莊志鶴，曹瑞珍，金玲玲，張樹軍，張國文，喬 偉

（1.錫林郭勒盟中心醫(yī)院，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028043）

隨著生活水平的提高，糖尿病的發(fā)病率逐年增加，且趨于年輕化。糖尿病除血糖增高外，還往往伴隨血脂水平的異常［1］。長期的血糖水平高及血脂代謝紊亂，引起全身血管神經(jīng)損害，多種糖尿病并發(fā)癥隨之發(fā)生，如心、腦、腎、眼、肢體等血管神經(jīng)病變，而糖尿病腎?。╠iabetes nephropathy，DN）是較嚴(yán)重的并發(fā)癥之一［2-3］。因此，在糖尿病治療過程中，控制好血糖同時(shí)控制血脂，改善血循環(huán)，從而防止各種并發(fā)癥的發(fā)生。

目前，治療糖尿病的藥物大多為西藥，不良反應(yīng)較多，長期服用易引起肝、腎功能等的損害。糖尿病在中蒙醫(yī)學(xué)上屬于消渴病的范疇，研究人員針對(duì)消渴病人的癥狀和體征，開發(fā)了很多的單味藥及方劑［4］，并且利用現(xiàn)代科技手段提取這些藥的有效成分，發(fā)現(xiàn)很多藥物都是通過其有效成分如萜類、類胰島素、黃酮類、多糖類、生物堿類、氨基酸類、不飽和脂肪酸類等而發(fā)揮降糖調(diào)脂作用［5］。

塔本文都蘇為蒙藥滋補(bǔ)健身方劑，由黃精、玉竹、天冬、刺蒺藜和天花粉等5種成分構(gòu)成，該方劑具有滋補(bǔ)作用，能強(qiáng)心、降糖、調(diào)脂，激活和增強(qiáng)免疫功能。組成方劑后活性物質(zhì)的功能得以加強(qiáng)［6］。筆者建立DN小鼠模型，旨在考察TBWDS提取液對(duì)DN小鼠的降糖、調(diào)脂和改善腎功能作用，為DN的治療找到新的措施。

1 材料與方法

1.1 藥材與試劑

塔本文都蘇的5種組方購自通遼市中醫(yī)院，由內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院蒙藥學(xué)教研室老師鑒定。鏈脲佐菌素（STZ，sigma公司）；血糖、血脂4項(xiàng)和24 h尿蛋白測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 TBWDS提取液的制備

取TBWDS方劑400 g（黃精、玉竹、天冬、天花粉和刺蒺藜比列為3∶2∶2∶2∶1），制成粗粉（20目），加75%乙醇2 400 mL，浸泡12 h，回流提取1.5 h，再重復(fù)2次，合并提取液，回收乙醇，加蒸餾水溶解并定容至1 250 mL的溶液，配成1 mL含生藥0.32 g。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立、分組及藥物干預(yù)

SPF級(jí)雄性昆明小鼠70只，體重（20±2）g，由吉林省億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK-（吉）2018-0007。適應(yīng)性飼養(yǎng)14 d后，隨機(jī)選擇10只小鼠作為正常對(duì)照組，其余60只小鼠禁食24 h后，以80 mg·kg-1劑量連續(xù)2天腹腔注射STZ（臨用前溶于pH 4.5的檸檬酸緩沖液），5天后斷尾取血，采用羅氏血糖試紙和血糖儀（活力型）測定空腹血糖濃度，大于11.1 mmol·L-1者為糖尿?。―M）小鼠（成功46只）。

然后對(duì)正常對(duì)照組小鼠，繼續(xù)給與常規(guī)飼料飼養(yǎng)，DM小鼠更換為高脂高糖飼料飼養(yǎng)，30 d后進(jìn)行藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)（期間損耗6只）。正常對(duì)照組仍然用常規(guī)飼料飼養(yǎng)，其余小鼠用高脂高糖飼料飼養(yǎng)。將DM小鼠隨機(jī)分成4組（模型組、二甲雙胍組和TBWDS高、低劑量組），每組10只，進(jìn)行灌胃給藥治療，灌胃體積均根據(jù)小鼠體重0.01 mL·g-1，每日一次。TBWDS作為滋補(bǔ)方劑用藥3個(gè)月，專家每日推薦劑量最小30 g，最大為60 g，根據(jù)人與小鼠的體表面積折算等效劑量，按照65 kg成人計(jì)算，小鼠給藥劑量為成人的9.1倍，因此小鼠最高給藥劑量定為8 g·kg-1（生藥），而4 g·kg-1作為低劑量組給藥劑量。二甲雙胍組小鼠給予30 mg·kg-1的二甲雙胍，模型組和正常對(duì)照組小鼠均給予等量蒸餾水。每天記錄小鼠的飲水量、進(jìn)食量及體重變化。

