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馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)無麩質(zhì)面團(tuán)流變特性和微觀結(jié)構(gòu)的影響

2023-03-22 11:35朱香杰魏瑩瑩趙雙麗彭方琳劉興麗
食品與發(fā)酵工業(yè) 2023年5期
關(guān)鍵詞:麩質(zhì)比容面團(tuán)

朱香杰,魏瑩瑩,趙雙麗,彭方琳,劉興麗,*

1(三全食品股份有限公司, 河南 鄭州,450000)2(鄭州輕工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院,河南 鄭州,450002)

麩質(zhì),即面筋蛋白,是小麥、黑麥、大麥、燕麥及其雜交種和衍生種中含有的一類蛋白質(zhì)片段[1]。國際食品法典委員會(huì)(Codex Alimentarius Commission,CAC) 規(guī)定,不含麩質(zhì)的原料生產(chǎn)的食品,或者是原料中含有麩質(zhì),但經(jīng)加工處理已去除麩質(zhì)或麩質(zhì)含量低于20 mg/kg,滿足這一規(guī)定即為無麩質(zhì)食品[2]。無麩質(zhì)食品可以滿足麩質(zhì)過敏人群以及乳糜瀉患者的飲食需求。乳糜瀉(celiacdisease,CD)是最常見的麩質(zhì)敏感性腸病,主要癥狀有腹瀉、貧血、骨質(zhì)疏松等[3]。乳糜瀉為自身免疫性疾病,即攜帶遺傳易感基因個(gè)體因攝入含麩質(zhì)食品誘發(fā)的多種腸胃及腸外疾病[4]。調(diào)查發(fā)現(xiàn),歐美國家乳糜瀉發(fā)病率約為1%[5],個(gè)別地區(qū)高達(dá)2%,且患者人數(shù)仍在不斷增長。目前,控制含麩質(zhì)食品的攝入是治療乳糜瀉的唯一方式。

當(dāng)前國外市場上已有較成熟的無麩質(zhì)食品,而我國對(duì)無麩質(zhì)食品研究仍處于起步階段。無麩質(zhì)食品的原料主要有大米、玉米、高粱、蕎麥、小米、馬鈴薯和藜麥[6]。由于大米的蛋白質(zhì)含量適中,具有低過敏性,是制作無麩質(zhì)食品的合適谷物之一[7]。由于原料不含麩質(zhì),即面筋蛋白,使得無麩質(zhì)食品不易成型且結(jié)構(gòu)疏松,目前的研究主要采用多種原料復(fù)合或添加品質(zhì)改良劑模擬面筋蛋白的性質(zhì),以提高產(chǎn)品品質(zhì)。

馬鈴薯蛋白是由19種氨基酸組成的完全蛋白質(zhì),其營養(yǎng)價(jià)值可與雞蛋蛋白相當(dāng)[8], 而馬鈴薯蛋白微凝膠是一種具有三維交聯(lián)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的膠體顆粒,被認(rèn)為是安全和非過敏性的,可用于無麩質(zhì)飲食,但是目前關(guān)于馬鈴薯蛋白及其微凝膠在無麩質(zhì)面團(tuán)方面的研究較少。因此,本研究以低過敏性的大米粉為原料,添加馬鈴薯蛋白(potato protein,PP)、馬鈴薯蛋白微凝膠(potato protein microgel,PPM)、馬鈴薯蛋白/黃原膠復(fù)合物(potato protein/xanthan gum,PPXG)和馬鈴薯蛋白/黃原膠復(fù)合微凝膠(potato protein/xanthan gum microgel,PPXGM),研究其對(duì)無麩質(zhì)大米面團(tuán)流變特性和微觀結(jié)構(gòu)等的影響,并進(jìn)一步探索其對(duì)無麩質(zhì)大米饅頭品質(zhì)的影響機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

