丁國(guó)偉，李甜甜，徐萍，潘晨，王設(shè)市，魏榮榮，榮雪路，范娟

(揚(yáng)州優(yōu)邦生物藥品有限公司，江蘇 揚(yáng)州 225008)

豬細(xì)小病毒(porcine parvovirus，PPV)屬于細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬，病毒粒子為二十面體等軸對(duì)稱，有2～3 個(gè)衣殼蛋白，32 個(gè)殼粒，呈圓形，無(wú)囊膜，直徑18～26 nm；病毒核酸為單股DNA，大小為5 kb。PPV 具有血凝特性，可凝集豚鼠、小鼠、人、猴和雞的紅細(xì)胞。PPV 只有一個(gè)血清型，目前已經(jīng)有許多PPV 分離株，按照其致病性和組織嗜性可分為5 個(gè)類型[1]，包括弱毒株、強(qiáng)毒株、皮炎型、腸炎型和呼吸道型。其中，PPV 弱毒株(如PPV NADL-2 株) 為非致病性毒株，懷孕母豬感染后不能通過(guò)胎盤感染胎兒[2]。PPV 強(qiáng)毒株(如PPV NADL-8 株) 可引起感染母豬發(fā)生病毒血癥，并能穿過(guò)胎盤屏障，使胎兒致病或致死[2-4]。PPV 皮炎型毒株(如 PPV Kresse 株)能引起皮炎，且使免疫不完全的胎兒致死，具有高致病性[5-6]。豬細(xì)小病毒具有穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，能抗乙醚、氯仿等脂溶劑，對(duì)酸、堿抵抗力強(qiáng)，對(duì)高溫不敏感，是一種極難消毒處理的病毒。

豬細(xì)小病毒病是由PPV 引起的一種母豬繁殖障礙(reproductive disorder) 病，發(fā)病母豬常表現(xiàn)為懷孕母豬發(fā)生流產(chǎn)、死產(chǎn)、胚胎死亡和胎兒木乃伊化，而母豬本身并不表現(xiàn)臨床癥狀，其他豬感染后也無(wú)明顯的臨床癥狀[7]。本病一般呈地方性流行或散發(fā)，有時(shí)也呈大面積暴發(fā)，多見于豬群初次感染，即初產(chǎn)母豬臨床癥狀明顯。自1966 年發(fā)現(xiàn)第1 例豬細(xì)小病毒病以來(lái)，截止到1995 底，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，世界上47 個(gè)國(guó)家相繼報(bào)道過(guò)此病，這些國(guó)家遍布世界，由此可以推測(cè)PPV 可能普遍存在于世界上各國(guó)家，只是發(fā)現(xiàn)早晚的問題。1983年，我國(guó)首次在上海分離到PPV 后，相繼在四川、黑龍江、天津、湖北等地也分離到該病毒。本病常見于初產(chǎn)母豬，其流行具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：⑴混合感染。PPV 可以和多種病毒發(fā)生混合感染，包括豬乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、豬圓環(huán)病毒 2型(porcine circovirus type 2，PCV2)、豬偽狂犬病毒(pseudorabies virus，PRV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV) 以及豬瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV) 等。此外，PPV還可以與某些細(xì)菌、寄生蟲等混合感染，如沙門菌、大腸桿菌和附紅細(xì)胞體原蟲等。⑵持續(xù)感染。PPV 主要通過(guò)呼吸道和消化道傳播，易感豬通過(guò)接觸發(fā)病豬的分泌物、排泄物及污染的器具等感染本病，豬場(chǎng)一旦發(fā)病將連續(xù)幾年出現(xiàn)母豬繁殖障礙。PPV 的傳染源比較廣泛，發(fā)病豬和帶毒豬是主要傳染源，妊娠母豬感染后可通過(guò)胎盤將該病毒傳給胎兒，子宮內(nèi)感染的胎兒可帶毒至少9 周。PPV 也可感染公豬，配種時(shí)易傳染給母豬。PPV 既可水平傳播，又可垂直傳播，使被感染豬群表現(xiàn)為持續(xù)感染。⑶流行范圍廣且危害未減。流行病學(xué)調(diào)查表明，PPV 的流行范圍廣，在我國(guó)很多地方的豬群中流行。PPV 也是導(dǎo)致妊娠母豬的胚胎和胎兒死亡的主要病原體，感染后主要危害早期的胎兒[8]。近年來(lái)，豬細(xì)小病毒病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗

PPs01、PPs02、PPs03 3 批次豬細(xì)小病毒桿狀病毒載體滅活疫苗(PPV rPP03 株)，由揚(yáng)州優(yōu)邦實(shí)驗(yàn)室制備。

