韋彥君，馮阿磊,2，張文韜，楊哲

1 山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院腫瘤治療中心，濟(jì)南250021；2 山東齊都藥業(yè)有限公司山東省腦神經(jīng)保護(hù)類藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

食管癌是一種惡性程度較高的腫瘤，患者總體預(yù)后差，5年生存率約為20%[1]。食管癌首選治療方式是手術(shù)，但早期食管癌患者臨床癥狀不典型，多數(shù)患者確診時(shí)已是腫瘤進(jìn)展期，失去了手術(shù)治療機(jī)會(huì)[2]。同步放化療是不可切除食管癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，但許多患者存在對(duì)放化療的治療抵抗，這也是導(dǎo)致食管癌患者5年生存率低的重要因素[3]。Hippo信號(hào)通路是器官大小、組織穩(wěn)態(tài)和干細(xì)胞自我更新的關(guān)鍵調(diào)節(jié)通路，是人類癌癥中經(jīng)常改變的信號(hào)通路之一[4]。轉(zhuǎn)錄共激活因子Yes相關(guān)蛋白1(YAP1)是Hippo信號(hào)通路下游重要的效應(yīng)因子，高活性的YAP對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、腫瘤干細(xì)胞特性、侵襲和轉(zhuǎn)移及化療耐藥都有顯著影響[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中存在YAP1過(guò)表達(dá)，YAP1可能影響食管癌的發(fā)生發(fā)展及放化療敏感性[4,7]。本文就YAP1在食管癌發(fā)生發(fā)展及治療中作用進(jìn)行綜述，以期為食管癌的治療提供新的方向。

1 YAP1在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用

1.1 調(diào)控食管癌細(xì)胞增殖及凋亡 YAP1可以通過(guò)調(diào)控細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡之間的平衡來(lái)影響Hippo通路功能，從而影響腫瘤的發(fā)生。在YAP1過(guò)表達(dá)食管癌細(xì)胞系ECA109中抑制YAP1表達(dá)，抗凋亡蛋白Bcl-2和促進(jìn)癌基因轉(zhuǎn)錄的p-Erk等表達(dá)降低，而促凋亡蛋白Bax、Caspase-3和P53等蛋白表達(dá)升高[8]。Caspase-3是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的主要末端剪切酶，Bcl-2可阻止其激活。p53可作為細(xì)胞應(yīng)激感受器，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞凋亡來(lái)響應(yīng)DNA損傷、缺氧等應(yīng)激信號(hào)，進(jìn)而抑制腫瘤發(fā)生。另有研究顯示，YAP1可促進(jìn)食管癌細(xì)胞增殖，并且其作用與調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)[9]。在YAP1高表達(dá)食管癌細(xì)胞系KYSE170和YAP1表達(dá)水平相對(duì)較低的食管癌細(xì)胞系KYSE1240中發(fā)現(xiàn)，YAP1蛋白水平越高，促進(jìn)食管癌細(xì)胞增殖的作用越強(qiáng)。CDKN1A/p21和BIRC5/survivin是YAP1基因下游與細(xì)胞周期相關(guān)的作用靶點(diǎn)，敲低KYSE170細(xì)胞YAP1表達(dá)可促進(jìn)CDKN1A/p21的表達(dá)、抑制BIRC5/survivin的表達(dá)，使細(xì)胞滯留在G0/G1期。JNK是絲裂原活化蛋白激酶家族中的一員，在調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的生存及凋亡方面發(fā)揮重要作用。在JNK的眾多底物中，癌基因c-Jun因其與腫瘤侵襲性密切相關(guān)而受到重視。研究發(fā)現(xiàn)，c-Jun啟動(dòng)子含有大量TEA轉(zhuǎn)錄因子(TEAD)的結(jié)合位點(diǎn)，而YAP1的致癌活性是通過(guò)TEAD家族轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的[10]。XU等[11]研究發(fā)現(xiàn)，Hippo信號(hào)通路下游轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物YAP-TEAD可激活JNK/c-Jun信號(hào)通路并上調(diào)腫瘤代謝相關(guān)的胰島素受體底物2，進(jìn)而促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖及侵襲能力。