馬鈴薯蛋白(蛋白質(zhì)量濃度900.1 g/L),蘭州沃特萊斯生物科技有限公司;黃原膠,廣州市威希生物有限公司;金龍魚優(yōu)質(zhì)大米(碳水化合物75%,蛋白質(zhì)5%,脂肪1.4%);金龍魚吉林分公司;鹽酸,洛陽昊華化學(xué)試劑有限公司;NaOH、Na2HPO4和NaH2PO4,天津市大茂化學(xué)試劑廠。

AL 204 電子分析天平,上海梅特勒-托利多儀器有限公司;HA-3480AS 和面機(jī),克萊美斯機(jī)電科技(深圳)有限公司;DZM-140 電動(dòng)壓面機(jī),永康市海鷗電器有限公司;HR-1 Discocvery流變儀、TA.XT plus 物性測定儀,美國TA公司;Vertex 70 傅里葉變換紅外光譜儀,美國賽默飛公司;JEM-6490LV 場發(fā)射掃描電子顯微鏡,日本JEOL公司;BVM 6600 體積測定儀,波通瑞華科技儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 馬鈴薯蛋白微凝膠的制備

根據(jù)劉振艷[9]的方法略有改動(dòng)。稱取一定量馬鈴薯蛋白粉于去離子水中,使蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為40 g/L,室溫?cái)嚢? h后,放置在4 ℃冰箱中過夜。用0.1 mol/L的NaOH溶液或者HCl溶液調(diào)節(jié)其pH值為6.0,90 ℃水浴加熱30 min,立即放入冰水中冷卻至室溫。將冷卻后的溶液4 000 r/min離心30 min 除去不溶性沉淀得微凝膠溶液,之后將微凝膠溶液凍干保存。

1.2.2 馬鈴薯蛋白-多糖微凝膠的制備

根據(jù)夏曉鳳[10]的方法略有改動(dòng)。稱取一定量馬鈴薯蛋白粉及黃原膠溶于去離子水中,使蛋白質(zhì)量濃度為10 g/L,多糖濃度分別為0.5~10 g/L,攪拌3 h后,放置于4 ℃冰箱中過夜。

攪拌條件下將黃原膠溶液和馬鈴薯蛋白溶液按照體積比10∶1混合,攪拌4 h后,用0.1 mol/L的NaOH或者HCl溶液調(diào)節(jié)pH值至2.0~4.0,攪拌4 h,90 ℃水浴加熱30 min,冷卻至室溫,得到馬鈴薯蛋白/黃原膠微凝膠。

1.2.3 馬鈴薯蛋白-黃原膠復(fù)合物的制備

2)針對(duì)安全隱患及時(shí)跟蹤復(fù)查,確定完成整改。檢查結(jié)束后,應(yīng)立即匯總安全問題,下發(fā)安全隱患整改通知書,確定整改限期及時(shí)跟進(jìn)整改進(jìn)度,再次組織復(fù)查,對(duì)未按期整改者給予處罰,確保整改保質(zhì)保量完成。

根據(jù)夏曉鳳[10]的方法略有改動(dòng)。稱取一定質(zhì)量的馬鈴薯蛋白粉(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.00%)和黃原膠,分別用去離子水進(jìn)行溶解,持續(xù)攪拌3 h,將制備好的溶液放入4 ℃冰箱中過夜;將黃原膠溶液加入到溶液中,持續(xù)攪拌4 h,使用濃度為0.1 mol/L的HCl溶液將上述溶液pH 值分別調(diào)節(jié)至2.0 ~4.0,得到PP-XG復(fù)合溶液,凍干保存,備用。

1.2.4 面團(tuán)的制備

在大米粉中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%、5.0%的PP、PPM、PPXG、PPXGM,添加85%的水,以大米面團(tuán)作為對(duì)照樣品。

1.2.5 面團(tuán)流變特性的測定

采用20 mm的鋁平板,間隙為1.0 mm,溫度為25 ℃,設(shè)置頻率為1 Hz,首先通過振幅掃描確定線性黏彈區(qū)。實(shí)驗(yàn)過程中待上夾具降低到1.05 mm處切邊,為防止水分蒸發(fā)涂抹一層薄薄的甲基硅油。然后將夾具降低到1.0 mm進(jìn)行測試[11]。

