張心潔，廖洋樣，廖 婉，李 銳

成都中醫(yī)藥大學 西南特色中藥資源國家重點實驗室，藥學院，四川 成都 611137

姜黃為姜科植物姜黃Curcuma longaL.的干燥根莖，姜黃素是姜黃的主要活性成分之一，是一種以1,7-二芳基庚二烯為基本骨架的多酚類化合物[1]，具有抑菌抗炎、抗氧化、抗腫瘤、護肝利膽、抗阿爾茲海默癥和免疫調(diào)節(jié)腸道菌群等藥理作用[2-9]，且無明顯不良反應，可廣泛應用于醫(yī)藥領域和食品產(chǎn)業(yè)。然而，由于姜黃素水溶性差、口服吸收少、首過效應強、生物利用度低等缺陷[10-11]，嚴重限制其臨床應用與產(chǎn)品開發(fā)。因此，研制新型給藥系統(tǒng)、開發(fā)前體藥和聯(lián)合佐劑[12]，以期提高姜黃素口服吸收率和生物利用度，是近年來姜黃素的研究熱點。

固體脂質納米粒（solid lipid nanoparticles，SLN）是以天然或合成的固體脂質為載體材料，采用薄膜-超聲分散、乳化蒸發(fā)-低溫固化、高壓均質等制備方法，將生理相容性較好的藥物包裹或內(nèi)嵌于類脂核中，制成粒徑在1～1000 nm 的固態(tài)膠粒[13-14]；微膠囊是采用復凝聚、界面聚合、噴霧干燥等方法，將芯材物質包裹在天然或合成高分子材料的壁材中，形成具有半透性或密封性囊膜的藥庫型微粒[15-16]。這2 種制劑方法都能較高程度地避免藥物與外界環(huán)境的接觸，提高藥物的穩(wěn)定性和水溶性，增加藥物的靶向性和緩釋性，是目前解決姜黃素等難溶性藥物生物利用度低的重要手段。

本研究采用薄膜-超聲分散法制備姜黃素固體脂質納米粒（curcumin SLN，Cur-SLN），采用均質乳化-噴霧干燥法制備姜黃素微膠囊（curcumin microcapsules，Cur-MC），通過比較2 種姜黃素制劑的理化表征和SD 大鼠體內(nèi)藥動學行為，綜合評價2 種制劑方法，對提高姜黃素生物利用度的作用，為姜黃素制劑方法選擇提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

FA2204 型電子分析天平，上海衡平儀器儀表廠；YRE-201D 型旋轉蒸發(fā)儀，予華儀器有限公司；SB-5200DT 型超聲波清洗器、XHF-DY 型高速分散器，寧波新芝生物科技有限公司；TX-10 型超高壓微射流均質機，加拿大ATS 有限公司；B-290 型噴霧干燥機，瑞士Buchi 有限公司；Regulus-8100 型場發(fā)射掃描電子顯微鏡（SEM）、H-7800 型透射電子顯微鏡（TEM），日本日立公司；Litesizer 500 型激光粒度儀，奧地利Anton Paar 公司；Ultimate 3000型高效液相色譜儀，美國Thermo 公司；3H16RI型冷凍離心機，湖南赫西儀器有限公司；QL-901 型渦旋混合機，其林貝爾儀器公司；DN-12A 型氮吹儀，上海比朗儀器有限公司；X500R QTOF 型質譜儀、Triple QuadTM3500 型質譜儀，美國Sciex 公司；UPLC LC-30A 型超高效液相色譜儀，日本島津公司；Acquity UPLC H-Class 型超高效液相色譜儀，美國Waters 公司。

1.2 藥品與試劑

姜黃素，質量分數(shù)≥95%，批號C12811019，成都麥克林生物科技有限公司；姜黃素對照品，質量分數(shù)≥99%，批號201902AD，成都普思生物科技有限公司；馬錢苷對照品，批號DSTDM003802，質量分數(shù)≥98%，成都德思特生物科技有限公司；Cur-glu對照品，質量分數(shù)96.63%，批號LY-CH-20220217，廣州瓏瑩生物科技有限公司；硬脂酸、大豆卵磷脂、二氯甲烷、丙酮、聚山梨酯-80、無水乙醇，分析純，成都市科隆化學品有限公司；抗壞血酸鈉棕櫚酸酯、辛烯基琥珀酸淀粉鈉、麥芽糊精，食品級，浙江一諾生物科技有限公司；乙腈、甲醇和甲酸，色譜純，美國Sigma 公司；反滲透（reverse osmosis，RO）水，易普易達PLUS-E2-20TJ 純水機制備。

