王繼蓮 李明源 周 茜 茹仙古麗·尤努斯 張 甜

（1喀什大學(xué)生命與地理科學(xué)學(xué)院，新疆 喀什 844000；2新疆帕米爾高原生物資源與生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 喀什 844000）

我國作為農(nóng)業(yè)大國，每年產(chǎn)生的固體有機(jī)廢棄物，如作物秸稈、尾菜、畜禽糞污等數(shù)量龐大［1-2］。這些低品位廢棄生物質(zhì)資源僅有小部分被科學(xué)利用，絕大多數(shù)被隨意棄置或就地焚燒，不僅浪費(fèi)資源，而且嚴(yán)重污染生態(tài)環(huán)境［3］。將這些農(nóng)業(yè)廢棄物變廢為寶，循環(huán)利用，是應(yīng)對環(huán)境問題，解決能源危機(jī)的重要手段。目前，對農(nóng)業(yè)廢棄物無害化、減量化、資源化的治理方式主要包括焚燒、堆肥、衛(wèi)生填埋、拆解法、化學(xué)法等［4］。

堆肥是在一定條件下，通過微生物的發(fā)酵作用，將有機(jī)固體廢棄物轉(zhuǎn)變成有機(jī)肥料的生物化學(xué)處理過程。堆肥終產(chǎn)品中含有作物必需的多種養(yǎng)分，是一種良好的土壤改良劑［5-6］。微生物作為堆肥過程的工作主體，其代謝活動(dòng)直接影響物質(zhì)轉(zhuǎn)化速率，且對木質(zhì)纖維素的充分降解是堆肥充分腐熟的關(guān)鍵［7-8］。在木質(zhì)纖維素中，纖維素、半纖維素和木質(zhì)素相互交聯(lián)形成牢固的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，尤其纖維素的不溶性和異質(zhì)性使其成為抗微生物和酶攻擊的屏障。但有些微生物可分泌多種纖維素酶，加速纖維素的分解轉(zhuǎn)化。如李林超等［9］結(jié)合剛果紅染色法、濾紙條崩解試驗(yàn)和纖維素酶活力測定，從玉米秸稈堆肥中篩選出3 株高效纖維素降解菌（GD16、C31 和C37），3 d 即可將濾紙條完全降解或崩解為不定形狀，分別歸屬為類芽孢桿菌（Paenibacillus pabuli）、放線菌（Streptomyces drozdowiczii）和黃麻鏈霉菌（Streptomyces corchorusii）；李娜等［10］根據(jù)透明圈和濾紙降解情況，從小興安嶺山區(qū)土壤中分離的低溫降解菌青霉菌（Penicilliumsp.）C1，15 d 內(nèi)對秸稈的降解率達(dá)55.6%。

篩選纖維素高效降解菌劑已成為有機(jī)固體廢棄物高效腐解的新途徑之一［11］。但當(dāng)前研究多聚焦單菌株的降解性能，而單菌株所產(chǎn)水解酶的種類和數(shù)量有限，應(yīng)對環(huán)境變化的緩沖能力不高，降解效果并不理想。復(fù)合菌系則是將不同類型的純培養(yǎng)物配伍組合，其酶系相比單菌株更均衡，可通過相互間的協(xié)同作用提升纖維素轉(zhuǎn)化率，降解覆蓋率更高［12］。因此，相對于單一降解菌的篩選和應(yīng)用而言，復(fù)合菌系的研究更值得關(guān)注。本研究擬從玉米秸稈堆肥中篩選高效纖維素降解菌，并基于菌株特性有效組配構(gòu)建復(fù)合菌系，分析復(fù)合菌系的產(chǎn)酶特性及其對纖維素的降解效率，以期為堆肥接種劑的開發(fā)及農(nóng)業(yè)廢棄物的循環(huán)再利用提供菌種資源。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品來源 采集新疆喀什地區(qū)玉米秸稈高溫期堆肥樣品，低溫條件運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，4 ℃冷藏箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 培養(yǎng)基 羧甲基纖維素鈉（carboxymethylcellulose，CMC）培養(yǎng)基：羧甲基纖維素鈉10 g·L-1、K2HPO41 g·L-1、NH4NO31 g·L-1、CaCl20.02 g·L-1、MgSO4·7H2O 0.2 g·L-1、FeCl3·6H2O 0.05 g·L-1、瓊脂20 g·L-1。

