張傳津 牛華星 魏茂蓮

(山東省飼料獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心，山東 濟(jì)南 250010)

喉氣管炎(Laryngotracheitis，LT)是雞的一種病毒性呼吸道傳染病，喉氣管炎病毒(LTV)屬于皰疹病毒科的α皰疹病毒亞科，雞是LTV的自然宿主，可引起雞死亡和產(chǎn)蛋下降，感染LTV后一般在6～12d出現(xiàn)臨床癥狀，在氣管內(nèi)人工感染的潛伏期較短，一般為2～4d，典型的癥狀為流涕和濕性啰音，后出現(xiàn)氣喘咳嗽，此病嚴(yán)重流行的特征是明顯的呼吸困難并咳出血樣黏液，本病嚴(yán)重流行的發(fā)病率在90%～100%，死亡率在5%～70%，平均為10%～20%。溫和型的癥狀包括病雞消瘦、產(chǎn)蛋下降、流淚、結(jié)膜炎、眶下竇腫脹、持續(xù)性流涕和出血性結(jié)膜炎等。目前沒(méi)有LTV傳播給人或者其它哺乳動(dòng)物的證據(jù)。該病主要通過(guò)呼吸道及眼傳染，也可經(jīng)消化道傳染。本病自然感染潛伏期為6～12d，感染后排毒期為6～8d，少部分康復(fù)雞可以長(zhǎng)期帶毒，排毒期可以長(zhǎng)達(dá)2a。雞傳染性喉氣管炎主要呈地方性流行，同群傳播較快，群間傳播較慢[1,2]。病變損傷可以出現(xiàn)在感染雞的結(jié)膜和整個(gè)呼吸道，但最常見(jiàn)于喉頭和氣管。喉頭和氣管的變化輕微時(shí)僅存在過(guò)量的黏液，嚴(yán)重時(shí)則有出血或者白喉樣病變。溫和型的LT損傷輕微，僅包括結(jié)膜炎、竇炎、黏膜性氣管炎。嚴(yán)重感染時(shí)，初期為黏液性炎癥，隨后出現(xiàn)變性、壞死和出血。常出現(xiàn)白喉型病變，可以看到黏液團(tuán)延伸于整個(gè)氣管。一些病例出血嚴(yán)重進(jìn)入氣管內(nèi)形成血塊，或者血液中混合黏膜及壞死的組織。炎癥可以向下擴(kuò)散到肺臟和氣囊。在溫和型的LT中，大體病變可能僅是結(jié)膜上皮和眶下竇水腫、充血。LTV感染雞只后，病毒在咽喉和氣管的上皮細(xì)胞及其他的表膜黏液如結(jié)膜、呼吸竇、氣囊和肺臟中復(fù)制。LTV對(duì)這些組織通常是細(xì)胞裂解性的，尤其是氣管，導(dǎo)致上皮細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷和出血。臨床上，LTV持續(xù)存在的一個(gè)主要特征是呼吸道潛伏感染。目前還沒(méi)有有效的藥物來(lái)減輕病變和減緩發(fā)病癥狀。疫苗接種是使易感雞群產(chǎn)生保護(hù)的最好方法。但目前使用的弱毒疫苗可引起一系列副反應(yīng)，如由免疫雞傳遞給非免疫雞、產(chǎn)生潛伏帶毒雞，或者由于體外病毒的傳代導(dǎo)致毒力增強(qiáng)[1,2]。對(duì)于雞傳染性喉氣管炎，西醫(yī)常采用的治療方法為抗病毒藥結(jié)合抗生素，目的在于緩解癥狀、降低死淘率。但是，該方法弊端明顯，不僅會(huì)對(duì)雞的肝臟及腎臟造成損傷，影響雞的生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)蛋率的恢復(fù)，而且易產(chǎn)生耐藥性，難以避免藥殘等問(wèn)題。研究證明，許多中藥具有抗病毒和增強(qiáng)免疫的作用，且應(yīng)用安全。

中獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為，雞傳染性喉氣管炎屬于典型的溫病范疇，溫?zé)嵯噍o相成，病位在肺，證見(jiàn)痰飲咳喘。李景峰等[3]根據(jù)中醫(yī)溫病學(xué)辨證論治的原則，研制防治雞傳染性喉氣管炎的純中藥散劑，主要由梔子、連翹、菊花、蟾酥、杏仁、冰片、牛黃、麻黃、黃芪、黨參、杏仁等組方而成，對(duì)患有傳染性喉氣管炎的病雞用此方進(jìn)行防治試驗(yàn)，試驗(yàn)分別設(shè)置了預(yù)防組和治療組，結(jié)果顯示，預(yù)防用藥組發(fā)病率為6%，空白對(duì)照組為78%，自然感染組的治愈率達(dá)98%以上，療效顯著；楊俊琦[4]選用黃芪、大青葉、連翹、桂枝、板藍(lán)根等中藥自組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)中藥配方，以觀(guān)察3組配方對(duì)人工感染雞傳染性喉氣管炎(ILT)的治療效果，用藥5～7d后，發(fā)現(xiàn)Ⅰ號(hào)方劑的治療效果較顯著，存活率為96%，不僅改善傳染性喉氣管炎的臨床癥狀，同時(shí)還具有增重效果。東彥新等[5]研發(fā)了2種治療雞傳染性喉氣管炎的中藥復(fù)方散劑配方，對(duì)人工感染雞傳染性喉氣管炎的治療試驗(yàn)結(jié)果表明，用藥組的臨床癥狀及病理剖檢結(jié)果均明顯好于攻毒對(duì)照組，其中方Ⅱ的治療效果優(yōu)于方Ⅰ。陳慶勛等[6]根據(jù)雞傳染性喉氣管炎的發(fā)病特點(diǎn)，研發(fā)2組治療雞傳染性喉氣管炎純中藥配方，用藥途經(jīng)分別為內(nèi)服與噴灑咽喉，人工攻毒出現(xiàn)癥狀后開(kāi)始用藥，結(jié)果顯示，采用內(nèi)服與噴灑咽喉相結(jié)合的用藥方法效果顯著，發(fā)病雞存活率明顯高于其它對(duì)照組。杜云良等[7]研發(fā)的復(fù)方中藥散劑，對(duì)人工感雜雞傳染性喉氣管炎的產(chǎn)蛋期蛋雞進(jìn)行防治試驗(yàn)，分別采用直接拌料和開(kāi)水沖泡后的藥液混飲給藥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沖泡給藥組的治療效果優(yōu)于直接拌料組，且不影響產(chǎn)蛋率。

從中獸醫(yī)辨證論治學(xué)說(shuō)而言，雞傳染性喉氣管炎屬于典型的溫?zé)岵》懂?，治療?yīng)以祛除熱邪，清肺利咽，化痰止咳平喘為原則。對(duì)于本病的防治，我國(guó)學(xué)者雖進(jìn)行大量研究，也證實(shí)了中藥在治療雞傳染性喉氣管炎中的確切療效，但是這些研究成果只停留在中藥散劑及單獨(dú)的煎湯使用，與集約化的養(yǎng)殖現(xiàn)狀不匹配。目前《中國(guó)獸藥典》等法定標(biāo)準(zhǔn)收載的喉炎凈散、清肺散、定喘散等對(duì)治療ILT有一定的療效。然而，這些傳統(tǒng)中藥散劑只能混飼給藥，不適合目前集約化養(yǎng)殖企業(yè)用藥。銀黃二陳合劑是純中藥復(fù)方新制劑，由多味藥物提取、濃縮而成的口服溶液劑，具有清熱燥濕、化痰止咳、理氣和中之功效。本產(chǎn)品通過(guò)優(yōu)化中藥材提取工藝、濃縮工藝、成型工藝等技術(shù)環(huán)節(jié)，中藥有效成分轉(zhuǎn)移率提高10%～30%，從而也提高了藥效、生物利用度和臨床疾病治愈率。通過(guò)銀黃二陳合劑對(duì)確診為傳染性喉氣管炎的自然感染雞群的防治試驗(yàn)，驗(yàn)證銀黃二陳合劑對(duì)雞傳染性喉氣管炎病毒等引起的溫?zé)峥人宰C候的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物

銀黃二陳合劑，批號(hào)20210701，山東迅達(dá)康獸藥有限公司生產(chǎn)。對(duì)照藥物，桑仁清肺口服液，批號(hào)20210201，山東華爾康獸藥有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

山東濰坊某養(yǎng)殖場(chǎng)中自然發(fā)病的60日齡海藍(lán)褐蛋雞。

1.1.3 主要儀器設(shè)備

PCR儀(AB2700)，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)中國(guó)公司；凝膠成像分析儀(WD-9413A)，北京六一儀器廠(chǎng)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)病例診斷和納入標(biāo)準(zhǔn)

經(jīng)查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，根據(jù)其臨床發(fā)病特點(diǎn)及分子學(xué)診斷方法，自行制訂本試驗(yàn)病例診斷標(biāo)準(zhǔn)為具有ILT典型臨床癥狀(張口呼吸，呼吸羅音，甩鼻，鼻部有分泌物，眼瞼腫脹)和特征性剖檢病變(喉頭和氣管粘膜腫脹、出血、有分泌物)，且喉拭子PCR檢測(cè)ILTV為陽(yáng)性的病例，診斷為ILT病例[1-3]。

