薛 銀，吳贇竑，袁 璐，柴 娟，朱 琳，吳雪軍，張紅麗，謝榮輝，陳 潔，張傳亮，趙靈燕

(浙江省動物疫病預(yù)防控制中心，浙江 杭州 311119)

在“人病獸防、關(guān)口前移”的大背景下[1]，動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)作用愈發(fā)凸顯。獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室作為動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)的重要組成部分，承擔(dān)著重大動物疫病(包括人獸共患病)的監(jiān)測、檢測、診斷、流行病學(xué)調(diào)查、風(fēng)險評估和疫情信息的收集、匯總、分析、上報等技術(shù)性工作[2]，在動物疫病的預(yù)防和控制方面具有舉足輕重的作用。獸醫(yī)實驗室的建立是有效維護動物健康、保持畜牧業(yè)經(jīng)濟收益的重要建設(shè)，同時對動物疫病進行實驗室監(jiān)測是遏制動物疫病傳播的有效方式[3]。實驗室檢測能力比對是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理的主要抓手，也是科學(xué)評價和提高實驗室管理水平和檢測能力的重要手段[4]。為加強浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力建設(shè)，提升動物疫情監(jiān)測預(yù)警水平，自2011年開始，浙江省每年組織市本級和縣(市、區(qū))兩級實驗室開展動物疫病預(yù)防控制系統(tǒng)獸醫(yī)實驗室檢測能力比對，作為檢驗實驗室檢測能力的重要依據(jù)之一[5，6]，了解和掌握各實驗室檢測水平，并分析原因，查找不足，逐步改進，進一步提升檢測能力水平。本文分析了2018—2021年浙江省的市、縣獸醫(yī)實驗室檢測能力比對結(jié)果，希望通過此項工作進一步加強浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力建設(shè)，提升動物疫情監(jiān)測預(yù)警水平。

1 材料與方法

1.1 比對項目 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對共設(shè)置檢測項目20個(表1)，其中非洲豬瘟病毒核酸檢測、布魯氏菌病抗體檢測分別涉及3次、A型口蹄疫抗體檢測涉及2次。各設(shè)區(qū)市的市本級獸醫(yī)實驗室參加全部項目，各縣(市、區(qū))實驗室每3年至少參加1次能力比對，具有非洲豬瘟檢測授權(quán)的實驗室至少參加非洲豬瘟病毒核酸檢測項目，每次選擇2～3個比對項目。

表1 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目

1.2 比對方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑 2018—2021年不同比對項目選取的方法、依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)和所用試劑見表2。

表2 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑

1.3 比對樣品 由國家參考實驗室提供或相應(yīng)試劑公司生產(chǎn)，由浙江省動物疫病預(yù)防控制中心實驗室驗證、編號和分裝，每個檢測項目設(shè)5～6份盲樣，各參考值樣品數(shù)目不定。

1.4 比對樣品和檢測試劑盒遞送 為保證檢測的有效性，比對樣品存放于-20 ℃低溫冰箱，試劑盒按照要求存放。2018—2020年，比對樣品均由各實驗室專業(yè)人員到省疫控中心實驗室領(lǐng)取。2021年由于新冠肺炎疫情影響，比對樣品由省疫控中心于24 h內(nèi)寄到各參加比對實驗室。

1.5 評判標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體檢測、高致病性禽流感H7亞型抗體檢測、O型口蹄疫抗體檢測、H5亞型禽流感Re-11株抗體檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 全部比對樣品效價檢測值在參考值±1(包括參考值±1)范圍內(nèi)，判為結(jié)果正確；有1個及以上樣品效價檢測值偏離參考值±2及以上，判為結(jié)果存在較大偏差。

1.5.2 A型口蹄疫抗體檢測、布魯氏菌病抗體檢測(試管凝集試驗方法)、新城疫抗體檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 全部比對樣品效價檢測值在參考值±1(包括參考值±1)范圍內(nèi)，判為結(jié)果正確；有1個及以上樣品效價檢測值偏離參考值±1以上，判為結(jié)果存在較大偏差。

