楊尚霖， 羅巧慧， 史海濤， 朱 可， 郭春華*

（1.阿壩職業(yè)學(xué)院，四川阿壩 623200；2.西南民族大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，四川成都 610041）

飼料中長期使用抗生素，可造成病原菌產(chǎn)生抗藥性，從而影響到食品安全甚至人類公共衛(wèi)生與安全，已引起全社會的廣泛關(guān)注。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2019年第194號公告宣布，自2020年7月1日起，飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長類藥物飼料添加劑（中藥類除外）的商品飼料。而藥物飼料添加劑的限制使用，直接促進(jìn)了對替抗產(chǎn)品的研究和應(yīng)用。

微生物發(fā)酵飼料是指飼料原料經(jīng)微生物發(fā)酵處理，降解了其中的抗?fàn)I養(yǎng)因子和分解飼料中大分子物質(zhì)，產(chǎn)生富含微生物菌體和其代謝物有機(jī)酸、氨基酸、維生素和促生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)的混合物（康懷艷，2019；馬傳興等，2014）。目前，最常見的菌種為酵母菌、乳酸菌、芽孢桿菌和霉菌等（李軍訓(xùn)等，2010）。研究表明動物采食微生物發(fā)酵飼料后，不僅能夠提高動物對飼料的利用率，促進(jìn)動物生長發(fā)育和提高動物生產(chǎn)效率，而且有益動物健康，減少動物疾病的發(fā)生（康懷艷，2019；隋潔等，2019；王鵬，2015）。余淼等（2013）在研究時發(fā)現(xiàn)，使用微生物發(fā)酵飼料飼喂肉牛后，肉牛血清總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白A、G、M濃度顯著增加，證實(shí)了微生物發(fā)酵飼料可以提高肉牛免疫力；盧珍蘭（2014）和王長彥等（2008）在生長育肥豬上的試驗(yàn)表明，添加微生物發(fā)酵飼料后，豬只的腹瀉率以及死亡率顯著降低。高燕（2016）使用混合有益菌發(fā)酵全穗玉米來飼喂母豬的試驗(yàn)表明，發(fā)酵飼料能改善母豬的腸道微生態(tài)和健康狀況，提高母豬的繁殖性能和哺乳仔豬的生長性能。李敏等（2012）用微生物發(fā)酵飼料飼喂生長育肥豬，發(fā)現(xiàn)其具有提高生長性能的作用，而且微生物發(fā)酵飼料對豬肉品質(zhì)（肉質(zhì)、嫩度等）和風(fēng)味等有較好的影響。但目前關(guān)于微生物發(fā)酵飼料在豬上的研究大多是在生長育肥豬和母豬上進(jìn)行，對斷奶仔豬的研究報(bào)道還相對較少，且微生物發(fā)酵飼料的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)及產(chǎn)品質(zhì)量不夠統(tǒng)一（隋潔等，2019）。因此，本試驗(yàn)通過研究日糧中添加微生物發(fā)酵菌液對斷奶仔豬生長性能、腹瀉率以及腸道微生物的影響，以期為微生物發(fā)酵菌液替代抗生素及其在飼料中的合理利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用微生物發(fā)酵菌液為山東寶來利來生物工程股份有限公司提供，所含有的微生物種類主要為：植物乳桿菌LP、戊糖片球菌PP、枯草芽孢桿菌B7348、枯草芽孢桿菌N9、丁酸梭菌Cb、酵母菌及其培養(yǎng)物、絲狀真菌（米曲霉、黑曲霉）及其培養(yǎng)物、抗菌肽CEC-38、有機(jī)酸等，活菌總數(shù)≥5.0×108CFU/g。