1.2.2 受試雞群的確定

2020年12月，山東省濰坊某蛋雞場(chǎng)的2000余只同批次海藍(lán)褐蛋雞，在60日齡左右陸續(xù)發(fā)病。臨床表現(xiàn)為整體采食和飲水減少，病雞精神萎靡，羽毛松亂，雞冠發(fā)紺。分泌物堵塞鼻孔，流鼻液，甩鼻，眼瞼腫脹結(jié)膜充血，睜眼困難，眼角堆積分泌物，有的有泡沫。呼吸有濕性羅音，伸頸張口呼吸，氣喘伴咳嗽。死亡率達(dá)到13%。剖檢病死雞，病變主要在喉頭和氣管，有白喉樣病變，黏液團(tuán)覆蓋整個(gè)氣管，有的氣管內(nèi)形成血塊，并混合粘膜及壞死組織；肺臟有瘀血、出血。雞舍內(nèi)多點(diǎn)采集病雞喉拭子，經(jīng)PCR檢測(cè)ILTV均為陽(yáng)性。病雞氣管病變見(jiàn)圖1，PCR檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。

根據(jù)本試驗(yàn)病例診斷標(biāo)準(zhǔn)，判定該雞場(chǎng)所感染疾病為雞傳染性喉氣管炎，患雞數(shù)量較多，故將其選為受試雞群。根據(jù)本試驗(yàn)病例納入標(biāo)準(zhǔn)，在確診雞群中選擇出600只患雞進(jìn)行銀黃二陳合劑的擴(kuò)大臨床試驗(yàn)，確保所選患雞的品種、飼養(yǎng)管理、試驗(yàn)前使用的飼料疫苗獸藥完全相同，發(fā)病情況相似。

圖1 試驗(yàn)雞場(chǎng)ILV病雞氣管內(nèi)壁出血

注：泳道M為Marker；泳道1～5為發(fā)病雞喉拭子擴(kuò)增產(chǎn)物(643bp)。

1.2.3 動(dòng)物分組與處理

試驗(yàn)用雞在另一經(jīng)過(guò)消毒處理的雞舍中由專(zhuān)人隔離飼養(yǎng)。隨機(jī)分為2個(gè)組，銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組，每組300只。根據(jù)實(shí)驗(yàn)性臨床試驗(yàn)結(jié)果，銀黃二陳合劑組按2.0mL·L-1劑量在飲水中添加銀黃二陳合劑，全天自由飲用，桑仁清肺口服液組按1.5mL·L-1劑量在飲水中添加桑仁清肺口服液，試驗(yàn)開(kāi)始后2組不再使用任何其他藥物。2組雞同時(shí)投藥，連續(xù)用藥5d，用藥結(jié)束后觀(guān)察5d。試驗(yàn)期間分別記錄2組的病程發(fā)展及死亡情況，試驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)2組的治療有效率、治愈率和死亡率。

1.2.4 療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.2.4.1 死亡率

試驗(yàn)期間出現(xiàn)ILT典型臨床癥狀并死亡，且剖檢具有典型的ILT病變特征，判定為感染傳染性喉氣管炎死亡雞。死亡率計(jì)算公式：

死亡率=死亡雞數(shù)/試驗(yàn)雞數(shù)

1.2.4.2 有效率

觀(guān)察期結(jié)束后，精神、采食、飲水及糞便情況明顯好轉(zhuǎn)，臨床癥狀明顯減輕者判為有效；有效雞數(shù)占每組試驗(yàn)雞數(shù)的百分率為有效率。

1.2.4.3 治愈率

觀(guān)察期結(jié)束后，其精神狀態(tài)、食欲、呼吸等恢復(fù)正常，臨床癥狀完全消失者均屬治愈。治愈率計(jì)算公式：

治愈率=癥狀消失雞數(shù)/發(fā)病雞數(shù)

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果分析

2.1 銀黃二陳合劑對(duì)自然感染ILT病雞臨床癥狀的影響

用藥3d后，2組試驗(yàn)雞群精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，打蔫、精神沉郁的雞只明顯減少，攝食和飲水逐漸恢復(fù)。用藥5d后，銀黃二陳合劑組的大部分雞鼻部分泌物消失，呼吸姿勢(shì)正常，極少發(fā)出呼吸啰音，桑仁清肺口服液組鼻部分泌物癥狀略重。

