孫 星 劉川靜 楊邦保 耿韌華 王冬蘭 余向陽(yáng)

（省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地-江蘇省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210014）

桃為薔薇科李屬植物，其肉質(zhì)細(xì)膩且味美芳香，富含蛋白質(zhì)、糖等多種營(yíng)養(yǎng)元素[1]，是深受百姓喜愛的時(shí)鮮水果。桃原產(chǎn)于我國(guó)，其栽培面積在我國(guó)的落葉果樹中僅次于蘋果和梨，位居第3[2]。桃產(chǎn)業(yè)在脫貧攻堅(jiān)、鄉(xiāng)村振興、美麗中國(guó)、健康中國(guó)建設(shè)中發(fā)揮了重要作用。但桃在種植過(guò)程中會(huì)遭受以細(xì)菌性穿孔病、褐腐病和瘡痂病為主的病害，以及桃蚜、桃小食心蟲、梨小食心蟲和山楂紅蜘蛛為主的蟲害，這些病蟲害的侵?jǐn)_嚴(yán)重影響了桃的品質(zhì)和產(chǎn)量[3]。

目前，化學(xué)防治依然是防控桃病蟲害的主要手段，其中防治桃小食心蟲和梨小食心蟲的常用農(nóng)藥有高效氯氰菊酯、氯蟲苯甲酰胺等[4]。但高效氯氰菊酯作用位點(diǎn)單一，頻繁大量使用易誘使害蟲產(chǎn)生抗藥性[5～6]。氯蟲苯甲酰胺作為雙酰胺類第一代魚尼汀受體抑制類殺蟲劑，其作用機(jī)制新穎、對(duì)非靶標(biāo)生物安全且對(duì)環(huán)境相容性好，防治桃小食心蟲效果突出[7～9]，因此，被廣泛用于桃種植過(guò)程中桃小食心蟲和梨小食心蟲的防治。

氯蟲苯甲酰胺對(duì)蜜蜂、魚、鳥等動(dòng)物的毒理學(xué)研究表明其屬于低毒化合物[10～11]。截至2022年7月1日，經(jīng)查詢中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)[12]，氯蟲苯甲酰胺尚未在桃上登記使用，開展氯蟲苯甲酰胺在桃中的殘留行為分析及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估很有必要。近年來(lái)，關(guān)于氯蟲苯甲酰胺的殘留分析方法主要為氣相色譜法[13]、液相色譜法[14～17]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[18～19]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[20～30]，基質(zhì)包含煙草、糖料、谷物、油料、蔬菜和水果等多種作物，尚未見桃中氯蟲苯甲酰胺殘留分析方法的研究報(bào)道。本研究選用5%氯蟲苯甲酰胺懸浮劑對(duì)桃進(jìn)行殘留試驗(yàn)，采用QuEChERS方法進(jìn)行樣品前處理，應(yīng)用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，HPLCMS/MS）檢測(cè)桃中氯蟲苯甲酰胺的殘留量，并對(duì)其殘留量進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，旨在為氯蟲苯甲酰胺在桃上的殘留安全評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

一、材料與方法

（一）材料與試劑5%氯蟲苯甲酰胺懸浮劑（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司）；氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg/L，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；乙腈 （色譜級(jí)，德國(guó)默克化工技術(shù)有限公司）；甲酸（色譜級(jí)，美國(guó)Sigma-Aldrich公司）；乙二胺-N-丙基硅烷（Primary secondary amine，PSA，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；無(wú)水硫酸鎂（西隴化工股份有限公司）。

（二）儀器與設(shè)備1290-6470A液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；R10.v.v食品切碎攪拌機(jī)（法國(guó)Robot coupe公司）；QL-901渦流混合器（江蘇海門市麒麟醫(yī)用儀器廠）；Talboys數(shù)顯型多管式漩渦混合器（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；AL204十萬(wàn)分之一電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；JJ200百分之一電子天平（常州雙杰電子有限公司）。

（三）試驗(yàn)方法

1.田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)。在江蘇省南京市、湖南省長(zhǎng)沙市、河南省新鄉(xiāng)市、河北省邢臺(tái)市、陜西省西安市和山東省萊陽(yáng)市6個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行殘留試驗(yàn)，其中江蘇省和河南省試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行最終殘留試驗(yàn)和降解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，其余4個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)只進(jìn)行最終殘留試驗(yàn)。

