王莉,曾浩洋（湖南省邵陽市食品藥品檢驗(yàn)所,湖南 邵陽 422099）

川芎是一種中藥植物，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效[1]，是臨床常用來治頭痛的要藥，也被贊譽(yù)為“血中氣藥”。川芎炮制歷史悠久，歷代的炮制方法有酒蒸、酒煮、炒黃、麩炒等，現(xiàn)代主要應(yīng)用生品和酒炙[2]。川芎生品氣厚辛香走竄，活血行氣，祛風(fēng)止痛力強(qiáng)；其酒炙后引藥上行，增強(qiáng)其活血、行氣、止痛的作用。有文獻(xiàn)表明，同等劑量下，川芎酒炙后藥效較生品更為顯著[3]。川芎中所含主要成分為阿魏酸等[4]，廣泛應(yīng)用于臨床治療。酒川芎為《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范（2010年版）》收載的飲片品種[5]。該標(biāo)準(zhǔn)中未收載含量測定方法，為使酒川芎飲片質(zhì)量得到更有效地控制，參照《中國藥典》2015年版一部川芎含量測定項(xiàng)下方法[6]，采用高效液相色譜法對酒川芎中阿魏酸的含量進(jìn)行了研究，具體內(nèi)容如下。

1 儀器與試藥

圖2 酒川芎樣品色譜圖

儀器：島津LC-20A高效液相色譜儀（DAD檢測器）；MS105DU電子天平（感量0.01mg），為梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn)。

試劑：甲醇（色譜純，TEDIA公司，19035087），水為超純水；其余所用試劑均為分析純。

對照品：阿魏酸（110773-201614，純度：99.0%），選自中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備 取阿魏酸對照品10.87mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備液（215.226μg/ml）。精密吸取對照品儲備液，加70%甲醇依次稀釋成濃度為107.613μg/ml、53.8065μg/ml、21.5226μg/ml、10.7613μg/ml、5.38065μg/ml、2.15226μg/ml的對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備 取本品粉末（過四號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件 色譜柱：Ultimate C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-1%醋酸水溶液（30∶70）；流速1.0mL·min-1；檢測波長為321nm；柱溫35℃。理論板數(shù)按阿魏酸計(jì)，不低于4000。

取對照品溶液、供試品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖（見圖1-2）。結(jié)果表明，樣品中其他成分對阿魏酸的測定無干擾。

圖1 阿魏酸對照品色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為107.613μg/ml、53.8065μg/ml、21.5226μg/ml、10.7613μg/ml、5.38065μg/ml、2.15226μg/ml的對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為：y=5648.3x-6482.8，R2=0.99999。結(jié)果表明：阿魏酸對照品在21.5226-1076.13ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一酒川芎供試品溶液（批號2019090911，生產(chǎn)企業(yè)：湖南然潤堂中藥有限公司），連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD（n=6）為0.32%，儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一酒川芎供試品溶液（批號2019090911，生產(chǎn)企業(yè)：湖南然潤堂中藥有限公司），分別于配制后的0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、16小時(shí)、24小時(shí)精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，其峰面積RSD為0.41%，結(jié)果表明：供試品溶液在配制后24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一酒川芎供試品（批號2019090911，生產(chǎn)企業(yè)：湖南然潤堂中藥有限公司），依法制備6份供試品溶液，測定并計(jì)算，RSD（n=6）為0.32%，表明重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 取已測定含量的同一酒川芎供試品（批號19102703-1，生產(chǎn)企業(yè)：湖南振興中藥有限公司）（含阿魏酸2.191mg/g）約0.25g（9份），精密稱定，置錐形瓶中，按80%、100%和120%的水平精密加入濃度為215.226μg/ml的阿魏酸對照品適量（見表1），依法制備供試品溶液，測定并計(jì)算，結(jié)果平均加樣回收率為98.8%，RSD為1.23%。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表

2.9 樣品含量測定結(jié)果 本次實(shí)驗(yàn)收集到的樣品為湖南省內(nèi)四個(gè)廠家提供的樣品，原藥材來源于兩個(gè)不同省份。樣品信息表見表2。對各企業(yè)提供的12批酒川芎樣品和3批川芎藥材進(jìn)行了含量測定，結(jié)果見表3。

表2 酒川芎樣品及對應(yīng)原藥材信息表

表3 酒川芎中阿魏酸含量測定結(jié)果及與川芎藥材中阿魏酸變化規(guī)律

不同廠家川芎炮制后，阿魏酸的含量差別較大，最高的為0.3712%，最低的為0.2021%。與藥材相比，有些炮制后阿魏酸含量基本不變，有些炮制后阿魏酸含量明顯降低。綜合多批次酒川芎阿魏酸的含量測定結(jié)果及實(shí)際考察情況，參考《中國藥典》2015年版一部“川芎”項(xiàng)下，擬定酒川芎中阿魏酸含量限度同藥材及飲片，為“本品按干燥品計(jì)算，含阿魏酸（C10H10O4）不得少于0.10%。”

2.10 耐用性試驗(yàn) 采用擬定的方法，采用不同的液相色譜儀，使用兩個(gè)不同的色譜柱對同一批樣品進(jìn)行測定，測定結(jié)果表明，本方法耐用性較好。

3 總結(jié)與討論

川芎中阿魏酸的含量測定已有報(bào)道[7-8]，但酒川芎中阿魏酸的含量測定鮮見報(bào)道，本文建立的含量測定方法，可以很好地應(yīng)用于酒川芎中阿魏酸的測定。本研究含量測定方法簡便、準(zhǔn)確，可用于川芎及其炮制品酒川芎中阿魏酸含量的測定研究。

由以上結(jié)果可知，四川產(chǎn)地的川芎原藥材樣品中阿魏酸的含量比安徽的高，湖南然潤堂中藥有限公司提供的酒川芎中阿魏酸含量最高，湖南新匯制藥股份有限公司提供的酒川芎中阿魏酸含量最低。而湖南然潤堂中藥有限公司采用的原藥材與湖南新匯制藥股份有限公司采用的原藥材均來自四川，且原藥材中阿魏酸含量并無太大差異，說明廠家炮制工藝對川芎中阿魏酸的含量變化影響很大。

由表3可以看出，酒川芎中阿魏酸含量相對于川芎藥材和飲片而言，其中一個(gè)企業(yè)稍有增加（無顯著性變化），但該企業(yè)提供的川芎原藥材為飲片，說明酒炙工藝對川芎中阿魏酸含量影響不大；另兩家企業(yè)提供的是川芎藥材，炮制后阿魏酸含量明顯下降，由于酒炙工藝對川芎中阿魏酸含量影響不大，推測可能是潤洗工藝對川芎中阿魏酸含量有較大影響，具體原因可作進(jìn)一步研究。