宋秋玲，代 嬌

（曲靖醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，云南曲靖 655000）

格雷夫斯?。℅raves disease，GD）是一類器官特異性自身免疫性甲狀腺疾病，是甲狀腺功能亢進(jìn)的主要病因〔1〕。流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，GD 的發(fā)病率為0.50%～2.30%，男性的發(fā)病率約為0.50%，而女性的發(fā)病率則高達(dá)3.00%左右〔2〕。GD 的主要特征為機(jī)體產(chǎn)生抗促甲狀腺激素受體抗體（thyroid stimulating hormone receptor antibody，TRAb），發(fā)揮類似促甲狀腺素（thyroid stimulating hormone，TSH）的生物學(xué)效應(yīng)，進(jìn)而引發(fā)甲狀腺功能亢進(jìn)和彌漫性甲狀腺腫〔3〕。雖然目前GD 的發(fā)病機(jī)理并不清楚，但越來越多的研究證實(shí)促炎-抑炎免疫平衡的破壞可導(dǎo)致甲狀腺淋巴細(xì)胞浸潤以及B 細(xì)胞活化，進(jìn)一步分泌自身抗體，而這些自身抗體在GD 病因?qū)W中扮演著重要的角色〔4〕。促炎-抑炎免疫平衡包括細(xì)胞因子和免疫細(xì)胞的失衡，其中細(xì)胞因子失衡包括白細(xì)胞介素-17（interleukin-17，IL-17）等促炎細(xì)胞因子異常上調(diào)，白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）等免疫抑制細(xì)胞因子異常下調(diào)；免疫細(xì)胞失衡包括近期研究較多的輔助性T 細(xì)胞（helper T cell，Th）17/調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）平衡破壞〔5〕。顆粒蛋白前體（progranulin，PGRN）是近期發(fā)現(xiàn)的一種免疫調(diào)控細(xì)胞因子，目前已有研究發(fā)現(xiàn)其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及干燥綜合征等多種自身免疫性疾病中存在異常表達(dá)〔6〕，機(jī)制學(xué)研究發(fā)現(xiàn)PGRN 可通過調(diào)控Th17/Treg 以及促炎-抑炎細(xì)胞因子平衡參與機(jī)體免疫調(diào)控。據(jù)此推測PGRN 可能在GD 發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著一定的作用，但目前關(guān)于PGRN 在GD 中的研究報道甚少，本研究將探究GD患者外周血中PGRN 的表達(dá)變化及其與IL-17、IL-10 的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 研究對象將2019 年3 月至2021 年5 月于曲靖市第二人民醫(yī)院內(nèi)分泌科就診且明確診斷為GD 的患者39 例（GD 組）納入研究，選取同期健康體檢者30 例作為健康對照（健康對照組）。GD 診斷主要依據(jù)甲狀腺功能亢進(jìn)的臨床證據(jù)，臨床典型癥狀為食欲增加但體質(zhì)量下降、疲勞、熱耐受不良、出汗增多及顫抖等；實(shí)驗(yàn)室依據(jù)為血清TSH 下降，游離三碘甲狀腺原氨酸（free triiodothyronine，F(xiàn)T3）、游離四碘甲狀腺原氨酸（free tetraiodothyronine，F(xiàn) T4）和TRAb 升高，其中TSH＜0.34 μIU/mL，F(xiàn) T3＞6.30 pmol/L，F(xiàn)T4＞24.50 pmol/L，TRAb＞30.00 IU/mL。所有患者均為初診患者且已排除自身免疫性疾病、其他慢性炎癥性疾病或腫瘤等。GD 組中，男性10 例，女性29 例；平均年齡（36.89±11.67）歲。健康對照組中，男性7 例，女性23 例；平均年齡（35.02±10.58）歲。2 組人群在性別、年齡等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 標(biāo)本處理采集清晨空腹靜脈血6 mL 分裝于2 管中，室溫靜置20 min 后4 000 r/min 離心10 min分離血清，其中一管用于血清F T3、F T4、TSH 和TRAb 水平的測定，另一管分離血清凍存于-80 ℃冰箱，用于血清PGRN、IL-17 和IL-10 水平的測定。

1.3 血清標(biāo)本測定采用電化學(xué)發(fā)光法測定血清FT3、FT4、TSH 和TRAb 水平；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定血清PGRN、IL-17 和IL-10 水平，ELISA 試劑盒均購自美國R&D 公司，所有操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 20.0 軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（）表示，組間比較使用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)性分析法分析PGRN 與IL-17、IL-10 的相關(guān)性，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組人群甲狀腺功能指標(biāo)比較甲狀腺功能測定結(jié)果顯示，GD 組患者血清FT3、FT4和TRAb 水平顯著高于健康對照組，血清TSH 水平顯著低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 2 組人群甲狀腺功能指標(biāo)比較（）

表1 2 組人群甲狀腺功能指標(biāo)比較（）

注：與健康對照組比較**P＜0.01。

2.2 2 組人群血清PGRN、IL-17 和IL-10 水平比較與健康對照組比較，GD 組患者血清PGRN 水平和促炎細(xì)胞因子IL-17 水平顯著升高，抑炎細(xì)胞因子IL-10 水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

表2 2 組人群血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平比較（）

表2 2 組人群血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平比較（）

注：與健康對照組比較**P＜0.01。

2.3 GD 組患者血清PGRN 與細(xì)胞因子IL-17、IL-10 的關(guān)系Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，GD 組患者血清PGRN 水平與IL-17 水平呈顯著正相關(guān)（r=0.508，P=0.008），與IL-10 水平呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.314，P=0.021）。

