丁陽(yáng) 馮超林 陳向丹 董書(shū)香 王峻

摘要 本文建立了安痛定注射液中巴比妥、安替比林、氨基比林含量的HPLC測(cè)定方法：采用Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-磷酸鹽緩沖液（pH 7.8～8.0）（20∶80）（用磷酸調(diào)節(jié)pH至8.0），檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm，流速1.0 mL/ min。結(jié)果表明，巴比妥在4.5～67.5 μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，r=0.999 7，平均回收率96.2%；安替比林在10～150 μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，r=0.999 9，平均回收率100.1%；氨基比林在25～375 μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，r=0.999 9，平均回收率97.1%；該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速、重現(xiàn)性好，可用于該制劑的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞 安痛定注射液；含量測(cè)定；HPLC

中圖分類號(hào) O657.72 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A

文章編號(hào) 1007-7731（2023）03-0092-03

Determination of Three Components in Antondine Injection by HPLC Method

DING Yang? ?FENG Chaolin? ?CHEN Xiangdan? ?DONG Shuxiang? ?WANG Jun*

（Hubei Provincial Institute of Veterinary Drug Supervision， Wuhan Hubei 430070）

Abstract A method for the determination of Barbital， Phenazone and Aminophenazone in Antondine Injection by HPLC was established. The experiment used Agilent Eclipse Plus C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， acetonitrile-phosphate buffer （pH7.8-8.0）（20∶80）（the pH value was adjusted to 8.0 with phosphoric acid）as the mobile phase， the detection wavelength was 240 nm with the flow rate of 1.0 mL/min. Results showed that linear range of Barbital was 4.5-67.5 μg/mL with r of 0.999 7， average recovery was 96.2%. Linear range of Phenazone was10-150 μg/mL with r of 0.999 9， average recovery was 100.1%. Linear range of Aminophenazone was 25-375 μg/mL with r of 0.999 9， average recovery was 97.1%. The method is simple， accurate， rapid and reproducible， and can be used for the content determination of the preparation.

Keywords antondineinjection; content determination; HPLC

安痛定注射液是廣泛應(yīng)用的解熱鎮(zhèn)痛藥，含巴比妥、安替比林和氨基比林3種成分?！吨袊?guó)獸藥典》2015年版一部均采用高效液相色譜法及容量分析進(jìn)行含量測(cè)定[1]，此方法操作煩瑣費(fèi)時(shí)，誤差較大。筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]，采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定巴比妥、安替比林和氨基比林的含量，該方法具有簡(jiǎn)易、快速、高效、重復(fù)性好等特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 儀器

島津20AD高效液相色譜儀；Agilent Eclipse Plus C18色譜柱，4.6 mm×250 mm（i.d.），粒徑5 μm；Mettler AE240電子天平；MILIPORE超純水處理器等。

1.2 試劑與材料

氨基比林對(duì)照品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，安替比林對(duì)照品由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供，巴比妥暫時(shí)為工作用對(duì)照品。甲醇、乙腈、磷酸鹽均為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；原料、輔料，安痛定注射液樣品（批號(hào)為20171101、20171102、20171201）均由成都某獸藥公司提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 溶液的配制。精密稱取巴比妥對(duì)照品11.25 mg，安替比林對(duì)照品25 mg、氨基比林對(duì)照品62.5 mg置于25 mL量瓶中，加流動(dòng)相10 mL，超聲使其溶解，放至室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述對(duì)照液2 mL置于50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為對(duì)照品溶液。精密量取安痛定注射液供試品5 mL置于100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述供試品溶液2 mL置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。

1.3.2 色譜條件。色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：乙腈︰磷酸鹽緩沖液（pH 7.8～8.0）（20∶80）用磷酸調(diào)節(jié)pH至8.0，流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm；進(jìn)樣量20 μL。

1.3.3 線性試驗(yàn)。精密稱取巴比妥對(duì)照品45 mg，安替比林對(duì)照品100 mg，氨基比林對(duì)照品250 mg置于100 mL量瓶中，加流動(dòng)相40 mL，超聲使其溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取上述稀釋液1.00、2.00、4.00、5.00、10.00、15.00 mL置于100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋成巴比妥濃度為4.5、9.0、18.0、22.5、45.0、67.5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，安替比林濃度為10、20、40、50、100、150 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，氨基比林濃度為25、50、100、125、250、375 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，各取20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

1.3.4 專屬性試驗(yàn)。在1.3.2色譜條件下，分別取供試品輔料空白溶液、對(duì)照品溶液以及供試品溶液注入液相色譜儀，考察其專屬性。

1.3.5 回收率試驗(yàn)。精密量取已知含量的安痛定注射液（批號(hào)20171101）5 mL 9份，按照各主成分80%、100%、120% 3個(gè)水平進(jìn)行添加，分別按1.3.1項(xiàng)下制備方法進(jìn)行處理，按1.3.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算巴比妥、安替比林、氨基比林的含量，計(jì)算回收率。

