何艷青， 招志輝， 張俊紅， 黃淡霞， 雷明

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510405；2.深圳市第二人民醫(yī)院中醫(yī)科，廣東深圳 518037）

黃芪， 為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，是臨床上最常使用的中藥材之一，其化學(xué)有效成分非常豐富，應(yīng)用十分廣泛[1]。大量研究[2-4]提示，黃芪可有效提高機(jī)體免疫能力、改善機(jī)體代謝及心腦血管功能，其藥用價(jià)值越來(lái)越受到臨床重視。目前市場(chǎng)上最多使用的黃芪品種為蒙古黃芪，根據(jù)其不同種植方式主要分為仿野生黃芪（山西產(chǎn)）和人工培育黃芪（甘肅產(chǎn)），其中，山西產(chǎn)的仿野生黃芪被認(rèn)為是目前臨床應(yīng)用中最為優(yōu)質(zhì)且道地的品種。但受市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)、環(huán)境等多重因素影響，仿野生黃芪產(chǎn)量明顯減少。目前針對(duì)黃芪藥材的等級(jí)分類尚未形成統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，且價(jià)格大相徑庭，故針對(duì)不同來(lái)源黃芪的臨床應(yīng)用價(jià)值，評(píng)估其抗疲勞效應(yīng)十分必要?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源所有納入仿野生組材料均為來(lái)源于山西渾源產(chǎn)仿野生黃芪藥材，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)劉平安教授鑒定且確定為蒙古黃芪；人工培育組材料均來(lái)源于甘肅隴西，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)劉平安教授鑒定且確定為人工培育黃芪。本研究方案已通過(guò)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（批號(hào)：20210512YN），且入組者均簽署入組同意書。

1.2 試劑與儀器200 ～300 目及80 ～120 目柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；柱色譜ODS（日本YMC 公司）；色譜甲醇（瑞典OCEANPAK 公司）。Avance Ⅲ600 MHz 核磁共振（NMR）儀（德國(guó)Bruker公司）；Thermo Q-Exactive-Orbitrap-MS 液質(zhì)色譜儀（美國(guó)Thermo 公司）；C-610 中壓液相色譜儀（瑞士Buchi公司）；Essentia LC-16P 制備型HPLC 色譜儀（日本SHIMADZU 公司）；離子色譜儀檢測(cè)（瑞士萬(wàn)通中國(guó)有限公司提供）；LDX-FYS-I型電子反應(yīng)時(shí)測(cè)試儀（山東濟(jì)寧利達(dá)信儀器儀表設(shè)備有限公司）。

1.3 浸出物含量測(cè)定方法針對(duì)黃芪浸出物水平的測(cè)定以2020 年版《中國(guó)藥典》為依據(jù)，根據(jù)水溶性浸出物測(cè)定法嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)定。將2 組樣本在25 ℃條件下，于Bruker 600 MHz AvanceⅢNMR 儀實(shí)施，分析不同來(lái)源黃芪浸出物中氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平。

1.4 入組觀察健康人群干預(yù)方法所有入組者均具有在無(wú)救生輔助設(shè)備下自行游泳距離超過(guò)500米的游泳技能，共計(jì)80 名入組對(duì)象。仿野生組：男25 例，女15 例；年齡18 ～30 歲，平均（25.1 ±2.6）歲；體質(zhì)量45 ～80 kg，平均（62.5 ± 5.8）kg。人工培育組：男24 例，女16 例；年齡18 ～30 歲，平均（25.0±2.5）歲；體質(zhì)量45 ～80 kg，平均（62.0± 5.5）kg。2 組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。其中，仿野生組規(guī)律服用仿野生黃芪，人工培育組規(guī)律服用甘肅產(chǎn)人工培育黃芪（甘肅產(chǎn)），2 組均每日使用15 g，代茶飲，連服2 周為1 個(gè)療程。干預(yù)期間均自由飲水，日常飲食，并注意避免熬夜、飲酒、其他體育鍛煉，避免感冒。所有入組者均在自由游泳500 m 后上岸休息15 min，同時(shí)，由護(hù)理人員留取肘靜脈血5 mL 送檢測(cè)定血清尿素氮水平。隨后進(jìn)入安靜觀察室，按照經(jīng)統(tǒng)一培訓(xùn)的醫(yī)務(wù)人員指令，于人體反應(yīng)時(shí)測(cè)定儀前，自行按下開始鍵后觀察測(cè)試機(jī)顯示燈顏色變化并觸動(dòng)停止鍵為標(biāo)準(zhǔn)，所得評(píng)分均超過(guò)3分為正常。