本研究設(shè)有空白對(duì)照區(qū)（不施藥）、最終殘留低劑量處理區(qū)、最終殘留高劑量處理區(qū)和降解動(dòng)態(tài)處理區(qū)，每個(gè)小區(qū)不少于4株桃樹，空白對(duì)照、最終殘留和降解動(dòng)態(tài)處理區(qū)域間設(shè)保護(hù)隔離區(qū)。最終殘留試驗(yàn)：低劑量處理區(qū)施藥劑量按制劑量1 000倍液（50 mg a.i./kg），2個(gè)小區(qū)分別施藥2次和3次，高劑量處理區(qū)施藥劑量按制劑量667倍液（75 mg a.i./kg），2個(gè)小區(qū)分別施藥2次和3次，施藥間隔期為7 d，于桃生長(zhǎng)期施藥。降解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)：施藥劑量為制劑量667倍液（75 mg a.i./kg），于最終殘留試驗(yàn)最后一次施藥時(shí)施藥。

桃樣品采集與制備：最終殘留試驗(yàn)采樣時(shí)間為末次施藥后7、14、21 d，降解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)采樣時(shí)間為施藥后2 h和1、3、5、7、14、21、28 d。樣品用隨機(jī)方法在小區(qū)內(nèi)不同方向及果樹上、中、下、里、外等不同部位采集12個(gè)以上（不少于2 kg）生長(zhǎng)正常、無(wú)病害、成熟的桃果實(shí)。將桃樣品除去果柄后，用不銹鋼刀具沿縱向切成均勻的4瓣，棄去果核（稱重），取對(duì)角的二瓣，切成0.5 cm以下的碎塊，在不銹鋼盆中充分混勻，用四分法縮分樣品，分別取樣品兩份。

2.樣品提取凈化。稱取5.0 g制備好的桃樣品置于50 mL離心管中，加入2.0 g氯化納和20 mL乙腈，放入數(shù)顯型多管式漩渦混合器振蕩20 min，經(jīng)5 000 r/min離心后移取2 mL上清液。在上清液中加入25 mg PSA和200 mg無(wú)水硫酸鎂，漩渦振蕩后靜置2 min，吸取上清液并用0.22μm濾膜過(guò)濾后于進(jìn)樣瓶中待測(cè)。

3.HPLC-MS/MS檢測(cè)條件。色譜條件：ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.8μm）；柱溫35℃；進(jìn)樣體積2.0μL；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水（80∶20，體積比）。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（Electron spray ionization，ESI）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple reaction monitoring，MRM）模式正離子掃描；毛細(xì)管電壓3 500 V；干燥氣壓力103.42 kPa；溫度300℃；霧化氣壓力310.26 kPa；輔助氣壓力482.63 kPa；采集參數(shù)見表1。

表1 氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)譜參數(shù)

二、結(jié)果與分析

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線與基質(zhì)效應(yīng)HPLC-MS/MS檢測(cè)樣品時(shí)會(huì)產(chǎn)生離子增強(qiáng)或抑制，因此本研究考察了氯蟲苯甲酰胺在桃中的基質(zhì)效應(yīng)（Matrix effect，ME），分別用桃基質(zhì)液和純?nèi)軇┡渲?.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0μg/L質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在上述HPLC-MS/MS檢測(cè)條件下檢測(cè)，得到各自標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并計(jì)算ME，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，在0.5～500.0μg/L范圍內(nèi)，氯蟲苯甲酰胺在桃基質(zhì)液和純?nèi)軇┲芯€性關(guān)系良好，ME為-12.5%，存在較弱的離子抑制作用，利用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算即可消除影響，因此本研究選擇基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行定量計(jì)算。

表2 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較

（二）方法準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度本研究以3倍信噪比為方法檢出限（Limits of detection，LOD），得到方法檢出限為1×10-3ng；以最低添加水平為方法定量限（Limits of quantification，LOQ），得到方法定量限為0.01 mg/kg。分別向空白桃樣品中添加氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平為0.01、0.05、1.00 mg/kg，每個(gè)添加水平設(shè)置5份平行樣品，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，氯蟲苯甲酰胺在桃中的平均回收率為90%～108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均為4%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。添加回收樣品典型色譜圖見圖1。

表3 氯蟲苯甲酰胺在桃中的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖1 樣品HPLC-MS/MS色譜圖

（三）氯蟲苯甲酰胺在桃中的降解動(dòng)態(tài)氯蟲苯甲酰胺在江蘇省和河南省兩地桃上的降解動(dòng)態(tài)結(jié)果見圖2。由圖2可知，施藥后2 h采集的桃樣品中氯蟲苯甲酰胺的原始沉積量分別為0.65 mg/kg（江蘇省）和0.15 mg/kg（河南?。?，其殘留量與施藥后間隔時(shí)間成指數(shù)關(guān)系，降解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程，在江蘇省試驗(yàn)點(diǎn)降解方程為C＝0.554 8e-0.05t，相關(guān)系數(shù) （R2）為0.852 7，半衰期為13.9 d；在河南省試驗(yàn)點(diǎn)降解方程為C＝0.190 6 e-0.106t，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.867 7，半衰期為6.6 d。