1.2 試驗(yàn)動物及試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)以斷奶仔豬為試驗(yàn)對象，選擇28日齡健康“杜×長×大”三元雜交斷奶仔豬32頭。隨機(jī)分成4組，每組2個重復(fù)，每個重復(fù)4頭豬。A組為對照組（基礎(chǔ)日糧），B組為基礎(chǔ)日糧+1%微生物發(fā)酵菌液，C組為基礎(chǔ)日糧+1%微生物發(fā)酵菌液+100 mg土霉素鈣，D組為基礎(chǔ)日糧+100 mg土霉素鈣。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)期仔豬自由采食和飲水。為確保試驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)和科學(xué)性，試驗(yàn)期間生病仔豬不使用抗生素類藥物進(jìn)行治療；豬場安排養(yǎng)殖管理人員定時巡場，觀察豬只的采食和生理狀態(tài)，記錄仔豬腹瀉情況。做好消毒及衛(wèi)生工作，保證試驗(yàn)場地的清潔衛(wèi)生。

1.4 試驗(yàn)日糧及營養(yǎng)水平 基礎(chǔ)日糧為豬場自配日糧，飼料配方參照NRC（2012）《豬營養(yǎng)需要》（第11版）進(jìn)行配制，日糧組成及營養(yǎng)水平如表1所示。

表1 基礎(chǔ)日糧的組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.5 測定指標(biāo)及方法

1.5.1 生產(chǎn)性能 試驗(yàn)期間準(zhǔn)確記錄每個重復(fù)仔豬每天的采食量，用于計(jì)算每頭仔豬的平均日采食量；分別于試驗(yàn)第1天和28天的早上進(jìn)行空腹稱重，用于計(jì)算豬只平均日增重，并根據(jù)平均采食量和日增重計(jì)算料重比。

1.5.2 腹瀉率 每天按時對試驗(yàn)豬舍進(jìn)行巡視，觀察豬只的精神狀態(tài)、健康情況及糞便排出情況，并做好記錄。仔豬腹瀉率的統(tǒng)計(jì)，以組為單位計(jì)算腹瀉頻率和腹瀉指數(shù)，其中腹瀉頻率=（腹瀉仔豬數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（試驗(yàn)豬只頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）；腹瀉指數(shù)采用Kelly等（1990）的方法進(jìn)行評分，腹瀉指數(shù)=糞便評分之和/試驗(yàn)仔豬總頭數(shù)。腹瀉程度評分標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2 腹瀉程度評分標(biāo)準(zhǔn)

1.5.3 仔豬腸道pH和菌群的測定 在試驗(yàn)第28天上午晨飼后，按照微生物試驗(yàn)采樣要求，各組取體重相近的仔豬2頭，觀察到仔豬開始出現(xiàn)排便反應(yīng)，戴好無菌手套接住糞便，采集糞便中段3～5 cm的樣品5 g左右，放入無菌袋中待檢。收集好全部糞便樣品后，將收集到的糞便，裝入滅菌的離心管，測定其pH及每克直腸內(nèi)容物中乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌的數(shù)量。

1.5.4 仔豬糞便含水量和大腸桿菌數(shù)量的測定在第28天上午晨飼后，按照微生物試驗(yàn)采樣要求從每一處理組中隨機(jī)收集4個糞便樣品，測定糞便中的含水量及大腸桿菌數(shù)量指標(biāo)。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel（2019）進(jìn)行初步整理后，采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)軟件中的MIXED程序進(jìn)行單因素方差分析，每個重復(fù)為1個試驗(yàn)單元，并用PDIFF法進(jìn)行組間差異比較。P＜0.05表示差異顯著，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 微生物發(fā)酵菌液對斷奶仔豬生長性能的影響 由表3可知，各處理間平均日采食量差異不顯著（P＞0.05）；與對照組（A組）和抗生素組（D組）相比，添加微生物發(fā)酵菌液（B組）或添加微生物發(fā)酵菌液+抗生素（C組）顯著提高了斷奶仔豬的ADG（P＜0.05），分別比對照組提高了16.43%和14.65%；B組和C組料重比顯著降低（P＜0.05），分別降低了16.58%和16.06%；而A組和D組之間的日增重和料重比均差異不顯著（P＞0.05）。

表3 微生物發(fā)酵菌液對斷奶仔豬生長性能的影響

2.2 微生物發(fā)酵菌液對斷奶仔豬腹瀉情況的影響 從圖1可以看出，在斷奶仔豬日糧中添加微生物發(fā)酵菌液或土霉素鈣后，斷奶仔豬的腹瀉頻率和腹瀉指數(shù)均顯著低于對照組（P＜0.05），且單獨(dú)添加1%微生物發(fā)酵產(chǎn)品的B組效果最好，優(yōu)于單純添加土霉素鈣的D組和添加微生物發(fā)酵菌液+抗生素的C組。