1.3 實驗動物

SPF 級雄性SD 大鼠，6 周齡，體質量200～220 g，購自成都達碩實驗動物有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（川）2020-030。飼養(yǎng)環(huán)境溫度20～25 ℃，相對濕度40%～50%。動物實驗由成都中醫(yī)藥大學動物倫理委員會標準，倫理批準號SYXK（川）2020-124。

2 方法與結果

2.1 Cur-SLN、Cur-MC 的制備與工藝對比

2.1.1 Cur-SLN 的制備 稱取0.6 g 姜黃素溶于35 mL 丙酮，超聲溶解，另取2.4 g 大豆卵磷脂和1.2 g硬脂酸溶于50 mL 二氯甲烷，將2 種溶液混合均勻，于40 ℃水浴旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑，待瓶壁形成均勻薄膜后，加入60 mL 1%聚山梨酯-80 溶液，超聲40 min，即得Cur-SLN 混懸液[17]。

2.1.2 Cur-MC 的制備 稱取2.0 g 姜黃素和0.1 g抗壞血酸棕櫚酸酯溶于20 mL 無水乙醇，超聲溶解，于50 ℃水浴旋蒸揮去溶劑，得到姜黃素-抗壞血酸棕櫚酸酯共晶體，另取4.0 g 新烯基琥珀酸淀粉鈉和3.0 g 麥芽糊精，溶于50 mL RO 水，65 ℃水浴攪拌至溶解，冷卻至40 ℃，加入共晶體，以6000 r/min 高速乳化20 min 得到初乳，100 MPa 高壓均質5 min，均質乳經(jīng)噴霧干燥處理（進風溫度為195 ℃，出風溫度為95 ℃），即得Cur-MC 固體粉末[18-19]。

2.1.3 2 種制備工藝的對比 Cur-SLN 和Cur-MC制備工藝的對比見表1，其中，輔料的分類與最大添加量參考GB 2760-2014《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》規(guī)定。

表1 Cur-SLN、Cur-MC 制備工藝的對比Table 1 Comparison of preparation techniques of Cur-SLN and Cur-MC

2.2 HPLC 法測定Cur-SLN 和Cur-MC 中姜黃素

2.2.1 供試品溶液的制備 將“2.1.2”項下制備得到的Cur-MC 按質量比1∶25 加入RO 水攪拌溶解，得到Cur-MC 復原乳。精密量取Cur-SLN 和Cur-MC復原乳各1 mL 置于10 mL 量瓶中，加入乙腈破乳并定容至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液1 mL 置于10 mL 量瓶中，加乙腈定容，經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.2.2 色譜條件 色譜柱為YMC-Pack ODS-A 分析柱（250 mm×4.6 mm，12 nm）；流動相為0.1%甲酸水溶液-乙腈（52∶48）；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長425 nm；進樣量10 μL。在該檢測條件下，姜黃素色譜峰峰形穩(wěn)定，無干擾，專屬性佳。

2.2.3 線性關系考察 精密稱取經(jīng)干燥處理的姜黃素對照品適量，溶于50 mL 乙腈，即得質量濃度為443.8 μg/mL 的姜黃素對照品儲備液。

取姜黃素儲備液適量，配制系列質量濃度為177.50、88.75、44.38、22.19、11.09、5.55 μg/mL 的對照品溶液，按“2.2.2”項下色譜條件進樣測定，以質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸分析，得回歸方程為Y＝1.430 5X＋2.047 3，R2＝0.999 2，結果表明姜黃素在5.55～177.50 μg/mL 線性關系良好。

2.2.4 精密度試驗 取質量濃度為44.38 μg/mL 的對照品溶液，連續(xù)測定6 次，姜黃素峰面積的RSD為1.74%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 取Cur-SLN 和Cur-MC，按“2.2.1”項下方法處理，分別制備Cur-SLN 和Cur-MC 供試品溶液，于室溫放置0、2、4、8、12、24 h 后進樣測定，結果姜黃素峰面積的RSD 分別為1.32%和1.45%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 重復性試驗 分別取Cur-SLN 和Cur-MC，按照“2.2.1”項方法平行制備Cur-SLN 和Cur-MC供試品溶液各6 份，HPLC 法測定姜黃素含量，結果顯示Cur-SLN 和Cur-MC 中姜黃素含量的RSD分別為1.83%和2.24%，表明該方法重復性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗 分別取Cur-SLN 和Cur-MC 復原乳各0.5 mL，置于10 mL 量瓶中，以制劑中姜黃素含量的50%、100%、150%加入姜黃素對照品后，按“2.2.1”項下方法處理，測定姜黃素含量，計算回收率，結果顯示Cur-SLN、Cur-MC 的平均加樣回收率分別為99.68%、98.69%，RSD 分別為1.15%、1.27%，表明該方法準確度良好。