圖2 氯蟲苯甲酰胺在桃中的降解動(dòng)態(tài)曲線

（四）氯蟲苯甲酰胺在桃中的最終殘留量1年6地的樣品試驗(yàn)結(jié)果表明，末次施藥后7 d采樣的桃果肉和桃全果中氯蟲苯甲酰胺的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值（Supervised trials median residue，STMR）分別為0.36 mg/kg和0.33 mg/kg；末次施藥后14 d采樣的桃果肉和桃全果中氯蟲苯甲酰胺的STMR分別為0.23 mg/kg和0.21 mg/kg；末次施藥后21 d采樣的桃果肉和桃全果中氯蟲苯甲酰胺的STMR分別為0.09 mg/kg和0.08 mg/kg；氯蟲苯甲酰胺在6地的桃果肉和桃全果中的最終殘留量分別為＜0.01～1.10mg/kg和＜0.01～1.00 mg/kg（見表4）?？傮w上看，氯蟲苯甲酰胺在桃果肉和桃全果中的STMR隨采收間隔期的增加而降低，與降解動(dòng)態(tài)規(guī)律一致。

表4 氯蟲苯甲酰胺在桃中的殘留量

（五）長(zhǎng)期膳食攝入評(píng)估長(zhǎng)期膳食攝入評(píng)估是依據(jù)我國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況監(jiān)測(cè)調(diào)查數(shù)據(jù)，結(jié)合STMR或最大殘留限量（Maximum residue limit，MRL）計(jì)算國(guó)家估算每日攝入量（National estimated daily intake，NEDI）。目前，氯蟲苯甲酰胺在我國(guó)登記作物有水稻、玉米、棉花、大豆等19種作物。GB 2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中對(duì)氯蟲苯甲酰胺殘留物的定義和農(nóng)藥殘留聯(lián)合會(huì)議（Joint Meeting on Pesticide Residues，JMPR）報(bào)告中對(duì)氯蟲苯甲酰胺評(píng)估的定義均為氯蟲苯甲酰胺，氯蟲苯甲酰胺每日允許攝入量 （Acceptable daily intake，ADI）為2 mg/kg bw。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)最大化原則，本研究選擇末次施藥后7 d的桃果肉中氯蟲苯甲酰胺殘留中值0.36 mg/kg，結(jié)合我國(guó)居民人均膳食結(jié)構(gòu)進(jìn)行計(jì)算（我國(guó)居民平均體重取63 kg）。計(jì)算結(jié)果顯示，普通人群的氯蟲苯甲酰胺國(guó)家估算每日攝入量是2.348 3 mg，占日允許攝入量的1.86%（見表5），小于100%，說(shuō)明氯蟲苯甲酰胺殘留量通常不會(huì)對(duì)普通人群健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。

表5 氯蟲苯甲酰胺在所有登記作物中的長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

三、結(jié)論

本研究采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)桃中氯蟲苯甲酰胺殘留進(jìn)行了定性和定量分析。結(jié)果表明，所用方法穩(wěn)定性好、靈敏度高、高效快捷，適用于桃中氯蟲苯甲酰胺的定量分析?；谠摍z測(cè)方法研究了氯蟲苯甲酰胺在桃中的殘留降解動(dòng)態(tài)和最終殘留量，結(jié)果表明，氯蟲苯甲酰胺在桃中的降解半衰期分別為13.9 d（江蘇省試驗(yàn)點(diǎn)）和6.6 d（河南省試驗(yàn)點(diǎn)）；本研究中氯蟲苯甲酰胺在桃上的最終殘留量（最大值為1.10 mg/kg），均低于我國(guó)制定的氯蟲苯甲酰胺在桃中的最大殘留限量值2 mg/kg。按風(fēng)險(xiǎn)最大化原則進(jìn)行長(zhǎng)期膳食攝入評(píng)估，結(jié)果表明，普通人群的氯蟲苯甲酰胺國(guó)家估算每日攝入量是2.348 3 mg，占日允許攝入量的1.86%，說(shuō)明氯蟲苯甲酰胺殘留量不會(huì)對(duì)普通人群健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。以上結(jié)果可為氯蟲苯甲酰胺在桃中的使用和市場(chǎng)監(jiān)測(cè)提供理論依據(jù)。