濾紙條液體培養(yǎng)基：（NH4）2SO41 g·L-1、MgSO4·7H2O 0.5 g·L-1、KH2PO41 g·L-1、酵母膏0.1 g·L-1、濾紙條（1 cm×4 cm）3條/三角瓶，pH值7.0。

玉米秸稈培養(yǎng)基：（NH4）2SO42 g·L-1、K2HPO42 g·L-1、MgSO4·7H2O 0.05 g·L-1、CaCO32 g·L-1、NaCl 0.2 g·L-1、玉米秸稈粉20 g·L-1。

產(chǎn)酶培養(yǎng)基：取2 g烘至恒重的玉米秸稈段（長度約2～3 cm），加100 mL營養(yǎng)液。營養(yǎng)液組分：KH2PO41 g·L-1、NaNO33 g·L-1、KCl 0.5 g·L-1、MgSO4·7H2O 0.5 g·L-1、FeCl3·6H2O 0.01 g·L-1。

1.2 纖維素降解菌初篩

取樣品1 g，溶于適量無菌水后28 ℃、150 r·min-1條件下振蕩2 d，制備含有秸稈腐化菌的富集液。吸取1 mL 富集液逐級(jí)稀釋，將10-7～10-4濃度的稀釋液均勻涂布于CMC培養(yǎng)基平板上，28 ℃培養(yǎng)24～36 h，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)。待菌落長出后，挑取形態(tài)顏色各異、菌落直徑較大的菌株反復(fù)劃線純化。純菌株用1 mg·mL-1剛果紅染液染色15～20 min，棄染液，加入1 mol·L-1NaCl 溶液，洗滌15 min 后測量菌落直徑（d）和降解圈直徑（D）。視D/d 較大者為高羧甲基纖維素酶（carboxymethyl cellulase，CMCase）活力菌株。

1.3 濾紙條崩解試驗(yàn)

濾紙的崩解能力表征了微生物所產(chǎn)各種纖維酶的綜合酶活力水平［13］。為進(jìn)一步復(fù)篩優(yōu)良菌株，將高CMCase 活力菌株的菌懸液按比例接種于100 mL 濾紙條液體培養(yǎng)基中，以不接種任何菌液為對照，置于恒溫?fù)u床中28 ℃、60 r·min-1條件下低速振蕩培養(yǎng)，定期觀察濾紙條斷裂情況。

1.4 拮抗試驗(yàn)

吸取各菌液0.5 mL涂布于CMC培養(yǎng)基平板上，將無菌濾紙條（1 cm×4 cm）在菌液中充分浸濕，然后平鋪于CMC 平板上，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d。參考張必周等［14］的方法，檢查濾紙條與CMC培養(yǎng)基周圍是否形成無菌區(qū)，有無菌區(qū)形成則表示兩菌株間有拮抗性，不能配伍。

1.5 復(fù)合菌系的構(gòu)建及纖維素酶活力測定

基于菌株的CMCase活力、濾紙條崩解能力及兼容性，設(shè)置xw1 等單菌株組，并以3～5 株菌為基礎(chǔ)，等體積混合構(gòu)建復(fù)合菌系。分別將單菌株和復(fù)合菌系按5%比例接種至100 mL產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，150 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng)5 d，12 000 r·min-1條件下離心，所得上清作為粗酶液進(jìn)行酶活力測定。

1.5.1 濾紙酶活力測定 參照薩如拉等［15］的方法，利用3，5-二硝基水楊酸（3，5-dinitrosalicylic acid，DNS）法制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別取單菌株和復(fù)合菌系的粗酶液0.2 mL，加入0.1 mol·L-1的醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH 值4.8）1 mL 和2 條1 cm×4 cm 的濾紙條，50 ℃水浴60 min。以滅活的酶液為對照，測定單菌株和復(fù)合菌系的濾紙纖維素酶（filter paper cellulase，F(xiàn)Pase）活力。在反應(yīng)條件下，每分鐘催化水解纖維素產(chǎn)生1μg葡萄糖所需的酶量為1個(gè)酶活力單位（U）。