溫度掃描測定:掃描范圍25~90 ℃,升溫速率5 ℃/min,應(yīng)變?yōu)?.5%,頻率為1 Hz。

1.2.6 傅里葉紅外光譜(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)的測定

將上述制備的大米面團(tuán)進(jìn)行真空冷凍干燥,粉碎后過100目篩。將樣品與光譜純溴化鉀按質(zhì)量比(1∶50)混合,均勻研磨,使用配套壓片機(jī)制片。用紅外光譜儀在400~4 000 cm-1掃描。用Peak Fit 4.12對(duì)酰胺Ⅰ帶(1 600~1 700 cm-1)進(jìn)行圖譜分析,先進(jìn)行基線校正,之后二階導(dǎo)數(shù)擬合,直至擬合殘差最小。

1.2.7 微觀形貌的測定

大米面團(tuán)的微觀結(jié)構(gòu)變化采用場發(fā)射掃描電子顯微鏡(field emission scanning electron microscope,F(xiàn)ESEM)觀察,樣品噴金處理,加速電壓為20 kV,放大倍數(shù)為2 000倍。

1.2.8 饅頭的制備

稱取100 g大米粉,添加不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(2.5%和5.0%)的馬鈴薯蛋白微凝膠,1%的酵母,根據(jù)Mixolab混合實(shí)驗(yàn)儀最佳實(shí)驗(yàn)條件下所推薦加水量添加合適的水,混勻后在37 ℃,濕度85%恒溫恒濕箱中發(fā)酵1 h,手工揉制成型,相同條件下醒發(fā)10 min,在沸水鍋中蒸30 min后取出,室溫冷卻1 h備用[13]。

1.2.9 饅頭比容的測定

將冷卻后的饅頭稱重,之后在體積測定儀上測試,饅頭體積與質(zhì)量的比值即比體積,饅頭的比容測試參照GB 21118—2007《小麥粉饅頭》。

(1)

式中:λ,饅頭比容,mL/g;V,饅頭體積,mL;m,饅頭質(zhì)量,g。

1.2.10 饅頭質(zhì)構(gòu)的測定

將冷卻后的饅頭,切成2 cm×2 cm×0.5 cm的塊狀。使用TPA質(zhì)構(gòu)模式測試。探頭為P/36R,測前速度1.0 mm/s,測試速度1.0 mm/s,測后速度1.0 mm/s,觸發(fā)力5.0 g,壓縮比50%,2次壓縮間隔3 s[14]。

1.2.11 統(tǒng)計(jì)分析

用Microsoft Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,用Origin 8.5繪圖。利用 SPSS 17.0 軟件進(jìn)行顯著性分析,采用Duncan’s多重比較法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)(P<0.05),實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次取平均值,數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米面團(tuán)流變特性的影響

在和面攪拌、發(fā)酵和蒸煮過程中,面團(tuán)中的淀粉會(huì)發(fā)生糊化,蛋白質(zhì)發(fā)生變性,面團(tuán)流變學(xué)特性也因此改變[15]。添加 PP 和 PPM 的大米面團(tuán)的彈性模量(G′)、黏性模量(G″)和tanδ隨頻率變化曲線如圖1所示。溫度在25~50 ℃,彈性模量(G′)和黏性模量(G″)略微下降。在50~75 ℃,大米面團(tuán)內(nèi)的淀粉吸水膨脹發(fā)生糊化,G′和G″迅速增加達(dá)到峰值。75 ℃時(shí),與對(duì)照相比,添加PP和PPM降低了面團(tuán)的G′,尤其是添加量為5.0%時(shí),G′顯著降低。這與楊翠紅[16]發(fā)現(xiàn)在加熱過程中乳清分離蛋白可抑制玉米淀粉的膨脹糊化的研究結(jié)果一致。這可能是因?yàn)樯郎剡^程中二者的相互作用增強(qiáng),蛋白質(zhì)對(duì)淀粉的束縛作用抑制淀粉顆粒進(jìn)一步糊化。另一方面可能由于蛋白質(zhì)的存在稀釋了淀粉的相對(duì)濃度,從而延緩了顆粒的糊化膨脹過程。但是,添加PPXG和PPXGM面團(tuán)的G′和G″高于添加PP和PPM的面團(tuán),溫度升高引起蛋白質(zhì)的弱化和分子動(dòng)能增加,面團(tuán)變軟,而體系中的黃原膠可能在一定程度上降低了這種弱化作用[17]。

