包薩其如拉,斯琴圖雅,阿麗婭,那仁格日樂

(內蒙古醫(yī)科大學 蒙醫(yī)藥學院,內蒙古 呼和浩特 010110)

蒙藥藁本是傳統(tǒng)蒙醫(yī)常用藥,來源于傘形科植物藁本LigusticumsineseOliv.或遼藁本LigusticumjeholenseNakai et Kitag.的干燥根莖和根[1]。蒙古名為“哈日-巴拉其日嘎納”,具有清疫(瘟)、除黏、止痛、消腫、消熱性協(xié)日烏素等功效,常作為藁本-29、藁本-13等傳統(tǒng)蒙藥方劑的君藥[2]?，F(xiàn)代研究表明,藁本具有抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、中樞抑制、抗血栓等藥理作用,對心、腦血管、胃腸道也具有藥理活性。藁本的主要活性部位為揮發(fā)油,含有萜類、香豆素類、苯酞類、烯丙基類等化學成分,藁本根及根莖揮發(fā)油含量為0.38%～0.65%[3]。目前,藁本化學成分研究均集中于水蒸氣蒸餾提取部位,超臨界CO2萃取提取部位的研究尚未見報道。為揭示不同提取方法對蒙藥藁本化學成分的影響,本研究采用GC-MS法對蒙藥藁本SD法與SFE-CO2法提取部位的化學成分進行分析比較,旨在為深入研究提供參考。

1 儀器與材料

EXPEC 5250型氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質譜聯(lián)用儀(杭州譜育科技發(fā)展有限公司),乙酸乙酯(分析純,天津市鑫鉑特化工有限公司),無水硫酸鈉(分析純,天津市津東天正精細化學試劑廠)。

實驗用藁本片購于河北神祁藥業(yè)有限公司,產(chǎn)自四川,生產(chǎn)批號為170301,執(zhí)行標準為《中華人民共和國藥典:一部》(2020年版),經(jīng)內蒙古醫(yī)科大學蒙醫(yī)藥學院王布和朝魯講師鑒定為傘形科植物藁本LigusticumsineseOliv.的干燥根莖。

2 研究方法

2.1 提取揮發(fā)油

分別采用SD法(參照《中華人民共和國藥典》[4]2020年版XD附錄2204揮發(fā)油測定法中的甲法)與SFE-CO2法(參照文獻[5]方法,萃取條件:14MPa,39℃,90min)提取蒙藥藁本揮發(fā)油。

2.2 制備供試品溶液

SD法提取部位先用無水硫酸鈉脫水干燥,再加乙酸乙酯稀釋至10倍,超聲20min,經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后得供試液。SFE-CO2法提取部位直接用乙酸乙酯稀釋至10倍后超聲20min,經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后得供試液。

2.3 GC-MS分析條件

2.3.1 氣相色譜條件 色譜柱為HP-5MS(30m×0.25mm×0.23μm);進樣口溫度:280℃;載氣:氦氣;載氣流速:1mL·min-1;進樣量:1μL;分流比:40∶1;升溫程序:柱初始溫度為50℃,以10℃·min-1的速率升至90℃;再以4℃·min-1的速率升至280℃,并恒溫7.3min。

2.3.2 質譜條件 離子源:EI,離子源溫度:250℃;掃描模式:MSI Scan,掃描間隔:0.02s;電離能量:70eV;接口溫度:270℃。

3 結果

按“2.2”項下GC-MS分析條件進樣,得到兩種方法提取部位的總離子流圖,結果見圖1和圖2。利用計算機的NIST質譜數(shù)據(jù)庫將質譜結果進行檢索對照,對兩種方法提取部位的化學成分進行鑒定,并應用色譜峰面積歸一法計算各組分的相對百分含量。從SD部位鑒定出19個成分,多為相對小分子量的酮、苯酚、烯和醇類,峰面積占總峰面積的62.33%。SFE-CO2部位鑒定出17個成分,多為酮、苯醌、醇類和有機酸等物質,峰面積占總峰面積的53.97%。SD法中的主要成分,即相對含量最高的成分是(E)-3-丁烯基-4,5-二氫-1(3H)-異苯并呋喃酮(20),是SFE-CO2部位的兩倍多。SFE-CO2法中的主要成分是8,11-十八碳二烯酸甲酯(25),SD部位未檢測到。共有成分有6個,分別是O-(2-甲基丙基)-羥胺(1),β-羅勒烯(2),1-甲基-4-(1-甲基亞乙基)-環(huán)己烯(8),[4aR-(4aa,7a,8aβ)]-十氫-4a-甲基-1-亞甲基-7-(1-甲基乙烯基)-萘(13),[1ar-(1aa,4aa,7β,7aβ,7ba)]-十氫-1,1,7-三甲基-4-亞甲基-1H-環(huán)丙[e]薁-7-醇(17),(E)-3-丁烯基-4,5-二氫-1(3H)-異苯并呋喃酮(20)。共有成分在SD法與SFE-CO2法中的相對含量不同,SD法和SFE-CO2法所提取的藁本揮發(fā)油化學成分種類及相對含量也有一定的差異。分析結果見表1。

圖2 蒙藥藁本SFE-CO2法提取部位的GC-MS總離子流圖

表1 蒙藥藁本SD法與SFE-CO2法提取部位的成分分析

4 討論

SD部位的主要成分為藁本內酯((E)-3-丁烯基-4,5-二氫-1(3H)-異苯并呋喃酮),與報道文獻[6]一致,且SD部位檢測出的化學成分總相對含量高于SFE-CO2部位。兩種提取部位獲得的化學成分種類數(shù)量接近,SD法提取部位成分種類略多于SFE-CO2法提取部位,可能是揮發(fā)油中的某些成分及物質發(fā)生了氧化[7]、分解等反應,以及因長時間煎煮藥材組織破壞[8]所致,而SFE-CO2法提取條件溫和,可避免氧化分解等反應。蒙藥化學成分研究對推進蒙藥事業(yè)發(fā)展有重要意義,劑型改革、新品研制、蒙藥質量標準制定,以及蒙藥配伍規(guī)律研究均以化學成分研究為基礎[9]。本研究結果提示,不同提取方法所檢測出的化學成分和相對含量不完全相同。因此,還需深入研究傳統(tǒng)蒙藥有效成分不同提取部位的區(qū)別,以便在進行相關藥理活性研究時,篩選最佳提取有效成分的方法,為獲取可靠實驗數(shù)據(jù)及實驗結果奠定基礎。

通過兩種提取部位鑒定出的化學成分含有一些功效成分。如SD部位的主要成分:(E)-3-丁烯基-4,5-二氫-1(3H)-異苯并呋喃酮,即藁本內酯,也是SD與SFE-CO2部位的共有成分,具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、神經(jīng)保護等多種藥理活性[10]。從SFE-CO2部位檢測到的豆甾醇具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降低膽固醇和改善記憶等多種藥理作用[11];阿魏酸具有抗氧化、抗血栓、降血脂、降低心肌缺血和耗氧量、抗菌、抗病毒、抗癌等藥理作用[12]。從SD部位檢測到的草蒿腦具有抗抑郁、殺菌、退熱、止咳、健胃醒腦等功效[13]。

綜上所述,通過研究蒙藥藁本SD法和SFE-CO2法提取部位的化學成分,為進一步研究蒙藥藁本化學成分及進一步開發(fā)利用蒙藥藁本提供實驗依據(jù)。