2.2 銀黃二陳合劑對(duì)自然感染ILT死亡情況的影響

經(jīng)用藥治療后兩組的死亡情況均有所減輕。第5天銀黃二陳合劑組停止死亡，桑仁清肺口服液組直至試驗(yàn)結(jié)束前仍有個(gè)別死亡。至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組的死亡率分別為5.7%和6.7%，2組間比較差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)期間2組的死亡情況見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)期間各組雞死亡情況(n=300)

2.3 銀黃二陳合劑對(duì)自然感染ILT的治療效果

銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組的治療有效率(即存活率)接近，治愈率分別為80.3%和73.7%，2組間比較差異不顯著(P>0.05)。2組的治療效果見(jiàn)表2。

表2 銀黃二陳合劑對(duì)自然感染ILT的治療效果(n=300)

3 討論

溫?zé)犷?lèi)溫病是中醫(yī)臨床常見(jiàn)的一類(lèi)疾病，屬外感熱病范疇。相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中各種急性傳染病、感染性疾病及許多發(fā)熱性疾病。邪擾、陰傷、氣耗、血瘀是溫病的4個(gè)基本病理變化，且貫穿于病程始終，而在瘟熱類(lèi)溫病中外邪侵?jǐn)_往往占有主導(dǎo)的地位[8]。雞傳染性喉氣管炎可引起病雞氣管分泌物增多、氣喘咳嗽、呼吸困難、呼吸道充血淤血，從中獸醫(yī)辨證論治學(xué)說(shuō)而言，雞傳染性喉氣管炎是由瘟疫之毒犯肺引起的一種肺熱痰火之癥。疫毒犯肺，肺失宣降，導(dǎo)致水道失調(diào)，水濕內(nèi)阻，治療應(yīng)以祛除熱邪，清肺利咽，化痰止咳平喘為原則。

銀黃二陳合劑組方來(lái)源于治療濕痰咳嗽的經(jīng)典方劑“二陳湯”(宋代《太平惠民和劑局方》)，經(jīng)加味改良而得，由黃芩、金銀花、姜半夏、陳皮、茯苓和甘草6味組成?！岸悳庇砂胂摹㈤偌t、茯苓、甘草4味藥組成，針對(duì)雞傳染性喉氣管炎肺熱痰火主癥，篩選添加黃芩、金銀花經(jīng)典藥對(duì)，其中，黃芩清肺熱燥痰濕，瀉火解毒[9-11]，金銀花清熱宣肺，解毒瀉火[12-15]，共為君藥，方中陳皮、半夏也是臨床經(jīng)典藥對(duì)，半夏、陳皮皆以陳久者良，而無(wú)過(guò)燥之弊，故方名“二陳”。半夏辛溫燥烈，擅長(zhǎng)燥濕化痰，降逆止嘔；陳皮辛苦而溫，長(zhǎng)于理氣健脾，燥濕化痰。二者合用，半夏得陳皮之助，則氣順而痰自消，化痰濕之力尤勝，陳皮得半夏之輔，則痰除而氣自下，理氣和胃之功更著。二者相使相助，共奏燥濕化痰、健脾和胃、理氣止嘔之功，共為臣藥，佐以茯苓健脾滲濕，滲濕以助化痰之力，健脾以杜生痰之源。甘草藥之國(guó)老，清熱解毒，潤(rùn)肺止咳，調(diào)和諸藥性，以為佐使。諸藥相合，共奏清熱解毒、燥濕化痰，理氣和中之效。

綜上所述，本產(chǎn)品由多味藥物提取、濃縮而成，所用中藥來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉。該藥既有清熱解毒、燥濕化痰、理氣和中的作用，又可降低病雞病毒載量，從而達(dá)到標(biāo)本兼治的效果，故可用于雞傳染性喉氣管炎病毒等引起的溫?zé)峥人宰C候。

本試驗(yàn)開(kāi)始后停用了除試驗(yàn)設(shè)計(jì)用藥外的所有其他藥物，隨用藥時(shí)間延長(zhǎng)，2組雞群癥狀明顯減輕，死亡率均呈下降趨勢(shì)。銀黃二陳合劑組在連續(xù)用藥4d后死亡情況得到控制，而桑仁清肺口服液組直至試驗(yàn)結(jié)束前仍有個(gè)別死亡。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組的有效率分別為94.3%和93.0%，治愈率分別為80.3%和73.7%，證實(shí)銀黃二陳合劑可以有效治療雞傳染性喉氣管炎。

4 結(jié)論

該治療試驗(yàn)表明，服用推薦劑量的銀黃二陳合劑對(duì)自然感染的雞傳染性喉氣管炎有明顯的治療作用。推薦用法用量：2.0mL·L-1混飲，連用5d。