1.5 觀察指標(biāo)比較2 組黃芪頭部最大直徑、終端長(zhǎng)度以及絕對(duì)生長(zhǎng)年份情況，統(tǒng)計(jì)2組浸出物含量測(cè)定結(jié)果，比較2組運(yùn)動(dòng)干預(yù)前后機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)變化情況，分析不同氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平與機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)的相關(guān)性。其中：血清尿素氮檢測(cè)采取脲酶-波氏比色法；反應(yīng)時(shí)檢測(cè)即為通過(guò)LDX-FYS-I 型電子反應(yīng)時(shí)測(cè)試儀測(cè)定人體對(duì)聲、光刺激信號(hào)的反應(yīng)時(shí)間，以評(píng)估受試者的反應(yīng)靈敏度、疲勞程度、神經(jīng)系統(tǒng)及運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)障礙或恢復(fù)情況；氨基酸類水平檢測(cè)采用離子色譜儀，總黃酮水平檢測(cè)采用紫外分光光度法，皂苷類水平檢測(cè)采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2 組間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson法進(jìn)行，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組黃芪頭部最大直徑、終端長(zhǎng)度以及絕對(duì)生長(zhǎng)年份比較表1結(jié)果顯示，仿野生組黃芪頭部最大直徑為（2.1 ± 0.3）cm 顯著大于人工培育組的（1.4±0.1）cm（P＜0.05），終端長(zhǎng)度為（60.7±13.7）cm顯著長(zhǎng)于人工培育組的（42.1±11.2）cm（P＜0.05），絕對(duì)生長(zhǎng)年份為（5.2 ± 1.4）年顯著長(zhǎng)于對(duì)照組的（2.1±0.3）年（P＜0.05）。

表1 2組黃芪頭部最大直徑、終端長(zhǎng)度以及絕對(duì)生長(zhǎng)年份比較Table 1 Comparison of maximum head diameter，terminal length and absolute growth year of Astragali Radix between two groups（±s）

表1 2組黃芪頭部最大直徑、終端長(zhǎng)度以及絕對(duì)生長(zhǎng)年份比較Table 1 Comparison of maximum head diameter，terminal length and absolute growth year of Astragali Radix between two groups（±s）

注：①P＜0.05，與人工培育組比較

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2.2 2組浸出物含量測(cè)定結(jié)果比較表2結(jié)果顯示，仿野生組浸出物中氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平均顯著高于人工培育組（P＜0.05）。

表2 2組浸出物含量測(cè)定結(jié)果比較Table 2 Comparison of determination results of extracts between two groups（±s）

表2 2組浸出物含量測(cè)定結(jié)果比較Table 2 Comparison of determination results of extracts between two groups（±s）

注：①P＜0.05，與人工培育組比較

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2.3 2 組運(yùn)動(dòng)干預(yù)前后機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)比較表3 結(jié)果顯示：干預(yù)前，2 組血清尿素氮水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。干預(yù)后仿野生組血清尿素氮水平高于干預(yù)前（P＜0.05），但低于干預(yù)后人工培育組（P＜0.05）。干預(yù)前2 組反應(yīng)時(shí)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），仿野生組干預(yù)前后反應(yīng)時(shí)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且干預(yù)后仿野生組反應(yīng)時(shí)明顯大于干預(yù)后人工培育組（P＜0.05）。

表3 2組運(yùn)動(dòng)干預(yù)前后機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)比較Table 3 Comparison of biochemical and physiological indexes of body fatigue between two groups before and after exercise intervention（±s）

表3 2組運(yùn)動(dòng)干預(yù)前后機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)比較Table 3 Comparison of biochemical and physiological indexes of body fatigue between two groups before and after exercise intervention（±s）

注：①P＜0.05，與同組干預(yù)前比較；②P＜0.05，與人工培育組干預(yù)后比較

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2.4 不同氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平與機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)的相關(guān)性分析表4結(jié)果顯示，氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平與機(jī)體疲勞的生化指標(biāo)血清尿素氮水平和生理指標(biāo)反應(yīng)時(shí)均呈正相關(guān)性（P＜0.05）。

表4 不同氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平與機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)的相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis between different levels of amino acids，total flavonoids and saponins and biochemical and physiological indexes of fatigue