損耗角正切tanδ是G″與G′的比值,值越高代表樣品的黏度越大,可反應(yīng)加熱過程中面團(tuán)結(jié)構(gòu)的變化。在整個(gè)升溫過程中,所有樣品的tanδ值均<1,說明大米面團(tuán)的彈性特征高于黏性特征。當(dāng)測試溫度為25~50 ℃時(shí),tanδ略微增加,隨著溫度升高,面團(tuán)的流動(dòng)性增強(qiáng),蛋白質(zhì)分子鏈的熱運(yùn)動(dòng)因溫度升高而增加,但在該溫度范圍內(nèi)其結(jié)構(gòu)并未發(fā)生改變。在50~75 ℃,tanδ迅速增加,說明面團(tuán)微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。一方面大米淀粉吸水膨脹導(dǎo)致面團(tuán)強(qiáng)度下降;另一方面溫度升高可能會(huì)導(dǎo)致馬鈴薯蛋白微凝膠的結(jié)構(gòu)弱化。溫度在75~100 ℃,大米淀粉完全糊化,tanδ迅速下降,說明出現(xiàn)了高度結(jié)構(gòu)化的網(wǎng)絡(luò)。溫度>80 ℃,所有面團(tuán)的tanδ依然降低,說明其微觀結(jié)構(gòu)持續(xù)變化,這可能是由高溫下蛋白質(zhì)形成的某種鍵引起[18]。

a-添加量2.5%的G′;b-添加量5.0%的G′;c-添加量2.5%的G″;d-添加量5.0% G″; e-添加量2.5%的tanδ;f-添加量5.0%的tanδ圖1 大米面團(tuán)的溫度掃描曲線Fig.1 Scanning curve of rice dough temperature

2.2 馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米面團(tuán)中蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響

紅外光譜技術(shù)是一種非破壞性的可用于研究異質(zhì)食品和生物體系分子結(jié)構(gòu)的光譜技術(shù)。這種方法已經(jīng)被用來分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、面團(tuán)流變特性和小麥面包工藝性能之間的關(guān)系[19]。與對(duì)照相比,添加PP、PPM、PPXG和PPXGM后,α-螺旋和無規(guī)則卷曲含量降低,β-折疊含量增加,β-轉(zhuǎn)角含量略微降低(表1),就所有樣品而言,2.5%的添加量使得α-螺旋含量降低程度較小,5.0%的添加量使得β-折疊含量增加較多。一般來講,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的有序性與α-螺旋含量呈正相關(guān),蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和β-折疊含量呈正相關(guān),且β-轉(zhuǎn)角與面團(tuán)的柔韌性有關(guān)。添加PP、PPM、PPXG和PPXGM后,無麩質(zhì)大米面團(tuán)中蛋白的有序性降低,但穩(wěn)定性增加,結(jié)構(gòu)變得更加穩(wěn)定,推測是淀粉顆粒與蛋白或蛋白質(zhì)微凝膠通過非共價(jià)相互作用所致,尤其是氫鍵,從而改善了面團(tuán)的混合性能[19]。此外,添加5.0%的PPM和PPXGM后,面團(tuán)中β-折疊含量最高,說明此時(shí)面團(tuán)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性最高。

表1 大米面團(tuán)中蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)變化Table 1 Secondary structure changes of protein in rice dough

2.3 馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米面團(tuán)微觀結(jié)構(gòu)的影響

