文/胡金慶 任艷萍 林廣明 李文清 韓志強(qiáng) 劉海泉

本文通過(guò)探討分析單體三倍體牡蠣在苗種培育方面的問(wèn)題，包括四倍體親貝的純度和稀缺性、高純度三倍體受精卵獲取較難、二倍體和四倍體牡蠣性腺同步成熟存在差異化、規(guī)?；a(chǎn)中形成單體牡蠣的方法不盡完善等，提出了今后研究的重點(diǎn)和方向?yàn)樘岣呷扼w誘導(dǎo)成活率、研發(fā)更加高效實(shí)用固著基、改進(jìn)多倍體培育方法、協(xié)調(diào)牡蠣二倍體與多倍體培育關(guān)系等，供相關(guān)從業(yè)者參考借鑒。

牡蠣是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)貝類，因其營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美而有“海中牛奶”的美譽(yù)。漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒數(shù)據(jù)顯示，2020年我國(guó)牡蠣總產(chǎn)量達(dá)542.46萬(wàn)t，約占全國(guó)海水養(yǎng)殖產(chǎn)量的25%，占貝類產(chǎn)量的37%，位居世界第一。二倍體貝類在水溫較低的冬春季節(jié)糖元含量最高、口感最好，而在夏季高溫季節(jié)口感較差。三倍體牡蠣即使在夏季，軟體部仍然非常肥滿，糖元含量也保持在一個(gè)較高的水平，彌補(bǔ)了二倍體牡蠣夏季的缺憾。因此，三倍體牡蠣養(yǎng)殖面積逐年增加，牡蠣苗供不應(yīng)求。而單體牡蠣由于個(gè)體獨(dú)立、便于挑揀、外殼規(guī)整，深受高端市場(chǎng)喜愛(ài)，售價(jià)較高、養(yǎng)殖效益可觀，成為近年養(yǎng)殖熱門。

在貝類三倍體培育中，可通過(guò)物理、化學(xué)和生物等方法實(shí)現(xiàn)多倍體誘導(dǎo)。人工雌核發(fā)育和細(xì)胞融合法也可被用于貝類三倍體的誘導(dǎo)。現(xiàn)階段常用方法為生物學(xué)方法，即使用二倍體貝類和四倍體貝類進(jìn)行雜交，產(chǎn)生三倍體個(gè)體。

在蓬萊長(zhǎng)島海洋生態(tài)文明綜合試驗(yàn)區(qū)，開(kāi)展了牡蠣規(guī)?；B(yǎng)殖近十年，從事單體三倍體牡蠣養(yǎng)殖也有五六年，養(yǎng)殖方式從風(fēng)平浪靜的內(nèi)灣進(jìn)行吊繩養(yǎng)殖向潮流暢通餌料豐富的深遠(yuǎn)海網(wǎng)籠養(yǎng)殖轉(zhuǎn)變。2021年，當(dāng)?shù)啬迪狆B(yǎng)殖面積3600ha，年產(chǎn)量12萬(wàn)t，產(chǎn)值10億元。

本文以太平洋牡蠣為代表，探討了單體三倍體牡蠣在苗種培育中存在的問(wèn)題及今后研究方向，供相關(guān)從業(yè)者參考借鑒。

一、單體三倍體牡蠣苗種培育中存在的問(wèn)題

（一）四倍體親貝的純度和稀缺性是苗種培育瓶頸

貝類四倍體生產(chǎn)技術(shù)為美籍華人郭希明先生所創(chuàng)。四倍體是在三倍體成熟的卵子與二倍體精子受精后，再用物理、化學(xué)或者生物方法抑制受精卵的極體釋放而獲得。四倍體穩(wěn)定性差，后代極易發(fā)生倍性變化，出現(xiàn)四倍體、三倍體、二倍體及非整倍體。三倍體牡蠣本身育性差，雌性個(gè)體比例小，懷卵量少。三倍體牡蠣卵誘導(dǎo)出的四倍體成活率極低，不到萬(wàn)分之一，導(dǎo)致四倍體牡蠣一直供不應(yīng)求，無(wú)法滿足育苗供給。此外對(duì)于親本牡蠣的倍性，需要用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，確保被誘導(dǎo)的四倍體必是純四倍體。國(guó)內(nèi)具有專業(yè)生產(chǎn)資質(zhì)、能提供四倍體親貝的廠家屈指可數(shù)，若從國(guó)外進(jìn)口需經(jīng)海關(guān)檢疫合格才可入關(guān)，投資大且耗時(shí)較長(zhǎng)。

（二）獲得高純度的三倍體受精卵有難度

二倍體親貝出現(xiàn)的性逆轉(zhuǎn)以及雌雄同體均會(huì)出現(xiàn)二倍體精子并污染二倍體的卵子，進(jìn)而導(dǎo)致孵化出的三倍體受精卵純度下降，因此，獲得高純度的三倍體受精卵存在難點(diǎn)。在生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)當(dāng)做好二倍體親貝雌雄的區(qū)分、雌雄同體親貝的篩檢、嚴(yán)格操作取卵和洗卵，避免受精前二倍體卵子與二倍體精子結(jié)合形成二倍體的受精卵。