1.2 調(diào)控食管癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是高度保守的細(xì)胞過(guò)程，細(xì)胞上皮特征的消失以及間質(zhì)表型的增強(qiáng)賦予了細(xì)胞轉(zhuǎn)移及入侵的能力。越來(lái)越多的證據(jù)表明，EMT可以促進(jìn)癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。在膽管癌、前列腺癌及乳腺癌中，YAP1過(guò)表達(dá)可以通過(guò)加強(qiáng)EMT來(lái)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[12]。波形蛋白、N-鈣黏蛋白及E-鈣黏蛋白是EMT的標(biāo)志物，波形蛋白及N-鈣黏蛋白的高表達(dá)，E-鈣黏蛋白的低表達(dá)可以促進(jìn)EMT的發(fā)生及腫瘤轉(zhuǎn)移。在食管癌細(xì)胞系Eca109和KYSE150中抑制YAP1表達(dá)發(fā)現(xiàn)，波形蛋白和N-鈣黏蛋白的表達(dá)水平顯著下降、E-鈣黏蛋白的水平顯著升高[13]?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是間質(zhì)細(xì)胞表型的特有蛋白之一，可降解細(xì)胞外基質(zhì)、破壞細(xì)胞基底膜，對(duì)惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移起到積極作用，其既可以作為EMT發(fā)生的重要標(biāo)志，又可以誘發(fā)EMT[14]。在食管癌細(xì)胞系KYSE30和EC9706中抑制YAP1表達(dá)可發(fā)現(xiàn),MMP2、MMP9的表達(dá)水平下降。以上研究提示，YAP1過(guò)表達(dá)可通過(guò)促進(jìn)EMT的發(fā)生來(lái)促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，從而推動(dòng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

2 YAP1在食管癌治療中的作用

食管癌是具有侵襲性和治療抵抗的惡性腫瘤，治療抵抗一直是影響中晚期食管癌患者療效的主要原因之一。明確患者治療抵抗的原因，對(duì)改善患者預(yù)后至關(guān)重要。多項(xiàng)研究顯示，YAP1是食管癌細(xì)胞產(chǎn)生化療耐受及放療抵抗的關(guān)鍵作用因子。

2.1 化療耐受 導(dǎo)致食管癌化療耐受的分子機(jī)制尚不清楚，腫瘤細(xì)胞可通過(guò)多種途徑引發(fā)化療耐受。一般認(rèn)為，腫瘤干細(xì)胞(CSCs)在食管癌化療耐受中發(fā)揮著重要作用。CSCs具有自我更新、多系分化和對(duì)傳統(tǒng)抗癌治療耐藥的特點(diǎn)，是腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的驅(qū)動(dòng)力[15]。細(xì)胞毒性藥物僅對(duì)增殖期細(xì)胞起作用，對(duì)CSCs細(xì)胞無(wú)影響；而CSCs藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)高、DNA修復(fù)能力強(qiáng)以及抗凋亡能力強(qiáng)等特性與腫瘤治療過(guò)程產(chǎn)生的治療耐受息息相關(guān)。WANG等[16]研究發(fā)現(xiàn)，YAP1的過(guò)度激活打破了YAP1和CSCs標(biāo)志物SOX9之間雙向調(diào)控的動(dòng)態(tài)平衡，賦予了食管癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及化療抵抗等CSCs特性，促進(jìn)了食管鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)展。

EGFR是具有激酶活性的跨膜蛋白，在77%的食管鱗狀細(xì)胞癌中可發(fā)現(xiàn)EGFR過(guò)表達(dá)，而EGFR過(guò)表達(dá)與腫瘤病理分期晚期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、較高的UICC分期以及總體生存率降低有關(guān)[17-18]。SONG等[19]研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗狀細(xì)胞癌中YAP1可上調(diào)EGFR的表達(dá)，促進(jìn)EGFR磷酸化，導(dǎo)致患者產(chǎn)生化學(xué)耐藥。EGFR下游信號(hào)通路的激活依賴于EGFR的表達(dá)及EGFR的磷酸化程度，YAP1可以直接與EGFR的啟動(dòng)子結(jié)合促進(jìn)EGFR的表達(dá)及磷酸化，并且可以促進(jìn)EGFR信號(hào)通路下游蛋白激酶B(AKT)的磷酸化。此外，YAP1誘導(dǎo)的EGFR配體雙調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)有助于YAP依賴的細(xì)胞增殖和遷移[20]。進(jìn)一步對(duì)113例食管腺癌組織進(jìn)行免疫組化分析，發(fā)現(xiàn)與對(duì)治療敏感的組織相比，耐藥腫瘤組織中YAP1和EGFR表達(dá)增加，二者呈正相關(guān)；成功轉(zhuǎn)染YAP基因的食管癌細(xì)胞中，EGFR與YAP的mRNA表達(dá)水平密切相關(guān)；EGFR啟動(dòng)子上TEAD結(jié)合位點(diǎn)突變或缺失后，YAP1誘導(dǎo)EGFR轉(zhuǎn)錄的能力明顯減弱。此外，YAP1及EGFR高表達(dá)的食管癌細(xì)胞系SKGT-4較YAP1及EGFR低表達(dá)的KATO-TN細(xì)胞系有更強(qiáng)的侵襲力，對(duì)5-氟尿嘧啶的抵抗力更強(qiáng)。在SKGT-4及KATO-TN中誘導(dǎo)YAP1的表達(dá)，細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶及多西他賽的抵抗力均有加強(qiáng)；敲低細(xì)胞中YAP1誘導(dǎo)的EGFR表達(dá)，食管癌細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶的敏感性增強(qiáng)，這與直接敲低YAP1的表達(dá)結(jié)果相一致。