2.3 Cur-SLN 和Cur-MC 的性狀表征

2.3.1 外觀形態(tài)的觀察 取姜黃素原料藥、Cur-SLN（經(jīng)干燥處理）、Cur-MC 適量，使用雙面碳膠帶將樣品粘到樣品臺，吹去多余粉末后金屬鍍膜，在加速電壓為15 kV 的SEM 下觀察并拍照；另取姜黃素原料藥、Cur-SLN 和Cur-MC 復原乳適量，加RO 水稀釋30 倍后，滴加于覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，采用1.0%磷鎢酸負染2 min，靜置晾干，在加速電壓為120 kV 的TEM 下觀察并拍照記錄。SEM 結果見圖1-A，姜黃素原料藥多為柱狀或塊狀結晶，Cur-SLN 多黏附聚集成不規(guī)則形狀，Cur-MC 多呈表面光滑的圓球狀，Cur-SLN 和Cur-MC 中均無姜黃素晶體的存在，表明姜黃素存在狀態(tài)改變；TEM 結果見圖1-B，游離姜黃素（free curcumin，Cur-F）無定形，大多聚集成團，分布不均，Cur-SLN 呈球狀，形態(tài)圓整，Cur-MC 呈橢球狀，外層可見囊壁結構，相較于Cur-F，二者粒子分散均勻，無聚集黏結現(xiàn)象。

圖1 Cur-F、Cur-SLN 和Cur-MC 的SEM 圖(×2500,A)與TEM 圖(×50 000,B)Fig.1 SEM image(× 2500,A)and TEM image(× 50 000,B)of Cur-F,Cur-SLN and Cur-MC

2.3.2 粒徑、ζ 電位的測定 按照“2.1”項下方法制備Cur-SLN 和Cur-MC，各3 批，RO 水溶解稀釋30 倍后，測定Cur-SLN 和Cur-MC 復原乳的粒徑分布及ζ 電位。Cur-SLN 和Cur-MC 復原乳的粒度分布見圖2-A，Cur-SLN 的平均粒徑為（184.3±7.9）nm，多分散指數(shù)（polydispersity index，PDI）為0.223±0.036，Cur-MC 復原乳的平均粒徑為（415.3±10.3）nm，PDI為0.181±0.030；Cur-SLN 和Cur-MC 復原乳的ζ 電位分布見圖2-B，Cur-SLN 的ζ 電位平均值為（-48.1±0.9）mV，Cur-MC 復原乳的ζ 電位平均值為（-16.4±0.4）mV。根據(jù)結果可知，Cur-SLN 體系的穩(wěn)定性優(yōu)于Cur-MC。

圖2 Cur-SLN(I)、Cur-MC(II)的粒徑分布(A)與ζ 電位(B)Fig.2 Particle size distribution(A)and ζ potential(B)of Cur-SLN(I)and Cur-MC(II)

2.3.3 包封率、載藥量的測定 精密量取Cur-SLN和Cur-MC 復原乳各2 mL，置于超濾離心管，8000 r/min 離心（離心半徑為9.21 cm）20 min，取續(xù)濾液1 mL 置于10 mL 量瓶，加乙腈定容至刻度，測定游離姜黃素的含量（W游離）；另取Cur-SLN 和Cur-MC 復原乳各1 mL，按“2.2.1”項下方法處理，采用HPLC 法測定姜黃素的總含量（W總），計算包封率和載藥量。經(jīng)測定，Cur-SLN 和Cur-MC 的包封率和載藥量結果見表2，Cur-SLN 和Cur-MC 的平均包封率分別為（92.33±1.04）%和（97.79±0.45）%，平均載藥量分別為（10.03±0.40）%和（19.97±0.12）%，結果表明，Cur-MC 的包封率和載藥量均大于Cur-SLN。

表2 Cur-SLN 和Cur-MC 的包封率和載藥量(±s,n = 3)Table 2 Entrapment efficiency and drug-loading capacity of Cur-SLN and Cur-MC(±s,n = 3)