圖1 微生物發(fā)酵菌液對斷奶仔豬腹瀉情況的影響

2.3 微生物發(fā)酵菌液對腸道pH、直腸微生物菌群數(shù)量的影響 由表4可知，各試驗(yàn)組直腸內(nèi)容物的pH均低于對照組（A組），其中B組與對照組（A組）相比，添加微生物發(fā)酵菌液可顯著降低斷奶仔豬直腸pH（P＜0.05），其余各組間pH差異不顯著（P＞0.05）；從直腸中微生物菌群數(shù)量變化可以看出，日糧添加微生物發(fā)酵菌液（B和C組）可顯著增加斷奶仔豬直腸有益菌（雙歧桿菌和乳酸桿菌）的數(shù)量（P＜0.05），且B組雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量分別提高了24.24%和30.61%，C組雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量分別提高了19.39%和24.49%，抗生素組（D組）與對照組差異不顯著（P＞0.05）；添加微生物發(fā)酵菌液和抗生素（B、C、D組）均可顯著降低了仔豬直腸大腸桿菌數(shù)量（P＜0.05），但對雙歧桿菌和乳酸桿菌的生長繁殖未能起到明顯的改善作用。

表4 微生物發(fā)酵菌液對直腸pH和微生物菌群數(shù)量的影響

2.4 微生物發(fā)酵菌液對斷奶仔豬糞便含水量及微生物數(shù)量的影響 由圖2可知，各試驗(yàn)組仔豬糞便的平均含水量均低于對照組（A組），其中單純添加微生物發(fā)酵菌液B組的糞便平均含水量最低，其顯著低于對照組（P＜0.05），比對照組減少了23.78%。

圖2 微生物發(fā)酵菌液對斷奶仔豬糞便含水量的影響

從圖3可知，各試驗(yàn)組的大腸桿菌平均數(shù)量均顯著低于對照組，分別比對照組減少了40.79%、51.32%和63.18%，但各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。

圖3 動物糞便中大腸桿菌數(shù)量的分析

3 討論

仔豬在斷奶后，機(jī)體所需營養(yǎng)來源由母乳轉(zhuǎn)變?yōu)轱暳蠒a(chǎn)生斷奶應(yīng)激，進(jìn)而導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)腹瀉、生長性能低、機(jī)體抗病力弱等問題（黃杏秀等，2020）。賀晨晨（2018）研究發(fā)現(xiàn)，益生菌發(fā)酵飼料可促進(jìn)斷奶仔豬的生長發(fā)育，提高仔豬對營養(yǎng)物質(zhì)的消化率以及免疫能力。宣海鵬（2019）試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼喂發(fā)酵日糧后，斷奶仔豬的ADFI和ADG均顯著增加。劉世雄（2020）研究表明，復(fù)合菌培養(yǎng)物的添加使斷奶公羔羊ADG提高了13.39%，料重比降低了10.33%。黃杏秀等（2020）研究報(bào)道，在斷奶仔豬日糧中添加2%和5%的微生物發(fā)酵飼料可顯著提高斷奶仔豬的ADG，降低料重比。在本試驗(yàn)中，添加微生物發(fā)酵菌液或微生物發(fā)酵菌液+抗生素后，斷奶仔豬的ADG分別比對照組提高了16.43%和14.65%，料重比分別降低了16.58%和16.06%，與上述研究結(jié)果一致，表明微生物發(fā)酵菌液可替代抗生素提高斷奶仔豬的生長性能。而添加微生物發(fā)酵菌液提高斷奶仔豬的生長性能可能是由于日糧中的營養(yǎng)物質(zhì)被微生物發(fā)酵后更易消化吸收，進(jìn)而促進(jìn)動物生長（劉世雄，2020；宣海鵬，2019）。

