)[7]。目前，自動(dòng)化免疫檢驗(yàn)中主要使用的免疫分析技術(shù)包括：生物素—親和素分析技術(shù)；酶聯(lián)免疫分析技術(shù)、化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)、熒光偏振免疫測(cè)定技術(shù)及化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)等[8]。綜合使用各項(xiàng)免疫分析技術(shù)后，全自動(dòng)免疫檢驗(yàn)實(shí)現(xiàn)了高特異性與高靈敏性的要求，且具有較強(qiáng)的抗干擾性。

2.1 免疫濁度測(cè)定自動(dòng)化檢驗(yàn)技術(shù)的研究進(jìn)展

免疫濁度測(cè)定技術(shù)是使用可溶性抗原抗體進(jìn)行檢測(cè)，利用抗原抗體在反應(yīng)液體內(nèi)會(huì)發(fā)生特異結(jié)合而形成大小不一的復(fù)合物的特征進(jìn)行檢驗(yàn)。而隨著復(fù)合物的增多，反應(yīng)液體會(huì)呈現(xiàn)出一定的濁度。臨床研究提示[9]：在反應(yīng)液體內(nèi)的抗體較多時(shí)，復(fù)合物的抗原含量水平也會(huì)隨之增多。統(tǒng)計(jì)反應(yīng)液體濁度后，與標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液進(jìn)行比較能夠獲得抗原抗體的含量，進(jìn)而得出相應(yīng)的檢查結(jié)論。

2.1.1 散射比濁儀測(cè)定法

散射比濁儀測(cè)定法采用既定波長(zhǎng)光線(xiàn)照射的方式進(jìn)行分析，沿水平方向進(jìn)行照射，在具體照射過(guò)程，遭遇抗體抗原復(fù)合物后的照射光線(xiàn)會(huì)發(fā)生折射的，可清晰觀(guān)察到角度的偏轉(zhuǎn)。臨床研究提示[10]：照射光線(xiàn)的波長(zhǎng)，偏轉(zhuǎn)角度及規(guī)格與抗原抗體的情況呈現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系，即抗原抗體越復(fù)雜，數(shù)量越多的情況下，照射光線(xiàn)的角度偏轉(zhuǎn)越大，波長(zhǎng)較短。綜合情況下，抗原抗體的情況越復(fù)雜，照射光線(xiàn)所表現(xiàn)出的散射強(qiáng)度也越大。

而在統(tǒng)計(jì)出相應(yīng)數(shù)據(jù)的情況下，通過(guò)數(shù)學(xué)函數(shù)模型的計(jì)算，能夠較為精確地計(jì)算出抗原抗體復(fù)合物的具體水平。臨床研究提示[11]：散射比濁測(cè)定方法的臨床靈敏度較高，精密性也較強(qiáng)，能夠較為充分地滿(mǎn)足臨床檢測(cè)效果。但臨床研究也提示了這一檢測(cè)方法所存在的部分問(wèn)題。散射比濁測(cè)定要求檢測(cè)儀器與的檢測(cè)試劑需配套使用，因而檢測(cè)范圍較為狹窄，臨床檢測(cè)的成本也較高。

2.1.2 透射比濁測(cè)定法

透射比濁測(cè)定法是一種直接測(cè)量反應(yīng)溶液內(nèi)的離子散射水平與強(qiáng)度的臨床檢測(cè)方法。在反應(yīng)溶液內(nèi)離子存在較為確定的情況下，對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行強(qiáng)光照射，強(qiáng)光遭遇反應(yīng)溶液中的離子后會(huì)發(fā)生散射的情況，從而出現(xiàn)光度下降的情況。而對(duì)光度的下降水平進(jìn)行分析，能夠分析出反應(yīng)溶液內(nèi)的粒子濃度情況。透射比濁測(cè)定法的反應(yīng)原理與光度測(cè)定的反應(yīng)原理相似。

同時(shí)，臨床研究中也提示了全自動(dòng)透射比濁法的臨床優(yōu)勢(shì)，即透射比濁測(cè)定方法在滿(mǎn)足相應(yīng)的條件后就可以進(jìn)行檢測(cè)，臨床條件較為容易滿(mǎn)足。具體要求為：待檢測(cè)樣本溶液中確定包含較多的抗原抗體，且抗原抗體與反應(yīng)溶液所形成的復(fù)合物體直徑較大，而在無(wú)法達(dá)到這一要求的情況下，透射光線(xiàn)將無(wú)法有效阻擋照射強(qiáng)光。第二、待檢測(cè)的抗原抗體具備良好的抗體親和力，且所使用的反應(yīng)加強(qiáng)劑能夠有抑制抗體抗原的溶解水平[12]。即只要臨床中合格的檢測(cè)試劑，就能實(shí)現(xiàn)使用生化分析檢測(cè)儀器進(jìn)行全自動(dòng)檢測(cè)的方法。