1.5.3 高致病性H7亞型禽流感病毒核酸鑒別檢測、豬瘟病毒核酸檢測、口蹄疫病毒和塞內(nèi)卡病毒核酸鑒別檢測、非洲豬瘟病毒核酸檢測、小反芻獸疫病毒核酸檢測、H5亞型禽流感病毒核酸檢測、豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸通用型檢測、口蹄疫病毒核酸檢測、布魯氏菌病抗體檢測(c-ELISA方法)評判標(biāo)準(zhǔn) 全部比對樣品檢測值與參考值完全一致，判為結(jié)果正確；與參考值不一致，判為結(jié)果存在較大偏差。

2 比對結(jié)果

2.1 總體情況 2018年，共有52個市、縣級獸醫(yī)實驗室(10個市級、42個縣級)參加比對。2019年，共有50個市、縣級獸醫(yī)實驗室(11個市級、39個縣級)參加比對。2020年，共有67個市、縣級獸醫(yī)實驗室(11個市級、56個縣級)參加比對。2021年，共有77個市、縣級獸醫(yī)實驗室(11個市級、66個縣級)參加比對，參加比對的實驗室數(shù)量整體呈上升趨勢。2018—2021年參加比對實驗室共檢測盲樣4 775份，檢測結(jié)果正確樣品4 649份，樣品平均檢測正確率為97.34%，2018—2020年樣品正確率逐步提升，2020年達(dá)到97.83%，2021年樣品正確率略有下降，為97.19%，見表3。

表3 2018—2021年各年度檢測能力比對結(jié)果統(tǒng)計

2.2 不同檢測項目比對結(jié)果 2018—2021年共開展了15個檢測項目的比對，不同檢測項目實驗室正確率介于78.57%～100%，見表4。

表4 2018—2021年獸醫(yī)實驗室不同檢測項目比對結(jié)果統(tǒng)計

續(xù)表

2.3 不同檢測方法比對結(jié)果 根據(jù)檢測的樣品不同，檢測類型分為血清學(xué)檢測和病原學(xué)監(jiān)測。血清學(xué)檢測包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、血凝抑制試驗(HI)、試管凝集試驗(SAT)。病原學(xué)檢測方法主要包括反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法和熒光RT-PCR。以上檢測方法基本涵蓋了市縣實驗室檢測的常用方法，不同檢測方法的檢測結(jié)果正確率平均值介于87.86%～93.36%，見表5。

表5 2018—2021年各年度不同檢測方法比對結(jié)果統(tǒng)計

3 討論

2018—2021年，參加比對實驗室數(shù)量不斷增加，由于檢測項目不同，實驗室正確率在73.08%～82.00%波動。與2015年實驗室正確率55%[7]、2016年實驗室正確率82.81%[8]、2017年實驗室正確率56.36%[6]相比，總體的實驗室正確率在不斷提升，說明各級系統(tǒng)內(nèi)獸醫(yī)實驗室檢測能力和水平在不斷提升。

從檢測項目來看，浙江省每年設(shè)置的檢測能力比對項目緊緊圍繞農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于重大動物疫病防控要求和浙江省實際情況，重點突出禽流感、非洲豬瘟、口蹄疫等重大動物疫病，同時又結(jié)合市、縣級實驗室的常規(guī)工作，既突出重點又貼近實際。禽流感、口蹄疫、新城疫等抗體檢測項目是各級實驗室常規(guī)的檢測項目，各參與比對實驗室正確率保持在較高水平。2019—2021年連續(xù)3年，浙江省獲得非洲豬瘟檢測能力授權(quán)的所有市縣獸醫(yī)實驗室均參加了非洲豬瘟病毒核酸檢測比對，2019年全部正確，2020年和2021年各有3個實驗室比對結(jié)果出現(xiàn)偏差，經(jīng)分析可能與操作不當(dāng)、陽性對照樣品污染其他樣品有關(guān)。隨著非洲豬瘟檢測量加大，實驗室污染風(fēng)險也隨之增加，需進一步加強實驗室生物安全防范。2018年和2020年都進行了A型口蹄疫抗體的檢測，實驗室正確率分別為96.15%和89.66%。