李旋亮等（2014）與陶蕾等（2015）研究報(bào)道，發(fā)酵飼料可以改善斷奶仔豬腸黏膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)，有助于減少仔豬腹瀉和增強(qiáng)對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。Peter（2008）發(fā)現(xiàn)，飼料接種乳酸發(fā)酵后，改善了飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的可利用性，并降低了抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)和霉菌毒素的水平。黃杏秀等（2020）在斷奶仔豬上的研究顯示，飼喂5%的發(fā)酵飼料可以顯著降低斷奶仔豬的腹瀉率。盧珍蘭等（2014）研究表明，在生長育肥豬日糧中添加20%~30%微生物發(fā)酵玉米秸稈飼料能夠滿足育豬只的生長需要，且能夠降低豬只的腹瀉率及死亡率。朱昌友等（2014）和Canibe等（2012）的研究指出，造成仔豬腹瀉的主要原因是其腸道微生物菌群因多種原因處于不平衡狀態(tài)，在使用微生物發(fā)酵制劑后，一方面微生物發(fā)酵制劑中的有益菌生長代謝，造成了動物體內(nèi)的厭氧環(huán)境，有利于厭氧微生物的生長繁殖，增加了腸道內(nèi)有益菌的比例，另一方面是由于其中的地衣芽孢桿菌對病原微生物的拮抗和抑制作用，使致病菌的生長受到抑制，從而降低了有害菌的比例，最終，在仔豬消化道內(nèi)建立起有益的微生態(tài)平衡，降低糞便中的水分，從而降低仔豬腹瀉率。本試驗(yàn)中，在斷奶仔豬的日糧中添加微生物發(fā)酵菌液或土霉素鈣后，斷奶仔豬的腹瀉頻率和腹瀉指數(shù)均顯著低于對照組，且試驗(yàn)表明，單獨(dú)添加1%微生物發(fā)酵產(chǎn)品的B組效果最好，其糞便含水量顯著低于對照組，且腹瀉情況也優(yōu)于其他處理組，該試驗(yàn)結(jié)果與黃杏秀等（2020）、盧珍蘭等（2014）等的研究結(jié)論一致。Demecková等（2002）研究表明，飼喂發(fā)酵液體飼料的母豬排泄的糞便中乳酸菌數(shù)量顯著增高，大腸菌群數(shù)量顯著低于飼喂干顆粒飼料豬只。Forestie等（2001）研究表明，乳酸桿菌可以抑制大腸桿菌和沙門氏菌等致病菌附著到腸細(xì)胞上，與病原菌發(fā)生競爭性拮抗作用，從而限制致病菌在腸道中的生長。Canibe等（2003）試驗(yàn)報(bào)道，生長育肥豬飼喂發(fā)酵液體飼料后導(dǎo)致胃液pH從4.4降低到了4.0，并提高了胃液中乳酸濃度。Missotten等（2016）對微生物發(fā)酵菌液產(chǎn)品進(jìn)行的研究顯示，微生物發(fā)酵菌液中富含有乳酸、乙酸和乙醇等物質(zhì)，降低了飼料的pH，而低pH可抑制病原微生物在飼料中的生長繁殖。在本試驗(yàn)中，微生物發(fā)酵菌液的添加降低了仔豬直腸內(nèi)容物的pH和直腸大腸桿菌數(shù)量，增加了直腸有益菌（雙歧桿菌和乳酸桿菌）的數(shù)量，且顯著降低了糞便大腸桿菌數(shù)量，該結(jié)果與Demecková等（2002）和Canibe等（2003）的研究結(jié)果一致。表明微生物發(fā)酵菌液的添加對斷奶仔豬的腹瀉情況及腸道pH和微生物區(qū)系均有改善作用，其中添加1%微生物發(fā)酵菌液的B組效果最好。

4 結(jié)論

使用添加1%微生物發(fā)酵菌液的日糧飼喂斷奶仔豬，可以提高仔豬的生長性能、增加腸道有益微生物菌群數(shù)量、降低大腸桿菌數(shù)量及腸道pH，并降低腹瀉率。因此，在本試驗(yàn)條件下，所添加的微生物發(fā)酵菌液能夠起到替代抗生素的效果。