表2 Cur-SLN 和Cur-MC 的包封率和載藥量(±s,n = 3)Table 2 Entrapment efficiency and drug-loading capacity of Cur-SLN and Cur-MC(±s,n = 3)

劑型 批次 包封率/% 載藥量/%Cur-SLN 1 91.19±0.56 9.59±0.25 2 93.23±0.62 10.14±0.31 3 92.57±0.60 10.37±0.11 Cur-MC 1 98.30±0.26 20.10±0.05 2 97.43±0.24 19.88±0.06 3 97.64±0.29 19.92±0.09

包封率＝(W總－W游離)/W總

載藥量＝(W總－W游離)/(W載體＋W總－W游離)

2.3.4 Cur-SLN 和Cur-MC 在水中溶解度的測定采用平衡法考察Cur-SLN、Cur-MC 和姜黃素原料藥在水中的溶解度。量/稱取Cur-SLN、Cur-MC 和姜黃素原料藥過量，分別加入RO 水適量，形成過飽和溶液，于（25±2）℃攪拌溶解，直至溶解平衡，靜置后取上清液，照“2.2.1”項下破乳處理后經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜濾過，采用HPLC 法測定姜黃素含量。經(jīng)測定，Cur-SLN 和Cur-MC 在水中姜黃素的溶解度分別為（0.23±0.02）、（0.17±0.01）g/L，而姜黃素原料藥在水中幾乎不溶，HPLC 無法檢出姜黃素，Tabanelli 等[20]研究發(fā)現(xiàn)姜黃素的溶解度約為11 μg/L，表明Cur-SLN、Cur-MC 可顯著提高姜黃素的水溶性。

2.4 體外釋藥性能的考察

采用透析法考察Cur-SLN 和Cur-MC 的釋藥特點，以含40%乙醇的生理鹽水作為釋放介質，溫度為（37±1）℃，轉速為150 r/min。精密量/稱取Cur-SLN、Cur-MC 和姜黃素原料藥適量（姜黃素含量均為5 mg），加入等量釋放介質混勻后，分別裝入預處理好的透析袋（截留相對分子質量12 000）內(nèi)，置于200 mL 釋放介質中，于1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72 h 分別取樣5 mL，并及時補充空白介質5 mL。HPLC 法測定姜黃素含量，計算累積釋放率，繪制體外釋藥曲線。

結果見圖3，姜黃素原料藥在12 h 內(nèi)快速釋藥，此后釋放介質中藥物濃度無明顯變化，累積釋放率為51.12%，這可能是由于姜黃素混懸液中姜黃素主要以大顆粒形態(tài)存在，與釋放介質的接觸面積小，難以溶出。而Cur-SLN 和Cur-MC 在72 h 內(nèi)的藥物累積釋放率分別為87.79%、83.02%，前12 h 釋藥迅速，累積釋放率分別為68.69%、59.73%，屬于突釋階段，這可能與制劑中存在少量游離姜黃素有關，12 h 后釋藥速率減慢，屬于緩釋階段；采用零級、一級和Higuchi 釋藥模型對Cur-SLN、Cur-MC 的體外釋藥行為進行擬合，發(fā)現(xiàn)二者的體外釋過程均符合一級釋藥模型，Cur-SLN 的擬合方程為Mt＝83.911 2(1-e-0.1155t)（R2＝0.987 4），Cur-MC 的擬合方程為Mt＝76.894 8(1-e-0.1094t)（R2＝0.986 6）。

圖3 Cur-F、Cur-SLN 和Cur-MC 的體外釋藥曲線(±s,n = 3)Fig.3 In vitro release curve of Cur-F,Cur-SLN and Cur-MC(±s,n = 3)

2.5 動物給藥、血樣采集與預處理

將SD 雄性大鼠隨機分為3 組，每組8 只。采用RO 水稀釋姜黃素原料藥、Cur-SLN 和Cur-MC，按200 mg/kg 的給藥劑量（以姜黃素含量計），3 組大鼠分別ig Cur-F、Cur-SLN 和Cur-MC 后，于給藥后0.5、1、2、4、6、8、12、24、48 h 經(jīng)眼眶后靜脈叢取血0.5 mL，血樣置于1%肝素鈉生理鹽水離心試管，于4 ℃、10 000 r/min 離心（離心半徑為8.5 cm）6 min，取上清液，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.6 體內(nèi)代謝產(chǎn)物的結構鑒定（定性分析）