1.3.6 精密度試驗(yàn)。取1.3.1項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液，按1.3.2色譜條件測(cè)定峰面積，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，考察精密度。

1.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取1.3.1項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液，按1.3.2色譜條件測(cè)定峰面積，在不同時(shí)間0、2、4、6、8、10、12、24 h分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，考察對(duì)照品穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性試驗(yàn)

以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸（結(jié)果見(jiàn)圖1），得巴比妥回歸方程Y=25 261 x-10 613（r=0.999 7）；安替比林回歸方程Y=116 289 x-42 515（r=0.999 9）；氨基比林回歸方程Y=23 212 x-15 750（r=0.999 9）。可見(jiàn)在此色譜條件下巴比妥在4.5～67.5范圍內(nèi)線性良好，安替比林在10～150 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，氨基比林在25～375 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，結(jié)果見(jiàn)圖1～3。

2.2 專屬性試驗(yàn)

在1.3.2色譜條件下，色譜圖中巴比妥、安替比林與氨基比林峰分離效果好，含量測(cè)定不受其他雜質(zhì)峰的干擾，圖譜見(jiàn)圖4～6。

2.3 回收率試驗(yàn)

加樣回收率考察結(jié)果見(jiàn)表1～3。巴比妥平均回收率為100.5%，RSD為0.9%；安替比林平均回收率為100.5%，RSD為0.9%；氨基比林平均回收率為100.5%，RSD為0.9%，表明該法符合試驗(yàn)分析要求，準(zhǔn)確度高。

2.4 精密度試驗(yàn)

連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得巴比妥峰面積平均值為562 696，RSD為0.2%，安替比林峰面積平均值為2 896 340，RSD為0.1%，氨基比林峰面積平均值為5 800 114，RSD為0.1%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在不同時(shí)間0、2、4、6、8、10、12、24 h分別進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得巴比妥峰面積平均值為563 370，RSD為0.2%；安替比林峰面積平均值為2 896 755，RSD為0.1%；氨基比林峰面積平均值為5 801 764，RSD為0.2%，表明對(duì)照品溶液在室溫下24 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.6 樣品的測(cè)定

分別取同一廠家不同批號(hào)的樣品，采用1.3.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。樣品測(cè)定結(jié)果中可以看出本法與《中國(guó)獸藥典》2015年版一部測(cè)定的結(jié)果基本一致。

3 討論與結(jié)論

巴比妥在200～254 nm范圍內(nèi)有吸收，安替比林在240、254 nm處有較強(qiáng)吸收；氨基比林在240、273 nm有較強(qiáng)吸收。注射液中巴比妥含量較低，為了避免低波長(zhǎng)誤差，故選擇干擾較小的波長(zhǎng)240 nm。因?yàn)榘被攘趾桶蔡姹攘纸Y(jié)構(gòu)相似，而巴比妥受酸堿影響較大，在一般的液相色譜條件下，難以分離。試驗(yàn)多種流動(dòng)相，結(jié)果表明流動(dòng)相為乙腈-磷酸鹽緩沖液（pH 7.8～8.0）（20∶80）用10%磷酸調(diào)節(jié)pH至8.0，可使3組分達(dá)到最佳分離效果，峰形好，分離度較高，重現(xiàn)性好，因此采用以上色譜條件測(cè)定安痛定注射液的含量。

本法測(cè)定安痛定注射液中巴比妥、安替比林、氨基比林3種組分的含量時(shí)，操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為該制劑的含量測(cè)定提供參考，特別是在獸藥企業(yè)的內(nèi)部質(zhì)量控制方面有一定的指導(dǎo)作用。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)獸藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典2015年版一部[S].

[2] 趙素珍. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方氨林巴比妥注射液中氨基比林和安替比林的含量[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2007（21）：128-129.

[3] 孫東凱，劉廣川，王麗琴. HPLC法測(cè)定復(fù)方氨林巴比妥注射液中氨基比林和安替比林的含量[J]. 天津藥學(xué)，2007（6）：19-20.

[4] 陳秀琳，蔡加琴，黃麗萍. HPLC法測(cè)定復(fù)方氨林巴比妥注射液三組分的含量[J]. 海峽藥學(xué)，2008（6）：53-55.

（責(zé)編：王慧晴）

作者簡(jiǎn)介 丁陽(yáng)（1992—），男，河南信陽(yáng)人，從事獸藥檢驗(yàn)檢測(cè)工作。

王峻*通信作者

收稿日期 2022-04-02