在具體應(yīng)用透射比濁方測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要利用全自動(dòng)免疫濁度分析儀器設(shè)備配合進(jìn)行檢測(cè)分析。而使用全自動(dòng)比濁儀器后，不論待檢樣本屬于血漿樣本，還是其他液體樣本。樣本中的特異蛋白情況，及尿微量蛋白情況的測(cè)定準(zhǔn)確性均會(huì)得到一定程度的提升[13]。綜合而言，透射比濁測(cè)定法的臨床適用條件較為簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確率較高，能夠促進(jìn)提升臨床免疫檢測(cè)的效率。

2.2 免疫標(biāo)記自動(dòng)化測(cè)定技術(shù)的研究進(jìn)展

免疫標(biāo)記技術(shù)確定抗原抗體的一種技術(shù)，將臨床中已確定的抗原抗體通過(guò)較為方便且明顯的物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。其后對(duì)標(biāo)記物的含量進(jìn)行測(cè)定，從而取得抗原抗體的反應(yīng)結(jié)果。并以標(biāo)記物測(cè)定結(jié)果為依據(jù)，通過(guò)數(shù)學(xué)模型分析出待檢測(cè)反應(yīng)液體中是否抗原抗體及其具體含量情況。且臨床研究提示[14]：免疫標(biāo)記技術(shù)的操作較為簡(jiǎn)單，能夠較為充分地滿(mǎn)足臨床檢測(cè)中對(duì)檢測(cè)方法的要求。且免疫標(biāo)記方法的定性與定量技術(shù)均較為成熟，且準(zhǔn)確性較高，是目前臨床中使用范圍最廣的測(cè)定方式。

臨床統(tǒng)計(jì)提示[15]：目前常見(jiàn)的標(biāo)記免疫測(cè)定方法主要為放射免疫測(cè)定技術(shù)與免疫熒光技術(shù)。放射免疫測(cè)定技術(shù)是通過(guò)放射性核素標(biāo)記抗原抗體，通過(guò)分析抗原抗體特異性的情況下，繪制競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線(xiàn)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行對(duì)比，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的目的。免疫熒光技術(shù)是通過(guò)熒光物質(zhì)標(biāo)記抗原抗體的情況下，分析復(fù)合反應(yīng)物中熒光強(qiáng)度所突出的特異性。并測(cè)定反應(yīng)液體中的微量與超微量物質(zhì)情況。最后通過(guò)計(jì)算機(jī)技術(shù)配合自動(dòng)化免疫分析儀進(jìn)行分析的情況下，實(shí)現(xiàn)測(cè)定的目的。臨床研究提示[16]：上述兩種標(biāo)記測(cè)定方法在臨床中的使用頻率較多，而可以預(yù)見(jiàn)的是：在設(shè)備儀器不斷提升的背景下，標(biāo)記檢測(cè)方法在未來(lái)的臨床檢測(cè)中也會(huì)發(fā)揮更重要的作用。

2.3 臨床檢查中的注意事項(xiàng)