1.5.2 酶的耐高溫性 秸稈在堆肥腐熟過程中會(huì)釋放大量熱量，產(chǎn)生高溫，影響菌劑的酶活力，因此設(shè)計(jì)試驗(yàn)驗(yàn)證復(fù)合菌劑所產(chǎn)纖維素酶的高溫耐受性。以濾紙條為底物，分別測定復(fù)合菌系在40、45、50、55、60、65 ℃等6個(gè)溫度下的FPase活力，分析其耐高溫性。

1.6 復(fù)合菌系的纖維素降解特性

1.6.1 濾紙腐解 以濾紙為直觀指標(biāo)，考察復(fù)合菌系構(gòu)建前后的纖維素分解能力差異。將復(fù)合菌系按一定比例接種到100 mL濾紙條液體培養(yǎng)基中，28 ℃、60 r·min-1條件下低速搖瓶培養(yǎng)。以不接菌為對照，定期觀察濾紙條崩解情況，對比分析復(fù)合菌群重構(gòu)前后的濾紙崩解效果。

1.6.2 秸稈降解試驗(yàn) 分別將單菌株和復(fù)合菌系接種到100 mL 玉米秸稈培養(yǎng)基中，以不接種任何菌系為對照（CK），28 ℃、150 r·min-1條件下培養(yǎng)發(fā)酵10 d。過濾發(fā)酵液，秸稈粉用蒸餾水反復(fù)沖洗3 次，隨后用稀酸溶液沖洗2次去除附著的菌體和CaCO3沉淀等，最后再用蒸餾水沖洗2次，80 ℃烘干至恒重，以失重率計(jì)為秸稈降解率［16］。

1.7 菌株鑒定

采用CW0552試劑盒（北京康為世紀(jì)生物科技股份有限公司）對優(yōu)良復(fù)合菌系中的單菌株進(jìn)行DNA提取。采用一對通用引物27F（5′-AGAGTTGATCATGGCTCAG-3′）和1492R（5′-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3′）［17］對16S rDNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 體系（50 μL）：模板1 μL，引物27F 和1492R（10 μmol·L-1）各1 μL，2×Taq MasterMix 25μL，加ddH2O 至50μL。測序結(jié)果在美國生物技術(shù)研究中心（National Center for Biotechnology，NCBI）數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST 比對，在GenBank 中尋找相似性最大菌株的基因序列進(jìn)行多重比對，用MEGA7.0 軟件包中的鄰接（Neighbor-Joining）算法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 纖維素降解菌株的分離

利用剛果紅染色法，從堆肥樣品中獲得29 株具有纖維素降解能力的分離物。對透明圈和菌落直徑比值D/d較大者進(jìn)一步篩選，最終得到11株高CMCase 活力菌株，如表1所示。

表1 纖維素降解菌的初篩Table 1 Screening of cellulose degrading microorganisms

2.2 不同菌株的濾紙條崩解效果

通過濾紙條崩解進(jìn)一步復(fù)篩優(yōu)良菌株，由表2可知，11 株高CMCase 活力菌株均能有效崩解濾紙條，但降解能力不同。菌株xw1 的降解能力最強(qiáng)，7 d 內(nèi)可將濾紙條崩解為近似糊狀；菌株xw3 次之，5 d 內(nèi)可將濾紙條崩解為不定形狀，11 d 完全崩解；菌株xw16和xw31 在7 d 內(nèi)才能將濾紙條崩解為不定形狀。其余菌株則在7～15 d 內(nèi)陸續(xù)使濾紙條軟化或降解為短片段，最長需20 d 才能將其完全崩解。而未接菌的對照組，濾紙條仍保持完整無破裂狀態(tài)，呈片狀堆積（圖1）。

表2 各菌株的濾紙崩解效果Table 2 Filter paper degradation effect of isolates

圖1 菌株培養(yǎng)5 d的濾紙條崩解效果Fig.1 Filter paper degradation effects of isolates cultivated for 5 d

2.3 菌株復(fù)配結(jié)果

菌株相互間的兼容性結(jié)果如表3所示，菌株xw1與xw5、xw14、xw23的相交處均形成了無菌區(qū)，說明它們之間存在拮抗作用，不能組合。同樣，xw3、xw5均與xw14、xw23有拮抗，x35與xw5、xw14、xw16有拮抗，不能復(fù)配。