2.6.1 血漿樣品的處理 取9 個時間點的血漿各50 μL 混合均勻，加入2 mL 乙腈沉淀蛋白，渦旋振蕩2 min，10 000 r/min 離心（離心半徑為8.5 cm）6 min，取上層有機相，于30 ℃氮氣吹干，加入200 μL 甲醇，渦旋振蕩1 min，超聲處理2 min，10 000 r/min 離心（離心半徑為8.5 cm）3 min，取上清液進行檢測。

2.6.2 UPLC-QTOF-ESI-MS/MS 分析條件

（1）色譜條件：色譜柱為Perkin Elmer C18分析柱（50 mm×2.1 mm，1.9 μm）；流動相為0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脫：0～3 min，10%～30%乙腈；3～6 min，30%～50%乙腈；6～9 min，50%～70%乙腈；9～12 min，70%～90%乙腈；12～13 min，90%乙腈；13～14 min，90%～10%乙腈；體積流量0.3 mL/min；柱溫35 ℃；檢測波長425 nm；進樣量5 μL。

（2）質譜條件：電噴霧離子源（ESI）；負離子模式；離子源溫度330 ℃；氣簾氣172.369 kPa（25 psi）；離子化電壓-4500 V；離子源氣體1 344.738 kPa（50 psi）；離子源氣體2 344.738 kPa（50 psi）；碰撞氣體48.263 kPa（7 psi）。

2.6.3 姜黃素及其代謝產(chǎn)物Cur-glu 的質譜裂解與結構鑒定 姜黃素及其代謝產(chǎn)物Cur-glu 的提取離子流、二級質譜圖與推測的裂解途徑見圖4，鑒定發(fā)現(xiàn)在該分析條件下，姜黃素的特征碎片離子為[M－H]-m/z367.112 4、217.067 8、149.072 6，Curglu 的特征碎片離子為[M－H]-m/z543.196 5、367.116 7、217.068 1。結合對照品的特征裂解質譜圖分析鑒定，表明大鼠血漿代謝物中含有姜黃素原型成分及其II相葡萄糖醛酸代謝化產(chǎn)物Cur-glu。

圖4 姜黃素(A)與Cur-glu(B)的提取離子流(I)、二級質譜(II)和裂解途徑分析(III)Fig.4 XIC chromatograms(I),secondary mass spectrum(II)and fragmentation pathways analysis(III)of curcumin(A)and Cur-glu(B)

2.7 血漿中血藥濃度的檢測（定量分析）

2.7.1 對照品與內(nèi)標儲備液的制備 分取姜黃素對照品、Cur-glu 對照品和馬錢苷對照品適量，精密稱定，甲醇溶解，配制成姜黃素儲備液（63.40 μg/mL）、Cur-glu 儲備液（425.50 μg/mL）和內(nèi)標儲備液（32.34 μg/mL）。分取姜黃素儲備液和Cur-glu 儲備液稀釋成質量濃度為0.20、0.40、0.79、1.58、3.17、6.34、12.68 μg/mL 的系列姜黃素對照品溶液和0.83、3.32、13.30、26.60、53.19、106.38、212.75 μg/mL 的系列Cur-glu 對照品溶液；姜黃素和Cur-glu 質控溶液的高、中、低質量濃度分別為10.14、2.03、0.40 μg/mL和170.20、17.02、1.70 μg/mL。

2.7.2 血漿樣品的處理 取210 μL 血漿，加入20 μL 內(nèi)標溶液（3.23 μg/mL），渦旋振蕩2 min，超聲處理1 min，加入1 mL 乙腈沉淀蛋白，10 000 r/min的轉速離心（離心半徑為8.5 cm）6 min，取上層有機相，于30 ℃氮氣吹干，加入100 μL 甲醇，渦旋振蕩1 min，超聲處理2 min，10 000 r/min 離心（離心半徑為8.5 cm）3 min，取上清液檢測。

2.7.3 UPLC-ESI-MS/MS 分析條件

（1）色譜條件：色譜柱為Analytical DB C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.9 μm）；流動相為0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脫：0～2 min，5%～30%乙腈；2～3 min，30%～40%乙腈；3～5 min，40%～50%乙腈；5～7 min，50%～95%乙腈；7～8 min，95%～5%乙腈；8～9 min，5%乙腈；體積流量0.3 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長425 nm；進樣量5 μL。