（三）二倍體和四倍體牡蠣性腺同步成熟存在差異化

在相同環(huán)境條件下，四倍體牡蠣性腺發(fā)育較二倍體至少晚一個(gè)月。因此，合理調(diào)整水溫等環(huán)境因子，使親貝雌貝二倍體和雄貝四倍體牡蠣近乎同步性成熟是培育的重點(diǎn)和難點(diǎn)，在生產(chǎn)上常用的方法為解剖后人工授精。因1個(gè)雄貝所排精子數(shù)量足夠?yàn)?0個(gè)以上雌貝受精，所以生產(chǎn)上多以常規(guī)二倍體為雌貝，稀缺的四倍體為雄貝。

（四）規(guī)模化生產(chǎn)中形成單體牡蠣的方法還有待完善

單體牡蠣的產(chǎn)生一般有顆粒固著基法和化學(xué)藥物誘導(dǎo)法兩種。前者的操作為：在牡蠣眼點(diǎn)幼蟲階段，殼高0.25mm～0.3mm時(shí)，投放規(guī)格為0.3mm～0.5mm的貝殼粉或細(xì)砂顆粒做為固著基，每個(gè)固著基附著一個(gè)幼體即為單體牡蠣。顆粒固著基大小要與即將附著幼蟲大小相仿，過(guò)大會(huì)造成單體率下降，一個(gè)固著基上固著多個(gè)稚貝的比例增大；過(guò)小雖能提高單體率，但附苗量將降低。

用化學(xué)藥物腎上腺素（EPI）和去甲腎上腺素（NE）誘導(dǎo)眼點(diǎn)幼蟲，可使之面盤、足絲退化，自然沉于池底變態(tài)而成為單體牡蠣。此方法在實(shí)驗(yàn)室操作可行，但在規(guī)?；a(chǎn)中的可操作性還需要進(jìn)一步研究完善。

二、單體三倍體牡蠣苗種培育的研究展望

（一）三倍體誘導(dǎo)成活率有待提高

三倍體誘導(dǎo)成活率較低主要體現(xiàn)在四倍體與二倍體雜交后孵化階段、浮游幼蟲階段和眼點(diǎn)變態(tài)固著階段成活率不高。除了誘導(dǎo)技術(shù)、方法，誘導(dǎo)成活率還與親貝種質(zhì)、性腺成熟度、外界環(huán)境包括水質(zhì)等都緊密相關(guān)。后期固著成稚貝，脫基過(guò)程死亡率高低主要與固著基的種類、操作有關(guān)，與誘導(dǎo)技術(shù)關(guān)系不大。

（二）高效實(shí)用固著基有待研發(fā)

牡蠣固著基種類眾多，各有優(yōu)缺點(diǎn)。貝殼固著單體牡蠣優(yōu)點(diǎn)是固著密度大，缺點(diǎn)是脫基的時(shí)間不能太早，殼高小于1mm時(shí)不能脫基，因?yàn)楸藭r(shí)殼薄而脆脫基會(huì)使貝殼損傷嚴(yán)重，外殼破損率高。脫基太晚，殼高＞20mm時(shí)又容易導(dǎo)致牡蠣互相黏連，影響牡蠣生長(zhǎng)和個(gè)體美觀。因此，在眼點(diǎn)幼蟲將要固著時(shí)，通過(guò)分池降低固著密度是可行方法，方便后期單體分苗，但其缺點(diǎn)是稚貝單位體積密度減少將影響經(jīng)濟(jì)效益。可彎曲的塑料板（聚乙烯波紋板）與貝殼固著基缺點(diǎn)相仿，需要脫基的牡蠣規(guī)格偏大。塑料薄膜非常適合稚貝脫基，但固著基表面光滑，不易于眼點(diǎn)幼蟲固著，需將塑料薄膜打磨粗糙再投放。廢舊篩絹需200目以上為好，如果網(wǎng)眼過(guò)粗，篩絹兩面的牡蠣透過(guò)孔眼相互固著，影響單體效果。因此，高效實(shí)用低成本固著基的研發(fā)，也是今后重要的研究方向。

（三）多倍體培育方法有待改進(jìn)

在各種多倍體培育方法中，物理方法操作簡(jiǎn)單易行、成本低，但誘導(dǎo)效果還不夠理想；化學(xué)方法誘導(dǎo)不僅成本高，有些化學(xué)藥物還有毒性，對(duì)貝類及周圍養(yǎng)殖環(huán)境可能造成污染；生物方法所應(yīng)用的貝類四倍體培育和細(xì)胞融合技術(shù)仍然難度非常大。因此，探尋高效、無(wú)毒、安全且低成本的牡蠣多倍體育種方法仍是今后重要的研究方向。

牡蠣細(xì)胞中三倍體染色體配對(duì)本身就是紊亂的，通過(guò)三倍體誘導(dǎo)出四倍體的自繁配對(duì)也是紊亂的，自然海區(qū)養(yǎng)有二倍體牡蠣，如果同時(shí)也養(yǎng)有三倍體、四倍體，后者育性差并不代表不育，不穩(wěn)定的遺傳基因與二倍體結(jié)合，是否會(huì)導(dǎo)致基因混合或基因污染也是一個(gè)需要思考的問(wèn)題。

（四）貝類二倍體與多倍體培育需齊頭并進(jìn)，共同發(fā)展

牡蠣三倍體、四倍體研究至今，雖然已經(jīng)取得了很多的成績(jī)，但是也有很多問(wèn)題尚待突破。二倍體牡蠣作為自然界長(zhǎng)期進(jìn)化的生物物種，仍需要保留和保護(hù)，因此，二倍體牡蠣原種、良種的保護(hù)、提純與復(fù)壯仍然值得我們重視。只有二倍體與多倍體培育并肩同行，才能保證牡蠣產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)地發(fā)展。