1.1.2 試驗(yàn)豬

試驗(yàn)所用的后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬均來(lái)自鎮(zhèn)江丹徒云立牧業(yè)、揚(yáng)州久旺畜牧養(yǎng)殖場(chǎng)、內(nèi)蒙古呼和浩特市土左旗種豬場(chǎng)、賽罕區(qū)種豬場(chǎng)。

1.1.3 其他耗材

1.0%豚鼠紅細(xì)胞懸液、25%高嶺土、豬細(xì)小病毒凝集抗原均由揚(yáng)州優(yōu)邦實(shí)驗(yàn)室制備。

1.2 方法

1.2.1 后備母豬的免疫

⑴免疫一次后備母豬：5～6 月齡后備母豬12 頭，隨機(jī)分為3 組，每組4 頭，分別頸部肌內(nèi)免疫實(shí)驗(yàn)室試制的3 批次疫苗，1 mL/ 頭，另2 頭后備母豬作為空白對(duì)照。分別于免疫前、免疫后14 d、28 d、2 個(gè) 月、3 個(gè) 月、4 個(gè) 月、5 個(gè) 月、6 個(gè) 月采血，通過(guò)血凝抑制(hemagglutination inhibition，HI)試驗(yàn)檢測(cè)PPV 的血清抗體。

⑵免疫二次后備母豬：5～6 月齡后備母豬12 頭，隨機(jī)分為3 組，每組4 頭，分別頸部肌內(nèi)免疫實(shí)驗(yàn)室試制的3 批次疫苗，1 mL/ 頭，另2 頭后備母豬作為空白對(duì)照。首次免疫14 d 后，以相同的劑量和方法加強(qiáng)免疫一次。分別于二次免疫前、二次免疫后14 d、28 d、2 個(gè)月、3 個(gè)月、4 個(gè)月、5 個(gè)月、6 個(gè)月、7 個(gè)月、8 個(gè)月采血，通過(guò)HI 試驗(yàn)檢測(cè)PPV 的血清抗體。

1.2.2 經(jīng)產(chǎn)母豬的免疫

未懷孕的經(jīng)產(chǎn)母豬9 頭，隨機(jī)分為3 組，每組3 頭，分別頸部肌內(nèi)免疫實(shí)驗(yàn)室試制的3批次疫苗，1 mL/頭，另2 頭經(jīng)產(chǎn)母豬作為空白對(duì)照。分別于免疫前、免疫后14 d、28 d、2 個(gè)月、3 個(gè)月、4 個(gè)月、5 個(gè)月、6 個(gè)月、7個(gè)月、8 個(gè)月采血，通過(guò)HI 試驗(yàn)檢測(cè)PPV 的血清抗體。

1.2.3 種公豬的免疫

4～6 月齡的種公豬9 頭，隨機(jī)分為3 組，每組3 頭，分別頸部肌內(nèi)免疫實(shí)驗(yàn)室試制的3 批次疫苗，1 mL/ 頭，另2 頭種公豬作為對(duì)照。分別于免疫前、免疫后14 d、28 d、2 個(gè)月、3 個(gè)月、4 個(gè)月、5 個(gè)月、6 個(gè)月、7 個(gè)月、8 個(gè)月采血，通過(guò)HI 試驗(yàn)檢測(cè)PPV的血清抗體。

2 結(jié)果

2.1 后備母豬免疫后的PPV 抗體消長(zhǎng)規(guī)律

后備母豬免疫后PPV 抗體消長(zhǎng)結(jié)果見圖1。由圖1 可知，初產(chǎn)母豬在5～6 月齡時(shí)PPV 母源抗體基本消失，疫苗二次免疫組母豬的抗體水平較一次免疫組母豬的抗體水平峰值高，且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。一次免疫組母豬免疫后28 d 的PPV 血清抗體水平上升至幾何平均值為6.5log2～7.5log2，免疫后2～3 個(gè)月為抗體水平高峰期，免疫后4 個(gè)月抗體水平有所下降，免疫后6 個(gè)月PPV 血清抗體幾何平均值降至5.5log2～6.5log2，每頭后備母豬的抗體幾何平均值均不低于1 ∶32。二次免疫組，二次免疫后14 d，PPV 抗體含量即達(dá)到較高水平，至免疫后3 個(gè)月抗體水平達(dá)到最高，三組抗體幾何平均值為9.5log2～10.0log2，持續(xù)至免疫后6 個(gè)月時(shí)，抗體水平降低較為明顯，抗體幾何平均值為6.75log2～7.25log2；至免疫后7 個(gè)月，各組抗體幾何平均值仍維持在6log2以上，至免疫后8 個(gè)月時(shí)，部分豬PPV血清抗體降至5log2。