圖2為大米面團(tuán)的掃描電鏡圖。對(duì)照組大米面團(tuán)的結(jié)構(gòu)中淀粉顆粒彼此分離,呈現(xiàn)疏松狀,可觀察到各自淀粉顆粒的多邊形形狀。添加PP、PPM、PPXG和PPXGM后,淀粉顆粒被包裹在弱的蛋白質(zhì)凝膠基質(zhì)中,不同程度改善了面團(tuán)的微觀結(jié)構(gòu),且添加量的增加對(duì)微觀結(jié)構(gòu)有積極的影響。添加PPXG和PPXGM后,淀粉顆粒幾乎完全被一層蛋白質(zhì)微凝膠膜所覆蓋,尤其是添加5.0% PPXGM,推測是淀粉顆粒與馬鈴薯蛋白微凝膠通過非共價(jià)作用形成了更加緊密的結(jié)構(gòu),主要是氫鍵作用的影響,有助于面團(tuán)的形成[20]。這與SARABHAI等[21]的研究結(jié)果類似,無麩質(zhì)餅干的面團(tuán)中淀粉顆粒被蛋白膜覆蓋,結(jié)構(gòu)變得更加緊密。這有助于面團(tuán)網(wǎng)絡(luò)的形成。

a-對(duì)照;b-2.5%馬鈴薯蛋白;c-5.0%馬鈴薯蛋白;d-2.5%馬鈴薯蛋白微凝膠;e-5.0%馬鈴薯蛋白微凝膠;f-2.5%馬鈴薯/黃原膠復(fù)合物; g-5.0%馬鈴薯/黃原膠復(fù)合物;h-2.5%馬鈴薯/黃原膠復(fù)合微凝膠;i-5.0%馬鈴薯/黃原膠復(fù)合微凝膠圖2 添加馬鈴薯蛋白微凝膠后無麩質(zhì)大米面團(tuán)的微觀結(jié)構(gòu)Fig.2 Microstructure of gluten-free rice dough after adding potato protein microgels

2.4 馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米饅頭比容的影響

比容是衡量饅頭品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。比容較大的饅頭芯硬度較小,質(zhì)地較為柔軟,消費(fèi)者接受度較好。馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米饅頭比容的影響如圖3所示。PPXG和PPXGM的添加使無麩質(zhì)大米饅頭的比容顯著增加,馬鈴薯蛋白與黃原膠復(fù)合后對(duì)比容的影響優(yōu)于單獨(dú)的馬鈴薯蛋白。單獨(dú)大米饅頭的比容為1.14 mL/g,添加5.0%的PP、PPM、PPXG和PPXGM后,饅頭的比容依次為1.18、1.21、1.48、1.44 mL/g。WITCZAK等[14]發(fā)現(xiàn),2%的馬鈴薯蛋白添加量會(huì)增加無麩質(zhì)面包的體積,但6%~10%添加量會(huì)導(dǎo)致體積降低。馬鈴薯蛋白微凝膠的2種添加量均未造成饅頭比容的明顯降低,盡管添加5.0%的PPXGM后,比容略微下降,但不顯著(P>0.05)。大米饅頭比容的增加說明馬鈴薯蛋白微凝膠充當(dāng)了面筋蛋白的角色,與大米淀粉通過非共價(jià)相互作用穩(wěn)定面團(tuán)內(nèi)的氣泡結(jié)構(gòu),改善了大米面團(tuán)在發(fā)酵過程中的持氣性。此外,PPXG和PPXGM與大米淀粉相互黏結(jié),減少其流動(dòng)性,從而有效保持發(fā)酵過程中產(chǎn)生的氣體,從而增加比容[22]。在添加量為2.5%時(shí),PPXGM的效果高于PPXG,且在添加5.0%的PPXGM后,微凝膠顆粒網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)使得比容比對(duì)照組提高了26.3%,效果顯著。

圖3 添加馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米饅頭比容的影響Fig.3 Effect of adding potato protein microgels on the specific volume of rice steamed buns