（2）質譜條件：ESI源；負離子模式掃描；離子源溫度330 ℃；氣簾氣241.317 kPa（35 psi）；離子化電壓-4500 V；離子源氣體1 110.316 kPa（16 psi）；離子源氣體2 124.106 kPa（18 psi）；碰撞氣體48.263 kPa（7 psi）；定量分析的離子反應對為姜黃素m/z367.1→217.1，碰撞能-20 V；Cur-glum/z543.0→217.1，碰撞能-27 V；馬錢苷m/z389.1→226.7，碰撞能-15 V。

2.7.4 方法學考察

（1）專屬性：將適量姜黃素、Cur-glu 和馬錢苷對照品溶液加入空白血漿樣品中作為加標樣品，在多反應監(jiān)測（multi-reaction monitoring，MRM）模式下檢測，通過對比空白血漿樣品、加標血漿樣品與給藥組血漿樣品的質譜圖，確定分析方法的專屬性。結果見圖5，2 個待測物與內(nèi)標物相互之間無檢測干擾，且血漿基質不會對檢測造成內(nèi)源性干擾，表明分析方法的專屬性良好。

圖5 姜黃素、Cur-glu 和馬錢苷的提取離子色譜圖Fig.5 MRM ion chromatograms of curcumin,Cur-glu and loganin

（2）線性關系考察與定量限：取210 μL 血漿，加入“2.7.1”項下系列對照品溶液各10 μL，按“2.7.2”項下方法處理，制備分別含0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.63、1.27 μg/mL 姜黃素和0.08、0.33、1.33、2.66、5.32、10.64、21.28 μg/mL Cur-glu 以及3.23 μg/mL 馬錢苷內(nèi)標物的血漿樣品，以待測物與內(nèi)標物的峰面積比值為橫坐標（X），待測物的質量濃度為縱坐標（Y），進行線性回歸分析；另取姜黃素、Cur-glu 對照品溶液逐漸稀釋，按“2.7.2”項下方法處理后進樣測定，以信噪比為10 的質量濃度作為定量限。得到姜黃素的標準曲線回歸方程為Y＝0.088 6X－0.025 0，R2＝0.995 1，表明姜黃素在0.02～1.27 μg/mL 線性關系良好，定量限為19.81 ng/mL；Cur-glu 的標準曲線回歸方程為Y＝0.140 3X－0.065 8，R2＝0.998 8，表明Cur-glu 在0.08～21.28 μg/mL 線性關系良好，定量限為20.78 ng/mL。

（3）精密度與準確度：取210 μL 空白血漿和10 μL 質控溶液，按“2.7.2”項下方法處理，制備高、中、低3 個質量濃度的質控樣品（姜黃素：1.01、0.20、0.04 μg/mL；Cur-glu：17.02、1.70、0.17 μg/mL），各質量濃度平行制備6 份，分別在1、3 d 內(nèi)連續(xù)測定，結果見表3，待測物的日內(nèi)精密度和日間精密度均小于15%，準確度在±15%以內(nèi)，符合生物樣品的分析要求，該方法適用于大鼠血漿中姜黃素和Cur-glu 的含量測定。

表3 姜黃素和Cur-glu 的日內(nèi)、日間精密度及準確度(±s)Table 3 Intra-and inter-day precision and accuracy of curcumin and Cur-glu(±s)

表3 姜黃素和Cur-glu 的日內(nèi)、日間精密度及準確度(±s)Table 3 Intra-and inter-day precision and accuracy of curcumin and Cur-glu(±s)

待測物 質量濃度/(μg·mL-1)日內(nèi)（n＝6）日間（n＝3）平均值/(μg·mL-1)準確度/% 精密度/% 平均值/(μg·mL-1)準確度/% 精密度/%姜黃素 0.04 0.041±0.004 2.08 8.68 0.039±0.003-3.33 7.47 0.20 0.205±0.008 2.50 4.12 0.204±0.009 1.83 4.46 1.01 1.033±0.031 2.24 3.02 0.990±0.032-1.98 3.27 Cur-glu 0.17 0.172±0.011 1.47 6.43 0.176±0.007 3.33 4.00 1.70 1.727±0.076 1.57 4.41 1.653±0.081-2.75 4.89 17.02 17.197±0.333 1.04 1.94 16.823±0.631-1.16 3.75

