周小微

福建醫(yī)科大學附屬南平第一醫(yī)院檢驗科，福建南平 353000

正常情況下陰道微生態(tài)環(huán)境是由正常陰道解剖結構、內(nèi)分泌周期的變化、陰道局部免疫系統(tǒng)、陰道各種菌群四大部分組成[1-2]。正常情況下，陰道內(nèi)有大量乳酸桿菌，同時也含有少量機會致病菌如棒狀菌、非溶血性鏈球菌、腸球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、加德納菌、類桿菌和假絲酵母菌等。當機體抵抗力低下、內(nèi)分泌水平變化、病原微生物感染等原因破壞這種平衡后，雜菌或機會致病菌可增多，同時白細胞及膿細胞大量出現(xiàn)，此時陰道清潔度下降，可繼發(fā)陰道感染[3-4]。通過對陰道分泌物涂片進行革蘭氏染色，檢查其優(yōu)勢菌、菌群多樣性、菌群密集度及白細胞數(shù)，對陰道微生態(tài)進行評估，這是目前臨床上常用的方法[5-6]。國內(nèi)沈莉等[7]研究報道應用功能檢測可以替代革蘭氏染色涂片檢查，但本研究通過收集2960例患者的陰道分泌物進行細菌性陰道炎（bacterial vaginosis，BV）、需氧菌性陰道炎（aerobic vaginitis，AV）六項聯(lián)合檢測，發(fā)現(xiàn)六項聯(lián)合檢測判定AV尚不能替代革蘭氏染色鏡檢，現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建醫(yī)科大學附屬南平第一醫(yī)院（我院）2021年1—5月婦科門診2960例患者的陰道分泌物檢查。本研究對所有納入患者的陰道微生態(tài)情況評估檢測方法均采用陰道炎六項聯(lián)合檢測和革蘭氏染色涂片。本研究均經(jīng)患者知情同意，同時取得我院醫(yī)學倫理委員會委員批準同意。入選患者年齡19～60歲，平均（35.69±3.62）歲；病程1～5個月，平均（2.48±0.37）個月。

納入標準：①我院婦科門診陰道分泌物檢測患者，均有過性生活；②標本采集前禁性生活3 d；③標本采集前1周未行陰道灌洗、2周未使用干擾檢測結果相關藥物；④月經(jīng)干凈≥3 d；⑤無泌尿系統(tǒng)疾病。排除標準：①患有嚴重器質性或代謝性疾病者；②3 d內(nèi)進行陰道灌洗；③血性標本。本研究尊重每位患者的隱私權并進行資料保密。

1.2 檢查方法

1.2.1 樣本采集 采用無菌拭子或無菌棉簽采集陰道分泌物，拭子或棉簽于陰道深部、穹窿后部或宮頸口進行采集，置于無菌試管中迅速送檢，標本60 min內(nèi)檢測完成。

1.2.2 主要儀器及試劑 陰道微生態(tài)檢測試劑盒（山東仕達思生物產(chǎn)業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：21021101）；革蘭氏染色試劑包括龍膽紫、碘溶液、脫色液和沙黃溶液（珠海貝索生物技術有限公司，生產(chǎn)批號：C200402）；生物顯微鏡（仕達思公司，型號：UNIT-700）。

1.2.3 操作方法 （1）檢測方法。①濕片顯微鏡鏡檢：對清潔度、真菌、陰道滴蟲、線索細胞進行檢查，操作方法參照《全國臨床檢驗操作規(guī)范》[8]；②革蘭氏染色涂片鏡檢：對優(yōu)勢菌、菌群多樣性、菌群密集度及炎癥反應進行檢查[9]；③陰道炎六項聯(lián)合檢測：包括陰道分泌物的pH酸堿度、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、唾液酸苷酶、過氧化氫濃度、白細胞脂酶六項指標。（2）陰道微生態(tài)評價標準。菌群正常：菌群的多樣性、密集度為Ⅱ～Ⅲ級；革蘭陽性大桿菌為優(yōu)勢菌；炎性反應為白細胞0～5個/HP；清潔度為Ⅰ～Ⅱ度。菌群失調(diào)：革蘭陽性大桿菌減少或缺失，或被革蘭陽性小桿菌、革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌所代替。菌群抑制：優(yōu)勢菌缺失、菌群多樣性≤Ⅰ級或完全沒有細菌。菌群過度增殖：革蘭陽性大桿菌為優(yōu)勢菌，菌群密集度增高，在Ⅲ～Ⅳ級之間，革蘭陽性大桿菌過度增殖[10]。

1.3 觀察指標及評價標準

①分析BV、AV兩種檢查方法的最終結果；②分析陰道炎六項聯(lián)合檢測最終結果；③分析菌群正常、異常預成酶陽性率。符合率=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%。特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%。敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，應用t檢驗；計數(shù)資料以[n（%）]表示，應用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 陰道炎六項聯(lián)合檢測結果分析

菌群正常1200例（40.54%），菌群抑制239例（8.07%），菌群失調(diào)1112例（37.57%）；菌群過度增殖59例（1.99%），病原體被檢出350例（11.83%），詳見表1。

表1 陰道微生態(tài)六項指標聯(lián)合檢測結果分析[n（%）]

2.2 陰道菌群正常、異常預成酶陽性率分析

菌群正常預成酶陽性率低于菌群異常預成酶陽性率，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）；但菌群正常、異常凝固酶陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。見表2。

表2 正常、異常菌群預成酶陽性率分析

2.3 兩種方法檢測BV的結果分析

兩種方法檢測BV結果的符合率為94.76%，陰道炎六項聯(lián)合檢測的陽性率為13.21%，與革蘭氏染色涂片鏡檢的13.55%比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=2.532，P=0.126）。陰道炎六項聯(lián)合檢測的符合率為98.91%，特異度為99.57%，敏感度為94.76%。見表3。