2.5 馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米饅頭質(zhì)構(gòu)特性的影響

質(zhì)構(gòu)可用于評(píng)價(jià)產(chǎn)品的品質(zhì),判斷其可接受性。添加不同比例的馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米饅頭的質(zhì)構(gòu)影響如表2所示。硬度、咀嚼性和膠著性與產(chǎn)品的品質(zhì)呈負(fù)相關(guān),值越大口感越差。硬度大,咀嚼困難,膠著性強(qiáng),口感粘牙。彈性和回復(fù)性與產(chǎn)品品質(zhì)呈正相關(guān),值越大口感越好。與對(duì)照相比,添加PP、PPM、PPXG和PPXGM后,饅頭的硬度、膠著性和咀嚼性降低,彈性升高,添加PP和PPM可增加饅頭的回復(fù)性,添加PPXG和PPXGM卻降低了回復(fù)性。對(duì)于同一個(gè)樣品,添加量越大,效果越明顯,且所有樣品的硬度、咀嚼性、膠著性和彈性變化趨勢(shì)相同。以硬度的變化為例,添加2.5%和5.0%的PP,硬度分別下降8.36%和11.48%;添加PPM后,硬度分別降低18.60%和25.95%;添加PPXG后,硬度分別降低25.94%和43.34%;添加PPXGM后,硬度分別下降39.14%和52.17%。饅頭品質(zhì)依次為PPXGM>PPXG>PPM>PP>對(duì)照。于亞洲[23]發(fā)現(xiàn)乳清蛋白和乳清蛋白冷凝膠均可降低大米面包的硬度,增加面包的彈性和回復(fù)性,與本研究結(jié)果類似。TOMIC等[24]發(fā)現(xiàn)添加蛋白質(zhì)后無麩質(zhì)小米面包的硬度會(huì)降低,可能與面包較高的比容和較大的氣室數(shù)量有關(guān)。這說明面包的比容與硬度呈負(fù)相關(guān)。添加PPXGM后饅頭硬度的降低是由于其較強(qiáng)的持水能力可阻止水從饅頭內(nèi)部向外部的運(yùn)輸,從而降低了饅頭的硬度[25]。添加PP、PPM、PPXG和PPXGM 后,膠著性降低,彈性增加,饅頭表現(xiàn)出柔軟、爽口的品質(zhì)??傊?,馬鈴薯蛋白微凝膠的添加對(duì)大米饅頭的品質(zhì)均具有一定程度的改善作用。這可能是因?yàn)轳R鈴薯蛋白微凝膠具有較好的乳化性,可與面團(tuán)里的脂質(zhì)結(jié)合,增強(qiáng)面團(tuán)的韌性和持氣性,使饅頭的比容增加,質(zhì)構(gòu)特性得以改善。

表2 馬鈴薯蛋白微凝膠對(duì)大米饅頭質(zhì)構(gòu)特性的影響Table 2 Effects of potato protein microgels on the texture of rice steamed buns

3 結(jié)論

在大米面團(tuán)中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5% 和5.0%的PP、PPM、PPXG和PPXGM,可對(duì)面團(tuán)的流變特性和微觀結(jié)構(gòu)產(chǎn)生不同的影響。添加PPXG和PPXGM可增加無麩質(zhì)大米面團(tuán)的G′和G″,降低面團(tuán)的tanδ,提高了面團(tuán)加工性能。添加PP、PPM、PPXG和PPXGM后,α-螺旋和無規(guī)則卷曲含量降低,β-折疊含量增加,尤其是5.0%的PPM和PPXGM使無麩質(zhì)大米面團(tuán)的結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定。PPXG和PPXGM相對(duì)于PP和PPM更能提高面團(tuán)的持氣性,增加饅頭的比容。添加馬鈴薯蛋白微凝膠后饅頭的硬度、膠著性和咀嚼性降低,彈性升高,添加PPXGM的饅頭品質(zhì)相比PP、PPXG、PPXGM更好。大米饅頭既符合中國人的飲食習(xí)慣,又能滿足麩質(zhì)不耐受患者的需求。

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