表3 單菌株間的拮抗關(guān)系Table 3 Antagonistic relationship of isolates

綜合菌株的CMCase活力，濾紙條崩解能力及兼容性，以3～5 株菌為基礎(chǔ)進(jìn)行復(fù)配，共構(gòu)建了6 組復(fù)配菌系，分別為A（xw3、xw5、xw8、xw16、xw21），B（xw1、xw3、xw8），C（xw1、xw3、xw21、xw31），D（xw16、xw21、xw31），E（xw8、xw16、xw23），F(xiàn)（xw3、xw5、xw8、xw21、xw31）。

2.4 復(fù)合菌系纖維素酶活力測定

2.4.1 復(fù)合菌系的濾紙酶活力測定 濾紙酶活力是以濾紙為底物來測定纖維素酶對天然纖維素的總分解能力，是所有纖維素酶系共同作用結(jié)果的反應(yīng)，對菌株分解纖維素能力的評(píng)價(jià)更客觀，因此測定濾紙酶活力比較菌群構(gòu)建前后效果?？傮w上看，除復(fù)合菌系F外，其余復(fù)合菌系的酶活力均顯著高于單一菌株（P＜0.05），說明通過構(gòu)建復(fù)合菌系的方法可顯著提高纖維素降解潛力（圖2）。單菌株中xw23 的酶活力最高，為15.4 U·mL-1，但前期崩解濾紙條的能力并非最強(qiáng)；其次是xw3，為14.4 U·mL-1；xw5、xw21、xw31 間的酶活力無顯著差異（P＞0.05），均高于xw16，但崩解濾紙條能力均不如xw16。復(fù)合菌系中則以B 菌系酶活力最高，為22.8 U·mL-1，比其中的最強(qiáng)單菌株xw3高出58.3%；其次為D 菌系，酶活力為20.4 U·mL-1，比其中的最強(qiáng)單菌株xw21 高出68.6%。初步表明復(fù)配菌系B、D 相比其他菌系具有更高的降解潛力。

圖2 發(fā)酵液的濾紙酶活力Fig.2 Filter paper enzyme activity of fermentation broth

2.4.2 不同溫度下的濾紙酶活力 堆肥過程中纖維素的降解主要發(fā)生在高溫期，因此菌劑在高溫下的生物降解活力對堆肥腐熟具有重要意義［18］。各復(fù)合菌系在不同溫度下的濾紙酶活力如圖3所示，其對高溫的耐受性有明顯差異。復(fù)合菌系F在各溫度下的酶活力一直最低，A、C的酶活力則隨溫度升高呈下降趨勢，高溫耐受性較差，復(fù)合菌系E 能耐受55 ℃高溫，但超過60 ℃后酶活力驟然下降，只有9.6 U·mL-1。而復(fù)合菌系B、D 所產(chǎn)纖維素酶能耐受40～55 ℃高溫，至65 ℃時(shí)濾紙酶活力仍維持在14.1、11.7 U·mL-1，耐高溫性強(qiáng)。

圖3 不同溫度下的濾紙酶活力Fig.3 Enzyme activity of filter paper at different temperatures

2.5 復(fù)合菌系的纖維素降解特性研究

2.5.1 濾紙條降解 對濾紙條崩解能力的觀察能更方便、直觀地比較菌群重構(gòu)前后的降解效果。結(jié)果顯示，復(fù)合菌系B、D 的濾紙條降解效率較高，接種1 d 即發(fā)生軟化，3 d 后斷裂，5 d 內(nèi)崩解為糊狀，崩解時(shí)間比單菌株短；復(fù)合菌系C、E 降解能力次之，培養(yǎng)3 d 后濾紙條邊緣模糊，7 d才被完全崩解，但也優(yōu)于單菌株；而復(fù)合菌系F 的降解效果相比單菌xw3、xw31 沒有太大差異，13 d 才將濾紙條完全崩解。圖4顯示了復(fù)合菌系B 對濾紙條的崩解情況。總體上，除復(fù)合菌系F 外，其他復(fù)合菌系崩解濾紙條的能力均優(yōu)于單菌株。

圖4 復(fù)配菌系B對濾紙條的崩解效果Fig.4 Filter paper degradation effects of the compound strains B