從檢測方法來看，各檢測項目選取的檢測方法與國家疫控中心對各省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對所用方法一致[4,9]。PCR類的檢測樣品結(jié)果正確率平均值達(dá)92.38%，其中熒光PCR的檢測正確率最高，2020年H5亞型禽流感病毒核酸檢測項目實驗室正確率達(dá)到100%。這可能與熒光PCR檢測為定性檢測，儀器直接讀取數(shù)據(jù)，人為干擾因素較少有關(guān)[10]。2020年新城疫抗體檢測項目實驗室正確率為86.67%，2021年H5亞型禽流感Re-11株抗體檢測項目實驗室正確率僅為78.57%，這與HI試驗所用紅細(xì)胞、血凝抗原需要實驗室自行制備，結(jié)果需要操作人員人為判定，存在主觀差異有關(guān)[11]。2018年和2020年布魯氏菌病抗體檢測項目實驗室正確率分別為97.83%和88.89%，這與SAT需要操作人員主觀判定結(jié)果，受操作熟練程度影響較大有關(guān)[12]。HI和SAT作為實驗室常用檢測技術(shù)，大部分實驗室操作比較熟練，結(jié)果符合率穩(wěn)定性較好，但仍有部分實驗室出現(xiàn)問題，這是由于定量檢測需要實驗室人員的綜合判定能力和經(jīng)驗，而機構(gòu)改革后，實驗室人員流動性較大、部分新進實驗室人員工作經(jīng)驗不足，影響結(jié)果判定。2020年A型口蹄疫抗體檢測有6個實驗室的部分樣品檢測值與參考值存在較大偏差，這可能是由于ELISA檢測方法又分為競爭ELISA、液相阻斷ELISA等眾多種類，部分實驗室對不同檢測方法檢測熟練度欠缺、檢測規(guī)范性和準(zhǔn)確性不夠，導(dǎo)致ELISA檢測結(jié)果穩(wěn)定性不高[13]。

通過近4年的檢測能力比對工作，部分實驗室還存在一些問題，主要表現(xiàn)在：一是部分實驗室血清學(xué)檢測規(guī)范性和準(zhǔn)確性有待提高；二是部分實驗室的分子生物學(xué)檢測技術(shù)需要加強；三是原始記錄和報告填寫有待改進，參加比對的部分實驗室存在檢測結(jié)果報告表填報不規(guī)范，原始記錄填寫不完整、不準(zhǔn)確、沒有可追溯性，檢測報告中檢測標(biāo)準(zhǔn)引用錯誤、缺少關(guān)鍵信息等問題，需進一步改進提升。

下一步工作建議：一是加強人員力量培訓(xùn)，針對比對工作出現(xiàn)偏差的實驗室，選派人員參加省級技術(shù)和理論知識輪訓(xùn)，切實提升實驗室檢測能力水平；二是開展實驗室檢測能力飛行檢查，在比對工作開展期間，省級選派相關(guān)技術(shù)人員抽檢市、縣實驗室進行指導(dǎo)監(jiān)督，幫助提升實驗室檢測能力；三是進一步加強獸醫(yī)實驗室管理，實驗室檢測能力提升需要強大的軟件和硬件支撐，建議進一步加強獸醫(yī)實驗室質(zhì)量管理體系和生物安全體系建設(shè)，以適應(yīng)新要求、新任務(wù)。

獸醫(yī)實驗室是動物疫病監(jiān)測工作的核心能力之一，統(tǒng)計近4年的比對結(jié)果，浙江省基層獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室整體檢測水平不斷提升，說明浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室整體檢測能力水平穩(wěn)步提升，對浙江省動物疫病防控以及食品安全和公共衛(wèi)生安全起到了重要技術(shù)支撐作用。同時要進一步查缺補漏，進一步提升檢測能力和水平。