1.4 標(biāo)本采集

治療12周后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)標(biāo)本制備。（1）在處死小鼠前1 d，用代謝籠收集各組小鼠24 h尿液，離心后分裝，4℃保存?zhèn)溆茫唬?）采取斷頭取血的方法，收集各組小鼠的血液，離心制備血清，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 小鼠血清尿液生化指標(biāo)檢測

取出4℃保存的各組血清和尿液，分別按照血糖、血脂4項(xiàng)和24 h尿蛋白的測定試劑盒說明書操作，采用普利馬半自動(dòng)生化儀和7230分光光度計(jì)比色測定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20軟件進(jìn)行分析，各組數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。用單因素方差分析及t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，P<0.05表示有顯著性差異，P<0.01表示有極顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠血糖等指標(biāo)的影響

與正常對(duì)照組相比較，注射STZ后的4組動(dòng)物的血糖值顯著升高（P<0.01），表明DM鼠造模成功；與模型組相比，TBWDS提取液高、低劑量組均能顯著降低糖尿病小鼠的血糖、24 h飲水量和尿蛋白（P<0.01），說明TBWDS提取液能夠降低糖尿病模型小鼠的血糖，從而降低血液滲透壓，緩解口渴，同時(shí)也減輕腎損害，降低尿蛋白；但對(duì)這些指標(biāo)的影響不如二甲雙胍（P<0.05，P<0.01），特別是低劑量的。見表1。

表1 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠空腹血糖、24 h飲水量及尿蛋白的影響Tab.1 Effects of TBWDS extract on fasting blood glucose，24 h water intake and urinary protein in DN mice ，n=10

表1 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠空腹血糖、24 h飲水量及尿蛋白的影響Tab.1 Effects of TBWDS extract on fasting blood glucose，24 h water intake and urinary protein in DN mice ，n=10

注：與正常對(duì)照組比較▲▲P<0.01；與模型組比較★★P<0.01；與二甲雙胍組比較●P<0.05，●●P<0.01。

組 別正常對(duì)照組模型組二甲雙胍組TBWDS低劑量組TBWDS高劑量組給藥前血糖/（mmol·L-1）4.8±0.57 19.38±3.92▲▲20.95±3.12▲▲20.21±2.34▲▲20.89±3.14▲▲給藥后血糖/（mmol·L-1）5.47±1.33 20.49±3.24▲▲7.14±1.54▲▲★★12.79±2.05▲▲★★●●9.12±1.65▲▲★★●●24小時(shí)飲水量/mL 25.37±2.98 69.26±7.88▲▲49.17±5.27▲▲★★60.25±7.89▲▲★★●●54.56±6.02▲▲★★●24小時(shí)尿蛋白/mg 20.63±3.84 102.48±9.27▲▲54.83±4.61▲▲★★62.18±5.02▲▲★★●●59.79±5.78▲▲★★

2.2 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠血脂4項(xiàng)指標(biāo)的影響

與模型組相比，TBWDS提取液高、低劑量組小鼠血清TC、TG和LDL-C水平均明顯降低（P<0.05，P<0.01），而高劑量組HDL-C水平明顯高于模型組（P<0.05），表明TBWDS提取液對(duì)DN小鼠的血脂有很好的調(diào)節(jié)作用。TBWDS高、低劑量組與二甲雙胍組各項(xiàng)指標(biāo)比較沒有明顯差異。見表2。

表2 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠血脂水平的影響Tab.2 Effect of TBWDS extract on blood lipid level of DN mice ，n=10

表2 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠血脂水平的影響Tab.2 Effect of TBWDS extract on blood lipid level of DN mice ，n=10

注：與正常對(duì)照組比較▲▲P<0.01；與模型組比較★P<0.05，★★P<0.01。

組 別正常對(duì)照組模型組二甲雙胍組TBWDS低劑量組TBWDS高劑量組TC/（mmol·L-1）2.33±0.15 5.27±0.97▲▲4.26±0.68▲▲★★4.68±0.59▲▲★4.32±0.43▲▲★★TG/（mmol·L-1）1.55±0.32 7.72±2.39▲▲4.42±1.13▲▲★★5.87±2.06▲▲★4.69±1.66▲▲★★HDL-C/（mmol·L-1）1.26±0.37 0.86±0.38▲▲1.24±0.49▲▲★★1.05±0.45▲▲1.18±0.43▲▲★L(fēng)DL-C/（mmol·L-1）1.25±0.61 3.47±1.07▲▲1.87±0.98▲▲★★2.07±1.06▲▲★★1.96±0.88▲▲★★