2.5.2 秸稈降解 為進(jìn)一步驗(yàn)證復(fù)合菌系對實(shí)際材料的降解能力，將單菌株和復(fù)合菌系接種于玉米秸稈液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)10 d后，測定秸稈降解率，結(jié)果顯示不同處理效果差異較大（圖5）。相比而言，復(fù)合菌系的降解效果要優(yōu)于單一菌株，尤以B、D 的降解率較高，分別為24.5%、21.9%，比其中的最強(qiáng)單菌株xw8、xw31 增加9.4 和4.7 個(gè)百分點(diǎn)。復(fù)合菌系A(chǔ)、C 的效果次之，分別為20.2%、19.8%，比其中的最強(qiáng)單菌株xw21、xw31 增加4.8 和2.6 個(gè)百分點(diǎn)。復(fù)合菌系中F的降解效果最弱，比單菌株xw31 降低了19.2 個(gè)百分點(diǎn)。

圖5 不同菌系處理的秸稈降解率Fig.5 Degradation rate of straw treated by different strains

2.6 菌株鑒定

利用16S rRNA 通用引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR），獲得各菌株的16S rRNA 基因序列，運(yùn)用MEGA 7.0 軟件進(jìn)行多重序列比較并繪制系統(tǒng)發(fā)育樹（圖6）。結(jié)果表明，復(fù)合菌系B中的菌株xw1 為微桿菌屬（Microbacteriumsp.），xw3、xw8為類芽孢桿菌屬（Paenibacillussp.）。而復(fù)合菌系D 中的xw16 和xw21 均為芽孢桿菌屬（Bacillussp.），xw31為類芽孢桿菌屬（Paenibacillussp.）。

圖6 纖維素分解菌的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.6 Phylogenetic tree of 16S rRNA sequences of the celluloses-degrading strains

3 討論

纖維素分解菌在加速堆肥腐熟進(jìn)程、提高堆肥效率方面發(fā)揮著重要作用，如芽孢桿菌B01 可提高園林廢棄物堆肥中的纖維素和木質(zhì)纖維素降解率［19］。濾紙是聚合度和結(jié)晶度都居中等的天然結(jié)晶類纖維素，以其為底物的濾紙酶活力表征了纖維素酶系的總糖化能力［20］，在纖維素高效腐解菌的選育中被廣泛應(yīng)用。但多數(shù)菌株對纖維素的降解是通過細(xì)胞表面酶進(jìn)行的，需要附著在材料表面才能將其降解［21］，因此菌株的濾紙酶活力只能反映胞外酶活力大小，而非對真實(shí)底物的實(shí)際腐化能力［11］。本研究發(fā)現(xiàn)單菌株xw23 的濾紙酶活力最高，但對濾紙的崩解能力卻次于菌株xw1。另一方面，僅通過測定纖維素酶活力來評(píng)價(jià)微生物的分解能力是不全面的。如劉東陽等［22］研究證實(shí)，雖然蠟狀芽胞桿菌的濾紙酶活力不是最高的，但其分解小麥秸稈的能力最強(qiáng)，酶活力和實(shí)際降解能力并不趨同。原因可能是不同碳源（濾紙、玉米秸稈）對酶生成的誘導(dǎo)性不同［23］，雖然濾紙?zhí)匦越咏烊焕w維素，但與天然材料依然存在差異。因此，菌株降解性能測定還需結(jié)合其他指標(biāo)，采用多重評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對其進(jìn)行綜合分析。