（4）加樣回收率和基質效應：按“2.7.2”項下方法處理制備高、中、低質量濃度的質控樣品（A）；取空白血漿按“2.7.2”項下方法處理后取上清液，每90 μL 上清液加入10 μL 質控溶液，制備高、中、低質量濃度質控樣品（B）；取甲醇制備與質控樣品等質量濃度的質控溶液（C）。計算A 與C 溶液、B與C 溶液的峰面積比值，分別確定回收率和基質效應。姜黃素各質量濃度的回收率為 89.65%～96.27%，RSD 小于9.34%，基質效應為86.28%～97.52%，RSD 小于5.68%；Cur-glu 各質量濃度的回收率為91.73%～98.15%，RSD 小于6.96%，基質效應為90.59%～97.36%，RSD 小于4.21%，符合生物樣品分析對回收率和基質效應的要求。

（5）穩(wěn)定性：平行制備高、中、低質量濃度的質控樣品各6 份，分別于室溫儲存6 h、-80 ℃儲存30 d、-20 ℃至室溫反復凍融3 次后進樣分析，計算各成分的質量濃度，進行短期、長期和凍融穩(wěn)定性的考察。3 個質量濃度的姜黃素和Cur-glu 質控樣品短期穩(wěn)定性的準確度為-6.57%～1.53%，長期穩(wěn)定性的準確度為-6.21%～2.34%，凍融穩(wěn)定性的準確度為-11.89%～0.56%。準確度均在±15%范圍內(nèi)，表明樣品穩(wěn)定性好，符合生物樣品分析要求。

2.7.5 體內(nèi)藥動學研究 取Cur-F 組、Cur-SLN 組和Cur-MC 組的血漿樣品，照“2.7.2”項下方法處理后進行含量測定，繪制血藥濃度-時間曲線見圖6，采用PK Solver 2.0 軟件對所得數(shù)據(jù)進行非房室模型進行分析，計算得出相關的藥動學參數(shù)，并對各組主要的藥動學參數(shù)應用SPSS 26.0 進行獨立樣本t檢驗，結果見表4。

表4 ig 后大鼠血漿中姜黃素和Cur-glu 的藥動學參數(shù)(±s,n = 8)Table 4 Pharmacokinetic parameters of curcumin and Cur-glu in rat plasma after ig(±s,n = 8)

表4 ig 后大鼠血漿中姜黃素和Cur-glu 的藥動學參數(shù)(±s,n = 8)Table 4 Pharmacokinetic parameters of curcumin and Cur-glu in rat plasma after ig(±s,n = 8)

與Cur-F 組比較：**P＜0.01**P ＜ 0.01 vs Cur-F

參數(shù) 單位 姜黃素 Cur-glu Cur-F Cur-SLN Cur-MC Cur-F Cur-SLN Cur-MC AUC0～t h·μg·mL-1 2.63±0.18 10.39±1.04** 8.77±0.91** 49.50±4.83 275.97±27.93** 187.27±27.94**AUC0～∞ h·μg·mL-1 3.48±0.22 18.48±2.04** 14.60±1.82** 51.05±4.89 287.56±30.38** 190.56±27.81**MRT0～∞ h 31.88±1.83 59.36±2.15** 52.11±3.77** 14.43±0.30 16.98±0.22** 15.53±0.24**t1/2 h 24.65±2.85 44.42±1.62** 38.93±3.42** 9.27±0.50 11.36±0.30** 9.46±0.42 tmax h 4.00 2.00 2.00 4.00 2.00 2.00 Cmax μg·mL-1 0.20±0.01 0.51±0.05** 0.46±0.05** 3.78±0.54 17.81±1.62** 9.31±1.05**CL/F L·h-1·kg-1 57.69±3.92 10.93±1.18** 13.88±1.68** 3.95±0.38 0.70±0.08** 1.07±0.16**

圖6 ig 后大鼠血漿中姜黃素(A)和Cur-glu(B)的血藥濃度-時間曲線(±s,n = 8)Fig 6 Concentration-time curves of curcumin(A)and Curglu(B)in rat plasma after ig(±s,n = 8)

與Cur-F 組相比，Cur-SLN 組與Cur-MC 組姜黃素的達峰濃度（Cmax）分別由（0.20±0.01）μg/mL顯著提高至（0.51±0.05）、（0.46±0.05）μg/mL，且半衰期（t1/2）、平均滯留時間（MRT0～∞）顯著延長，達峰時間（tmax）由4 h 提前至2 h，相對生物利用度分別提高了4.31 和3.19 倍；與Cur-F 組相比，Cur-SLN 組與Cur-MC 組Cur-glu 的Cmax分別由（3.78±0.54）μg/mL 顯著提高至（17.81±1.62）、（9.31±1.05）μg/mL，MRT0～∞顯著增加，Cur-SLN 組的t1/2顯著延長，而Cur-MC 組的t1/2有所延長，但無顯著性差異，口服相對生物利用度分別增加4.63和2.73 倍。