由上可見，YAP1誘導(dǎo)的EGFR表達(dá)增強(qiáng)與食管癌耐藥相關(guān)。YAP1抑制劑維替泊芬聯(lián)合5-氟尿嘧啶可同時(shí)抑制YAP1和EGFR表達(dá)，減少AKT磷酸化，同時(shí)可見CSCs標(biāo)志物SOX9及Hes-1的表達(dá)受到抑制，腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性藥物敏感性增加[19]。在惡性腫瘤中，YAP1信號(hào)通路與固有性或獲得性耐藥相關(guān)，因此抑制YAP1信號(hào)通路可能增強(qiáng)化療藥物的療效。YAP1靶向療法聯(lián)合細(xì)胞毒性藥物，可能是化療耐藥的食管癌患者新的治療策略。

2.2 放療抵抗 放射治療是針對(duì)中晚期食管癌的一種有效治療手段，但放療效果與患者對(duì)放射線的敏感性密切相關(guān)。研究顯示，放療后晚期食管癌局部控制效果差及復(fù)發(fā)者占總治療人數(shù)的50%～60%，可見放療抵抗與食管癌患者預(yù)后不佳相關(guān)[21]。WANG等[16]研究發(fā)現(xiàn)，YAP1高表達(dá)的食管癌細(xì)胞具有CSCs特性。CSCs的數(shù)量及其固有的放射抗性是放療后局部控制重要的預(yù)測(cè)因子，這種對(duì)放療的抵抗特性主要是DNA修復(fù)過(guò)程中兩個(gè)重要的絲氨酸—蘇氨酸蛋白激酶的過(guò)度激活引起的，即共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張突變(ATM)及ATM和rad3相關(guān)突變(ATR)[22]。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK6)是細(xì)胞周期的關(guān)鍵調(diào)控因子，通過(guò)視網(wǎng)膜母細(xì)胞相關(guān)蛋白1(Rb1)的磷酸化，在腫瘤細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。處在不同細(xì)胞周期的細(xì)胞對(duì)電離輻射的敏感性不同，相比S期，電離輻射引起的DNA損傷如單鏈斷裂、雙鏈斷裂在G1期更加明顯。LI等[23]研究發(fā)現(xiàn)，YAP1可與CDK6相互作用，使食管癌患者具有放療抵抗特性。免疫印跡和免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，放療抵抗的食管癌組織中，YAP1蛋白和CDK6表達(dá)水平明顯增加,并且表達(dá)水平存在相關(guān)性；YAP1基因過(guò)表達(dá)的食管癌細(xì)胞中CDK6轉(zhuǎn)錄和表達(dá)增加，食管癌細(xì)胞對(duì)放療抵抗。相反，YAP1抑制劑CA3可降低YAP1、CDK6和磷酸化Rb1的表達(dá)，增強(qiáng)食管癌細(xì)胞對(duì)放療的敏感性。與之相一致的是，CDK6抑制劑LEE001可減少YAP1和磷酸化Rb1的表達(dá)，使細(xì)胞滯留在G1期，增強(qiáng)食管癌細(xì)胞對(duì)射線的敏感性。以上研究提示，在食管癌中高表達(dá)的YAP1可通過(guò)CDK6調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，降低G1期細(xì)胞所占比例，進(jìn)而產(chǎn)生放療抵抗。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相比CA3或LEE001單獨(dú)處理的小鼠，經(jīng)LEE001和CA3聯(lián)合處理的小鼠體內(nèi)腫瘤質(zhì)量和體積減少的更加明顯，CA3和LEE001聯(lián)合應(yīng)用在放療抵抗的食管癌小鼠中具有更強(qiáng)的抗癌活性。因此，靶向CDK6和YAP1通路可能是針對(duì)放療抵抗食管癌患者的一種新的治療手段。

綜上所述，YAP1在食管癌的發(fā)生發(fā)展及治療中均具有重要作用。食管癌中YAP1的過(guò)度表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力；同時(shí)，YAP1與其他分子相互作用可使食管癌患者對(duì)化學(xué)治療和放射治療產(chǎn)生抵抗。這使得食管癌患者預(yù)后較差，總體生存期較短。將YAP1抑制劑與抗癌藥物或放療聯(lián)合應(yīng)用是控制食管癌擴(kuò)散很有前景的一種治療策略，靶向YAP1治療可能給食管癌患者帶來(lái)臨床獲益。