自動(dòng)化臨床免疫檢驗(yàn)實(shí)現(xiàn)了以具有高速運(yùn)算能力的計(jì)算機(jī)代替人工操作完成免疫檢驗(yàn)及分析的整個(gè)過(guò)程，其中包含了免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目自動(dòng)化加樣，其后對(duì)試劑進(jìn)行分配、洗滌和測(cè)定，最后以自動(dòng)化技術(shù)處理現(xiàn)有數(shù)據(jù)，在儀器出現(xiàn)故障時(shí)，能夠通過(guò)設(shè)備的自檢系統(tǒng)完成故障排除和初步確定，在減少人工操作同時(shí)，確保了設(shè)備的有序運(yùn)行。免疫檢驗(yàn)自動(dòng)化運(yùn)用過(guò)程中包含了免疫濁度自動(dòng)化測(cè)定、標(biāo)記免疫檢驗(yàn)自動(dòng)化測(cè)定，以及相關(guān)的免疫檢測(cè)技術(shù)，其中免疫濁度技術(shù)主要運(yùn)用的是抗原特異性結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，會(huì)在對(duì)應(yīng)液體內(nèi)呈現(xiàn)出渾濁狀態(tài)，通過(guò)這一變化測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。臨床主要運(yùn)用的測(cè)定免疫濁度技術(shù)包括散射比濁和投射濁度。標(biāo)記免疫檢驗(yàn)運(yùn)用的是放射性同位素對(duì)抗原抗體加以標(biāo)記，形成相應(yīng)反應(yīng)，依據(jù)免疫標(biāo)記方式差異，標(biāo)記分為酶標(biāo)技術(shù)、放射性免疫檢驗(yàn)技術(shù)、免疫熒光技術(shù)等，但由于免疫熒光無(wú)法實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)以及自動(dòng)化檢測(cè)，加之放射免疫技術(shù)費(fèi)用高昂，運(yùn)用試劑可能對(duì)人體健康造成影響，導(dǎo)致該技術(shù)推廣受限。免疫酶技術(shù)運(yùn)用較為廣泛，且無(wú)需運(yùn)用昂貴設(shè)備便可操作，并且檢測(cè)技術(shù)易于掌握。發(fā)光免疫檢驗(yàn)技術(shù)運(yùn)用的標(biāo)記物為發(fā)光物質(zhì)，免疫反應(yīng)體系下，發(fā)光物質(zhì)會(huì)釋放自由能量并發(fā)光，對(duì)光源信號(hào)的監(jiān)測(cè)就可以測(cè)定數(shù)據(jù)，該檢測(cè)方法準(zhǔn)確性高，試劑穩(wěn)定性高，可以進(jìn)行諸多項(xiàng)目的檢測(cè)。免疫檢驗(yàn)的自動(dòng)化分析儀運(yùn)用了免疫分析的最新技術(shù)，涉及內(nèi)容包括：抗體需要較高親和力與特異性；磁性微球?yàn)槌Ｓ玫墓腆w載體，能夠增加反應(yīng)面積；抗原反應(yīng)信號(hào)系統(tǒng)設(shè)計(jì)逐步趨于人工智能化，對(duì)于提升檢驗(yàn)自動(dòng)校對(duì)功能具有重要影響。

隨著臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)水平的上升及要求的提高，在進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，應(yīng)注意在檢測(cè)全過(guò)程中充分注意質(zhì)量的控制。要求檢測(cè)工作人員在采集樣本、保存樣本及運(yùn)輸，儲(chǔ)存樣本的過(guò)程中嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行操作。并在對(duì)檢查結(jié)果進(jìn)行二次復(fù)查時(shí)候，嚴(yán)格按照各項(xiàng)檢測(cè)儀器與檢測(cè)設(shè)備說(shuō)明與SOP規(guī)范進(jìn)行操作。避免因規(guī)范問(wèn)題而引發(fā)檢測(cè)結(jié)果的異常。同時(shí)，在具體進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中應(yīng)注意彌補(bǔ)常規(guī)質(zhì)量控制中存在的不足?；诖?，檢查工作人員需注意與主治醫(yī)師及護(hù)理人員進(jìn)行充分的溝通，向醫(yī)護(hù)人員闡釋檢測(cè)對(duì)規(guī)范操作的需求，從而促進(jìn)提升醫(yī)護(hù)工作人員的規(guī)范操作意識(shí)。同時(shí)院內(nèi)也可以通過(guò)交流學(xué)習(xí)或舉辦學(xué)術(shù)講座的方法，向相關(guān)工作人員提示檢測(cè)對(duì)規(guī)范操作的需求，規(guī)范相關(guān)工作人員進(jìn)行規(guī)范操作，從而促進(jìn)提升檢查的準(zhǔn)確率。而在檢查中發(fā)現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，應(yīng)注意進(jìn)行溯源分析，在充分提示問(wèn)題發(fā)生原因的基礎(chǔ)上，分析問(wèn)題的解決方法，并形成循證依據(jù)，避免問(wèn)題的重復(fù)發(fā)生。

3.結(jié)束語(yǔ)

在免疫技術(shù)不斷發(fā)展，自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)不斷完善的背景下，臨床檢驗(yàn)中也主要使用自動(dòng)化檢查技術(shù)進(jìn)行檢查，避免人工操作所帶來(lái)的誤差與感染問(wèn)題。目前，臨床研究中關(guān)于自動(dòng)化的研究主要集中在免疫濁度測(cè)定研究與標(biāo)記自動(dòng)化測(cè)定兩方面。而在免疫檢驗(yàn)技術(shù)不斷發(fā)展，自動(dòng)化檢查設(shè)備不斷更新的背景下，臨床自動(dòng)化檢查技術(shù)也將呈現(xiàn)出更便捷，更高效的特征。本次研究針對(duì)自動(dòng)化檢驗(yàn)的研究情況做出了梳理，針對(duì)研究進(jìn)展與臨床應(yīng)用做出了針對(duì)性分析，為促進(jìn)免疫自動(dòng)化檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展提供相應(yīng)的參考。