2.2 經(jīng)產(chǎn)母豬免疫后的PPV 抗體消長(zhǎng)規(guī)律

經(jīng)產(chǎn)母豬免疫后的PPV 抗體消長(zhǎng)結(jié)果見圖2。

由圖2 可知，經(jīng)產(chǎn)母豬免疫接種前的基礎(chǔ)抗體水平為5log2～7log2(1 ∶32～1 ∶128)，免疫14 d 后PPV 抗體水平上升緩慢，免疫28 d 后PPV 抗體水平上升明顯，免疫后2～4個(gè)月為PPV 抗體水平高峰期，血清HI 抗體效價(jià)可達(dá)8log2～11log2(1 ∶256～1 ∶2 048)，免疫后6～8 個(gè)月逐漸下降，免疫后8 個(gè)月時(shí)3組抗體水平幾何平均值降至6.0log2～6.3log2，個(gè)別豬降至1 ∶32。

2.3 種公豬免疫后的PPV 抗體消長(zhǎng)規(guī)律

種公豬免疫后的PPV 抗體消長(zhǎng)結(jié)果見圖3。由圖3 可知，4～6 月齡的種公豬PPV 母源抗體基本消失，疫苗免疫后28 d 抗體水平上升至1 ∶64 以上，免疫后2～4 個(gè)月為抗體水平高峰期，各組血清抗體水平幾何平均值最高可達(dá)9.3log2，免疫后5 個(gè)月抗體水平緩慢下降，至免疫后6 個(gè)月時(shí)，各組抗體水平幾何平均值為6.3log2～6.7log2，免疫后7 個(gè)月時(shí)，個(gè)別豬抗體水平降至5log2(1 ∶32)。

3 討論

后備母豬免疫組二次的抗體水平峰值較免疫一次組的抗體水平峰值高，且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。免疫一次組母豬免疫后28 d，PPV 抗體水平開始緩慢上升，免疫后2～3 個(gè)月為PPV抗體水平高峰期，隨后開始緩慢下降，至免疫后6 個(gè)月時(shí)血清抗體水平幾何平均值降至5.5log2～6.5log2；免疫二次組，二次免疫后PPV 抗體水平快速上升，免疫后2～5 個(gè)月為抗體水平高峰期，抗體效價(jià)比免疫一次組母豬的高1～2 個(gè)滴度，免疫后7 個(gè)月，各組母豬的PPV 抗體水平幾何平均值仍維持在6log2以上。

經(jīng)產(chǎn)母豬PPV 抗體消長(zhǎng)趨勢(shì)同后備母豬免疫二次組的，免疫后14 d PPV 血清抗體水平幾何平均值不低于1 ∶64，免疫后28 d PPV抗體水平明顯上升，免疫后2～4 個(gè)月為抗體水平高峰期，免疫后6～8 個(gè)月抗體水平逐漸下降，免疫后8 個(gè)月時(shí)3 組母豬的PPV 抗體水平幾何平均值降至6.0log2～6.3log2，個(gè)別母豬降至1 ∶32。

種公豬免疫后28 d PPV 抗體水平上升至1 ∶64 以上，免疫后2～4 個(gè)月為抗體水平高峰期，各組母豬PPV 血清抗體水平幾何平均值為8.0log2～9.3log2，免疫后5 個(gè)月開始抗體水平緩慢下降，至免疫后6 個(gè)月時(shí)，各組母豬抗體水平幾何平均值為6.3log2～6.7log2，免疫后7 個(gè)月時(shí)，個(gè)別母豬抗體水平降至5log2(1 ∶32)。

4 結(jié)論

上述結(jié)果顯示，各組母豬免疫后除后備母豬免疫一次外，其他各組母豬在免疫后7～8 個(gè)月時(shí)，PPV 抗體水平仍可維持在5log2～6log2以上，由《最小免疫劑量與抗體攻毒保護(hù)相關(guān)性》報(bào)告可知，PPV 的血清抗體水平不低于1 ∶32 時(shí)，可使母豬產(chǎn)生100%的保護(hù)效力，因此綜合上述結(jié)果，并考慮到臨床實(shí)際應(yīng)用中有許多不確定性因素，可能導(dǎo)致免疫效果無(wú)法同實(shí)驗(yàn)室免疫效果相同，暫制定不同用途豬的免疫程序如下：后備母豬5～6 月齡免疫1 次，2～3 周加強(qiáng)免疫1 次；經(jīng)產(chǎn)母豬于配種前2～4 周免疫1 次，種公豬每6 個(gè)月免疫1 次。