2.3 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠體重的影響

造模成功后的各組小鼠體重明顯低于正常對(duì)照組（P<0.01），經(jīng)TBWDS提取液高、低劑量陸續(xù)治療3個(gè)月后，小鼠體重逐漸增加，且都明顯高于模型組（P<0.01）；TBWDS高、低劑量組與二甲雙胍組相比，除了TBWDS低劑量給藥2個(gè)月的不如二甲雙胍組外，余未見明顯差異。見表3。

表3 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠體重的影響Tab.3 Effect of TBWDS extract on body weight of DN mice ，n=10

表3 TBWDS提取液對(duì)DN小鼠體重的影響Tab.3 Effect of TBWDS extract on body weight of DN mice ，n=10

注：與正常對(duì)照組比較▲▲P<0.01；與模型組比較★★P<0.01；與二甲雙胍組比較●P<0.05。

組 別正常對(duì)照組模型組二甲雙胍組TBWDS低劑量組TBWDS高劑量組造模后體重/g 27.77±1.14 18.12±1.09▲▲18.05±0.88▲▲17.79±1.22▲▲18.57±1.31▲▲給藥后1個(gè)月體重/g 34.96±1.64 21.44±1.56▲▲24.54±1.69▲▲★★23.57±1.52▲▲★★24.86±1.67▲▲★★給藥后2個(gè)月體重/g 41.36±2.68 25.45±1.89▲▲30.55±2.31▲▲★★28.42±2.13▲▲★★●29.51±2.04▲▲★★給藥后3個(gè)月體重/g 48.06±2.72 32.32±2.06▲▲36.35±2.20▲▲★★35.39±2.32▲▲★★36.46±2.58▲▲★★

3 討論

糖尿病是一組復(fù)雜的代謝紊亂疾病，是由于胰島素絕對(duì)或相對(duì)缺乏，使細(xì)胞不能利用葡萄糖，糖利用障礙就在血液堆積引起高血糖，高糖引起高滲，表現(xiàn)為口渴多飲；細(xì)胞利用血糖障礙，細(xì)胞處于饑餓狀態(tài)，表現(xiàn)多吃；高血糖超過腎糖閾值，就會(huì)出現(xiàn)尿糖，糖的排出需要溶解于水，即滲透性利尿?qū)е露嗄?；而機(jī)體的能源物質(zhì)主要是糖、脂和蛋白質(zhì)，糖利用障礙，就要大量動(dòng)員脂肪以及分解蛋白質(zhì)，從而使機(jī)體消瘦，體重下降，使糖尿病患者表現(xiàn)為“三多一少”癥狀［7-9］。TBWDS提取液具有明顯的降糖作用從而降低水的攝入量和排尿量。

糖的代謝障礙，伴隨脂類和蛋白質(zhì)的代謝紊亂，引起血脂四項(xiàng)的改變，TBWDS提取液有明顯調(diào)節(jié)脂代謝作用。高糖、高脂引起全身血管、神經(jīng)損害，引起各種并發(fā)癥，包括腎臟損傷，腎小球?yàn)V膜屏障功能破壞，從而引起蛋白尿［10］。尿蛋白是反映腎小球功能的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，早期微量白蛋白尿，隨著病情的發(fā)展到無選擇性大量蛋白尿［10-11］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TBWDS提取液能夠顯著降低DN小鼠24 h尿蛋白量，能夠減輕腎的損害，保護(hù)腎功能。

前期研究表明，黃精多糖能降低血糖，通過降低細(xì)胞信息傳導(dǎo)途徑的cAMP含量而實(shí)現(xiàn)［12-13］；黃精浸膏能拮抗腎上腺素的升糖作用；玉竹水提物能降低糖尿病鼠血糖水平，玉竹多糖能夠降糖、調(diào)脂及抗氧化，緩解糖尿病動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成［13］；蒺藜水煎液、天冬水提液和醇提液、天花粉分離出的5種聚糖成分都有降低血糖作用［14-16］。因此，TBWDS提取液是通過各組方的有效成分發(fā)揮降糖、調(diào)脂、抗氧化等作用，隨著血糖、血脂的降低，氧化應(yīng)激作用的減輕，微循環(huán)的改善，腎組織的損傷得到修復(fù)，從而達(dá)到保護(hù)腎及其他臟器的功能。