表3 兩種方法檢測厭氧性陰道炎的結果分析

2.4 兩種方法檢測AV的結果分析

兩種方法檢測AV結果的總符合率為95.90%。陰道炎六項聯(lián)合檢測法陽性率為7.60%，與革蘭氏染色涂片鏡檢的8.61%相比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.500，P=0.006）。見表4。

表4 兩種方法檢測AV的結果分析

3 討論

女性陰道微生態(tài)是由陰道解剖結構、陰道微生物群、內(nèi)分泌系統(tǒng)以及陰道局部免疫系統(tǒng)共同組成的一個復雜的微生態(tài)系統(tǒng)。女性陰道是一個處于相對開放狀態(tài)的生態(tài)環(huán)境，健康女性陰道內(nèi)有乳酸桿菌等數(shù)種微生物存在，這些微生物與宿主之間相互協(xié)調(diào)、相互制約、相互作用，從而維持陰道微生態(tài)的動態(tài)平衡[11-12]。健康女性陰道內(nèi)以乳酸桿菌為優(yōu)勢菌，該菌可將陰道鱗狀上皮細胞內(nèi)的糖原分解為乳酸，使陰道維持在酸性環(huán)境，即pH＜4.5，可抑制機會致病菌繁殖[13]。機體內(nèi)外因素改變（如不潔性生活、惡性腫瘤疾病等）容易影響陰道微生態(tài)的平衡，一旦陰道內(nèi)微生物在種類、數(shù)量、比例上發(fā)生改變，就會導致陰道菌群失調(diào)。菌群失調(diào)可抑制作為優(yōu)勢菌的乳酸桿菌生長或導致乳酸桿菌缺失，必然造成大量機會致病菌繁殖，致使女性生殖道感染。準確的陰道微生態(tài)檢測能為臨床診療提供依據(jù)，如何有效地進行陰道微生態(tài)檢測，是醫(yī)務工作者共同關注的問題。

陰道微生態(tài)檢測包括功能學檢測和形態(tài)學檢測，臨床上評價方法以形態(tài)學檢測為主[14]。形態(tài)學檢測是通過革蘭氏染色后顯微鏡鏡檢，檢查內(nèi)容包括白細胞、膿細胞、病原菌、優(yōu)勢菌、菌群密集度、菌群多樣性等，檢測結果是進行陰道微生態(tài)情況判斷的主要依據(jù)[15]。陰道內(nèi)乳酸桿菌減少，優(yōu)勢菌為加德納菌、動彎桿菌、擬桿菌等厭氧菌時，臨床上稱為BV；優(yōu)勢菌為大腸埃希菌、鏈球菌、腸球菌等需氧菌時，臨床上稱為AV[16]。

陰道炎六項聯(lián)合檢測內(nèi)容包括pH、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、唾液酸苷酶、過氧化氫濃度、白細胞脂酶。其中pH反映陰道內(nèi)環(huán)境的酸堿度，健康女性陰道內(nèi)環(huán)境偏酸性；β-葡萄糖醛酸苷酶是一種酸性溶酶體酶，可水解內(nèi)膜基底膜主要的成分蛋白多糖，對陰道內(nèi)膜的損害起到提示作用[5]；唾液酸苷酶反映厭氧菌代謝產(chǎn)物的情況，輔助診斷細菌性陰道炎；過氧化氫可檢測乳酸桿菌的代謝產(chǎn)物；白細胞酯酶結果反映陰道黏膜炎癥的情況。

本研究應用陰道炎六項聯(lián)合檢測的檢測結果顯示，菌群正常1200例（40.54%），菌群抑制239例（8.07%），菌群失調(diào)1112例（37.57%），菌群過度增殖59例（1.99%），病原體被檢出350例（11.83%）。提示檢測人群中59.46%出現(xiàn)陰道微生態(tài)失衡，甚至有11.83%的人檢測出致病菌，如滴蟲、真菌等。因此，女性陰道微生態(tài)的檢測應做普查。

本研究結果顯示，革蘭氏染色涂片鏡檢和陰道炎六項聯(lián)合檢測法檢測BV結果的總符合率94.76%，其中陰道炎六項聯(lián)合檢測法符合率為98.91%，特異度為99.57%，敏感度為94.76%，兩種方法的陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。提示陰道炎六項聯(lián)合檢測對診斷BV具有較高的可靠性。另外，該檢測方法操作簡便，符合臨床需求。

本研究結果顯示，革蘭氏染色涂片鏡檢和陰道炎六項聯(lián)合檢測法檢測AV結果的總符合率為95.9%，革蘭氏染色涂片鏡檢和陰道炎六項聯(lián)合檢測的AV陽性率分別為8.61%、7.60%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05），提示感染AV的人群比例相對較少，結果與王辰等[17]觀點一致，說明僅通過β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶等代謝酶類診斷AV的方法尚存在一定缺陷。其缺陷原因可能為一種代謝產(chǎn)物可由不同的微生物產(chǎn)生，或者一種微生物可產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，也可能存在不同代謝產(chǎn)物之間的交叉反應，從而影響檢測結果的準確性。目前陰道炎六項聯(lián)合檢測單獨應用于AV感染的判定存在一定缺陷，更具特異性的代謝產(chǎn)物作為檢測指標有待開發(fā)。本研究存在病例數(shù)不足及缺少多中心聯(lián)合檢測的局限性。

綜上所述，以形態(tài)學檢測為主，結合功能學檢測作為評價女性陰道微生態(tài)環(huán)境的依據(jù)可能是更好的選擇。