3 討論

姜黃素作為中藥姜黃含量豐富的有效成分，藥理作用廣泛、安全范圍大，醫(yī)藥、大健康及食品產(chǎn)業(yè)等領域對其的需求日益增加，然而受制于溶解度差、生物利用度低等缺陷，姜黃素相關產(chǎn)品的開發(fā)與應用十分有限[21]，因此，尋求有效提高姜黃素水溶性和生物利用度的方法是推動姜黃素產(chǎn)業(yè)發(fā)展亟待解決的關鍵。

采用薄膜-超聲分散法制備得到的Cur-SLN 微粒圓整均一、分布均勻，粒徑在200 nm 左右，可顯著提高姜黃素在水溶液中的溶解度，體外釋藥行為符合一級釋藥模型，具有一定的緩釋效果；SD 大鼠給藥Cur-SLN 后，相較于游離姜黃素，血漿中姜黃素及葡萄糖醛酸代謝物Cur-glu 的藥動學參數(shù)有了顯著提升，姜黃素的口服相對生物利用度提高了4.31 倍，Cur-glu 提高了4.63 倍。采用均質乳化-噴霧干燥法制備得到的Cur-MC 微粒表面光滑、囊壁無破損皺縮，復原乳粒徑在400 nm 左右，可有效提高姜黃素的水溶性，體外釋藥行為同樣符合一級釋藥模型且具有緩釋效果；口服給藥后，SD 大鼠血漿中姜黃素與Cur-glu 的相關藥動學參數(shù)，較Cur-F 組均顯著提高，相對生物利用度分別增加了3.19 和2.73 倍。

依據(jù)藥物溶出度和腸道滲透性原理，生物藥劑學分類系統(tǒng)（biopharmaceutics classification system，BCS）將姜黃素歸于低溶解性、低滲透性的第IV 類藥物，姜黃素水溶性差、代謝快，能與多藥耐藥蛋白轉運體相結合致使藥物外排[22]，從而導致其口服生物利用度低，藥效難以發(fā)揮。Cur-SLN 和Cur-MC通過降低姜黃素顆粒粒徑達到納米級，增加比表面積，提高其在水中的溶解度，還能提高在黏膜上皮細胞中的溶解度和通透性，促進胃腸道吸收進入機體循環(huán)，從而提高姜黃素的口服生物利用度；此外，Cur-SLN 的表面活性劑可抑制P-糖蛋白的外排作用，脂質成分可促使腸道內(nèi)形成乳糜顆粒[23-24]，進一步提高姜黃素的生物利用度。

2 種制劑方法均能顯著提高姜黃素的溶解度和生物利用度，其中，Cur-SLN 的制備方法簡單便捷，對設備儀器的需求不高，但該方法使用丙酮、二氯甲烷作為分散溶劑，存在有機殘留的風險，安全性難以保證，且載藥量較低，目前難以實現(xiàn)單分散產(chǎn)品的商業(yè)化生產(chǎn)，多適用于實驗室階段的小試試驗。Cur-MC 的制備選用乳化性和成膜性俱佳的辛烯基琥珀酸淀粉鈉作為壁材，輔以麥芽糊精改善其氧化穩(wěn)定性[19]，綠色環(huán)保、安全性高，成品為固體粉末，載藥量較高，具有性質穩(wěn)定、可長期儲存、運輸攜帶方便等優(yōu)勢，且噴霧干燥法操作簡單、成本低廉，易于實現(xiàn)工業(yè)自動化連續(xù)生產(chǎn)[25-26]。

綜上所述，固體脂質納米粒和微膠囊均能顯著改善姜黃素水溶性和生物利用度，且固體脂質納米粒略優(yōu)于微膠囊，是目前實驗室初步試驗的優(yōu)選，但由于其輔料的安全性、制劑的局限性等多重因素的限制，還需進一步改善制備方法以適應食品健康行業(yè)的大生產(chǎn)。姜黃素微膠囊的輔料安全性高、載藥量大，可優(yōu)化其工藝條件以減小粒徑，進而更好地提高姜黃素的生物利用度。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突