3 討論

黃芪，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，其味甘性微溫，歸肺脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、生津養(yǎng)血、固表止汗、利水消腫、托毒排膿等功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究[5-7]表明，黃芪具有調(diào)節(jié)血壓、血糖，提高機(jī)體抗氧化能力，消炎利尿，提高機(jī)體免疫能力以及抗菌，抗腫瘤等作用。近年來(lái)，黃芪藥理效應(yīng)中的免疫調(diào)節(jié)、提高機(jī)體免疫力、增強(qiáng)機(jī)體抗疲勞能力等作用優(yōu)勢(shì)日益突顯[8]，但其體現(xiàn)的抗疲勞價(jià)值評(píng)價(jià)尚不完全清楚。目前，針對(duì)黃芪質(zhì)量檢測(cè)的主要項(xiàng)目包括鑒別含量測(cè)定、特征圖譜繪制等[9]。在此方法基礎(chǔ)上，本研究分析不同來(lái)源黃芪主要化學(xué)成分（尤以氨基酸類、總黃酮及皂苷類為主）含量差異及其抗疲勞價(jià)值。

本研究針對(duì)不同來(lái)源黃芪——仿野生黃芪、人工培育黃芪進(jìn)行研究，比較2組黃芪頭部最大直徑、終端長(zhǎng)度以及絕對(duì)生長(zhǎng)年份發(fā)現(xiàn)，仿野生組黃芪頭部最大直徑顯著大于人工培育組，終端長(zhǎng)度顯著長(zhǎng)于人工培育組，絕對(duì)生長(zhǎng)年份顯著長(zhǎng)于對(duì)照組。說(shuō)明仿野生黃芪外觀大小與長(zhǎng)度均大于人工培育黃芪，且其成熟藥用年份亦需要更長(zhǎng)時(shí)間。另外，比較2組浸出物含量測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，仿野生組浸出物中氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平均顯著高于人工培育組，提示仿野生黃芪中氨基酸類、總黃酮及皂苷類等有效成分含量顯著高于人工培育組。同時(shí)，比較2組運(yùn)動(dòng)干預(yù)前后機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，干預(yù)后仿野生組血清尿素氮水平高于干預(yù)前，但低于干預(yù)后人工培育組，且干預(yù)后仿野生組反應(yīng)時(shí)明顯大于干預(yù)后人工培育組，說(shuō)明規(guī)律服用仿野生黃芪后，其提高機(jī)體抗疲勞能力效果優(yōu)于人工培育黃芪。最后分析不同氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平與機(jī)體疲勞的生化與生理指標(biāo)的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平與機(jī)體疲勞的生化指標(biāo)血清尿素氮水平和生理指標(biāo)反應(yīng)時(shí)均呈正相關(guān)性，均說(shuō)明無(wú)論何種來(lái)源的黃芪，其浸出物含量測(cè)定中氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平越高，改善人體抗疲勞的能力越強(qiáng)。

不同來(lái)源黃芪可根據(jù)其生長(zhǎng)年限、根莖長(zhǎng)度與直徑、外觀性狀等準(zhǔn)確鑒別，本研究的鑒別均交由具有國(guó)家級(jí)中藥傳承醫(yī)師稱號(hào)的專家進(jìn)行。另外，實(shí)施運(yùn)動(dòng)疲勞實(shí)驗(yàn)，通過(guò)入組者規(guī)定時(shí)間內(nèi)游泳訓(xùn)練，并維持同樣的500 m 距離運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度后誘發(fā)運(yùn)動(dòng)疲勞[10-13]，進(jìn)而促使機(jī)體大量消耗，產(chǎn)生大量的代謝產(chǎn)物如乳酸與尿素氮等[14-16]，而影響機(jī)體反應(yīng)時(shí)[17-20]。本研究通過(guò)測(cè)定仿野生黃芪和人工培育黃芪浸出物中氨基酸類、總黃酮及皂苷類的水平，發(fā)現(xiàn)不同來(lái)源黃芪抗疲勞作用與其浸出物中氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平存在密切相關(guān)性，仿野生黃芪的機(jī)體抗疲勞作用優(yōu)于人工培育黃芪。

綜上所述，與人工培黃芪相比，仿野生黃芪其浸出物中的氨基酸類、總黃酮及皂苷類水平更高，且具有更理想的機(jī)體抗疲勞作用。