纖維素分子是由吡喃葡萄糖單元以β-1，4糖苷鍵縮合而成的直鏈同聚多糖，結(jié)構(gòu)致密，結(jié)晶度高，其確切的降解機(jī)理至今尚無定論。目前接受度較高的是協(xié)同理論，即需要內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖酶（endo-β-1，4-glucanase）、外切葡聚糖酶（exoglucanses）和β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase）3 種酶的共同作用［24］。內(nèi)切酶作用于纖維素鏈的非結(jié)晶區(qū)，產(chǎn)生纖維素反應(yīng)末端；外切酶作用于結(jié)晶區(qū)，產(chǎn)生纖維二糖或葡萄糖；β-葡萄糖苷酶則將纖維寡糖水解成單糖分子，三者的作用順序沒有固定性，協(xié)同完成纖維素分子降解［25］。本研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合菌系B、D 的濾紙酶活力及濾紙崩解能力均優(yōu)于單菌，與李靜等［26］、張必周等［14］的研究結(jié)果一致，說明通過菌群重構(gòu)的方法可補(bǔ)充完善體系中的降解酶系，提升降解潛力。進(jìn)一步的秸稈降解試驗(yàn)表明，復(fù)合菌系B、D 發(fā)酵10 d 后對玉米秸稈的降解率分別為24.5%、21.9%，而市售腐熟劑培養(yǎng)15 d 后的降解率約11.5%［27］，復(fù)配菌的秸稈崩解程度更高，進(jìn)一步證實(shí)了菌群內(nèi)部的協(xié)同合作可賦予復(fù)合菌系更豐富的生理代謝功能。但也有例外，如復(fù)合菌系F 對濾紙條和秸稈的降解效果相比單菌株并沒有顯著增加，濾紙酶活力甚至有所降低。原因可能是該混合群體在養(yǎng)分含量有限的環(huán)境下出現(xiàn)了營養(yǎng)競爭現(xiàn)象，影響了各菌株的生長狀態(tài)，抑制其產(chǎn)酶能力，導(dǎo)致酶系組分不齊全，最終未起到互補(bǔ)效應(yīng)。

國內(nèi)外對微生物分解轉(zhuǎn)化纖維素的研究已有較多報(bào)道，以霉菌居多，對細(xì)菌的研究相對較少。但霉菌在培養(yǎng)過程中常伴隨酸敗霉腐氣味，并具有一定毒性，產(chǎn)酶周期也較長，制約其在食品發(fā)酵、畜禽飼料等領(lǐng)域的應(yīng)用［28］。而細(xì)菌的穩(wěn)定性和環(huán)境適應(yīng)性較好、培養(yǎng)方便，且基因組精簡無內(nèi)含子，可直接克隆目的基因，這既方便研究纖維素酶基因的多樣性，也利于構(gòu)建不同功能酶協(xié)同作用的工程菌［29］。本研究分離的微桿菌、類芽孢桿菌和芽孢桿菌屬均屬于厚壁菌門，是秸稈自然發(fā)酵過程中的優(yōu)勢菌門［30-31］。微桿菌和類芽孢桿菌對多種有機(jī)物有降解能力［32-33］，而芽孢桿菌生理特性豐富多樣，可產(chǎn)生多種胞外水解酶類，以感受態(tài)基因X（competence gene X，ComX）信息素和感受態(tài)及產(chǎn)孢因子為信號(hào)分子介導(dǎo)群體感應(yīng)的調(diào)控過程［34］。推測復(fù)合菌系D 中的芽孢桿菌能夠起到信號(hào)傳遞的功能，與環(huán)境中的類芽孢桿菌協(xié)同作用，促進(jìn)秸稈降解。

秸稈的腐解是在高溫下進(jìn)行的，而多數(shù)微生物所產(chǎn)纖維素酶的熱穩(wěn)定性不理想，影響了纖維素降解效果。本研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合菌系B、D 分泌的纖維素酶能耐受40～55 ℃高溫，65 ℃時(shí)仍保持一定酶活力，具有高溫耐受性，這是其作為高溫堆肥菌劑的潛在優(yōu)勢，在熱加工要求較高的重金屬污染修復(fù)、紙漿造紙等行業(yè)也具有廣闊的應(yīng)用前景。

4 結(jié)論

本研究從堆肥中分離到29 株纖維素降解菌，并基于單菌株特性構(gòu)建了6 個(gè)復(fù)合菌系。以復(fù)合菌系B（xw1、xw3、xw8）、D（xw16、xw21、xw31）的酶活力最高，分別為22.8、20.4 U·mL-1。復(fù)合菌系B、D 在培養(yǎng)5 d時(shí)可將濾紙崩解為糊狀，發(fā)酵10 d 后對玉米秸稈降解率分別達(dá)到24.5%、21.9%。經(jīng)16S rDNA 分子鑒定，復(fù)合菌系B 由微桿菌屬（Microbacteriumsp.）、類芽孢桿菌屬（Paenibacillussp.）組成，復(fù)合菌系D由芽孢桿菌屬（Bacillussp.）、類芽孢桿菌屬（Paenibacillusp.）組成。