2.4 治療前后患者血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平變化比較GD 組患者接受131I 治療3 個月時再次測量其血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平，與治療前相比，血清PGRN、IL-17 水平顯著降低，IL-10 水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表3。

表3 GD 組患者治療前后血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平變化比較（）

表3 GD 組患者治療前后血清PGRN、IL-17 及IL-10 水平變化比較（）

注：與治療前比較**P＜0.01；此表中治療前各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)僅納入GD 組中完成隨訪的12 例患者數(shù)據(jù)，故與表2 中各指標(biāo)數(shù)據(jù)存在差異。

3 討論

GD 在中國人群中的發(fā)病率為0.25%～1.09%，但在女性中的發(fā)病率高達(dá)3.00%左右〔7〕。目前GD的病因?qū)W機(jī)理尚不十分清楚，雖然涉及環(huán)境因素，但有研究〔8-9〕表明免疫功能紊亂在其中扮演著重要的角色。免疫細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子已成為GD 致病機(jī)制領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，本研究發(fā)現(xiàn)相較于健康人群，GD 患者血清IL-17、IL-10 等細(xì)胞因子的表達(dá)水平存在異?，F(xiàn)象。此外，Yao 等〔10〕的研究已證實(shí)GD 中異常的Th2 細(xì)胞反應(yīng)非常重要，但Th2 細(xì)胞反應(yīng)理論并不能完全解釋GD 展現(xiàn)出的所有現(xiàn)象。Li 等〔11〕的研究發(fā)現(xiàn)CD4+T 淋巴細(xì)胞其他亞群（如Th17、Treg 及相關(guān)細(xì)胞因子）在自身免疫性甲狀腺疾病中均存在異常現(xiàn)象，其中Th17/Treg 免疫平衡紊亂已被證實(shí)在GD 的致病機(jī)理中非常重要。Qin等〔12〕的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Th17 及其轉(zhuǎn)錄因子RORγt和效應(yīng)細(xì)胞因子IL-17 在GD 患者中異常上調(diào)，Treg 細(xì)胞頻率顯著下降，在本研究中同樣發(fā)現(xiàn)IL-17 在GD 患者中表達(dá)水平異常上調(diào)，而本研究中的IL-10 是Treg 的直接效應(yīng)細(xì)胞因子，故可間接表明GD 患者存在Treg 細(xì)胞反應(yīng)下調(diào)現(xiàn)象。GD 患者接受131I 治療后，其促炎細(xì)胞因子IL-17 水平較治療前顯著下降，抑炎細(xì)胞因子IL-10 顯著上調(diào)，這也提示經(jīng)過治療后患者IL-17/IL-10 作用軸平衡有所恢復(fù)，免疫功能有所改善，然而何種因素參與調(diào)控Th17/Treg 免疫平衡紊亂尚不清楚。PGRN 是一類新發(fā)現(xiàn)的免疫調(diào)控性細(xì)胞因子，有研究〔13〕證實(shí)其可參與多個免疫信號通路的調(diào)控過程，它對Th17/Treg免疫平衡的調(diào)控也引發(fā)了學(xué)者的關(guān)注。本研究在GD 中發(fā)現(xiàn)PGRN 與IL-17 呈正相關(guān)，與IL-10 呈負(fù)相關(guān)，這也提示其可能通過調(diào)控IL-17/IL-10 作用軸參與了GD 的發(fā)病。這在既往研究中也有所證實(shí)，如Wang 等〔14〕發(fā)現(xiàn)在椎間盤退行性病變患者中PGRN 異常增加且可調(diào)控IL-17/IL-10 作用軸，進(jìn)而抑制炎癥；Li 等〔15〕在柯薩奇病毒B3 感染患者中發(fā)現(xiàn)PGRN 水平增加且可下調(diào)Th17 細(xì)胞分化并抑制細(xì)胞因子IL-17 的分泌；Wei 等〔16〕在結(jié)腸炎動物模型中發(fā)現(xiàn)PGRN 可誘導(dǎo)Treg 細(xì)胞分化及IL-10 分泌發(fā)揮保護(hù)作用，這些結(jié)果都表明PGRN 可能通過調(diào)控IL-17/IL-10 作用軸進(jìn)而在包括GD 在內(nèi)的多種自身免疫性炎癥性疾病中發(fā)揮抑制炎癥的生物學(xué)效應(yīng)。

本研究發(fā)現(xiàn)PGRN 在GD 患者中異常上調(diào)，與既往在多種自身免疫性疾病患者中發(fā)現(xiàn)的PGRN表達(dá)異常的研究結(jié)果類似，如Tanaka 等〔17〕在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中發(fā)現(xiàn)血清PGRN 顯著升高且與患者的臨床疾病活動度密切相關(guān)，PGRN 可中和患者外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）分泌白細(xì)胞介素-6 的能力〔18〕。體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)異常上調(diào)的PGRN 在這些疾病中發(fā)揮抑炎效應(yīng)，而之所以PGRN 出現(xiàn)高表達(dá)可能是機(jī)體出現(xiàn)了代償效應(yīng)，治療后PGRN 顯著下調(diào)的結(jié)果則提示其或可作為評估疾病嚴(yán)重程度以及預(yù)后評估的生物學(xué)標(biāo)志物。本研究并未分析PGRN 在體外對GD 患者PBMC 中IL-17 和IL-10 分泌能力的影響，將在下一步研究中深入分析。

綜上所述，本研究初步發(fā)現(xiàn)新型免疫調(diào)控因子PGRN 在GD 患者中的表達(dá)異常上調(diào)，且與IL-17、IL-10 存在顯著相關(guān)，經(jīng)過治療，PGRN 水平顯著下降，提示PGRN 可能參與了GD 的發(fā)病過程。