何畑林,劉育辰,劉 剛

(貴州中醫(yī)藥大學 藥學院,貴州 貴陽 550025)

苗藥黑骨藤追風活絡膠囊是根據(jù)苗醫(yī)藥理論,以青風藤為君藥[1],與黑骨藤、追風傘配伍研制而成,具有祛風除濕、通絡止痛功效,是用于治療風、寒、濕痹所致肩、臂、腰、腿疼痛[2]的苗藥大品種,是治療類風濕性關節(jié)炎(RA)的代表藥物之一,該產品自上市以來市場占有率位居同類產品前列。目前,黑骨藤追風活絡膠囊的質量標準執(zhí)行的是“中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局標準(試行)(WS-10232(ZD-0232)2002)”,僅有薄層鑒別、顯微鑒別[3-4]及青藤堿單一指標成分的含量測定,檢測指標單一,難以控制制劑質量,也無法反映該制劑質量的整體性。本研究旨在總結黑骨藤追風活絡膠囊及各單味藥化學成分、各單味藥藥理作用并預測其質量標志物(Quality marker,Q-Marker),為建立以Q-Marker為指標的黑骨藤追風活絡膠囊質量標準提供理論依據(jù),構建既體現(xiàn)中醫(yī)藥特色,又關聯(lián)臨床療效的中藥復方制劑質量評價新模式,以期解決中藥復方制劑質量評價體系不全面、指標成分與功效關聯(lián)性不強等關鍵問題,為完善中藥復方制劑質量評價體系提供新思路。

1 化學成分

班小紅[1]從黑骨藤追風活絡膠囊中分離并鑒定出19種化合物(化學結構見圖1),其中,7個生物堿類化學成分:尖防己堿(1)、青藤堿(2)、dauricumine(3)、青藤酮堿(4)、尖防己定堿(5)、蝙蝠葛波酚堿(6)、蝙蝠葛寧(7);5個木質素類化學成分:丁香樹脂雙葡萄糖苷(8)、thero-1-C-syringyl-glycerol(9)、(-)-丁香樹脂酚(10)、Cleomiscosin C(11)、Icariol A2(12);3個甾體類成分:滇杠柳苷元(13)、杠柳苷(14)、β-谷甾醇(15);1個三萜類成分:熊果酸(16);3個其他類成分:丁香醛(17)、丁香酸(18)、鄰苯二酚(19)。

圖1 黑骨藤追風活絡膠囊化合物結構

2 藥理作用

2.1 抗類風濕性關節(jié)炎(RA)

古金華等[5]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊能減少miR-146a、miR-16 的表達,從而達到減輕RA癥狀的效果。駱鏡妃等[6]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊降低大鼠足腫脹效果,在第21天較強的松、吲哚美辛明顯;能降低IL-1β、TNF-α 水平,治療效果與強的松、吲哚美辛相當,但IL-10較給藥前有所升高。包喜文等[7]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊可以抑制促炎因子IL-1β、IFN-γ、IL-15 的異常表達。邰灣等[8]通過網絡藥理學推斷出STAT1-ERKs 相關通路可能是其抗RA 潛在的作用方向。另外,黑骨藤追風活絡膠囊可抑制IL-12信號通路,并抑制此通路誘導的IL-12R及Stat4的產生[9]。劉楊等[10]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊能降低大鼠足跖腫脹度,降低滑膜組織 p-PI3K、p-AKT、HIF-1α、Bcl-2 等蛋白的表達,上調血漿中IL-4的表達并下調血漿中IL-2、IL-17的表達,以此得出黑骨藤追風活絡膠囊能通過調節(jié) PI3K/AKT/HIF-1α 信號通路,對類風濕關節(jié)炎大鼠炎性反應起到抑制作用的結論。梁江等[11]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊可以降低CIA大鼠足跖腫脹度,降 低 CIA 大 鼠 NF-κBp65、p-NF-κBp65、RANKL 蛋白水平,增加 IκBα 蛋白表達,并得出結論,黑骨藤追風活絡膠囊通過抑制NF-κB 通路相關蛋白活性起到減輕關節(jié)炎癥反應的作用。

2.2 抗骨關節(jié)炎(OA)

盧云[12]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊可能通過MPAK、NF-κB、PI3K/AKT、VEGF等信號通路,抑制血清中MMP9、PRKCA的表達水平,改善寒濕痹阻型KOA患者關節(jié)癥狀、功能,從而延緩疾病發(fā)展。古金華等[13]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊可以顯著緩解風寒濕痹型膝骨關節(jié)炎患者疼痛及功能障礙,患者服藥6周后,血清中TGF-β1、IL-1、CTX-β、CRP濃度明顯下降。結果提示,黑骨藤追風活絡膠囊可通過調節(jié)免疫、抗炎、鎮(zhèn)痛,覆蓋風寒濕痹型膝骨關節(jié)炎的多重發(fā)病機理,從源頭抑制炎性細胞及炎性因子活性,改善患者臨床癥狀,從根本上治療風寒濕痹型膝骨關節(jié)炎。

3 臨床應用

目前,黑骨藤追風活絡膠囊主要用于關節(jié)類疾病,以治療類風濕性關節(jié)炎為主。

3.1 治療類風濕性關節(jié)炎(RA)

黑骨藤追風活絡膠囊可聯(lián)合甲氨蝶呤治療類風濕性關節(jié)炎,可協(xié)同發(fā)揮作用,增強藥效,促進類風濕關節(jié)炎癥狀改善。較單一用藥,聯(lián)合用藥的不良反應更少,療效更優(yōu)[14-16]。古金華等[5]研究發(fā)現(xiàn),患者在服用洛索洛芬鈉基礎上,加用黑骨藤追風活絡膠囊治療后,關節(jié)腫脹個數(shù)、關節(jié)壓痛個數(shù)、關節(jié)腫脹指數(shù)、休息痛分數(shù)及晨僵時間減少,雙手平均握力增加,患者血清中ERS、CRP、RF含量降低,關節(jié)液IL-17A、IL-18、IL-27含量降低,關節(jié)液miR-146a、miR-16表達降低,且上述指標均優(yōu)于洛索洛芬鈉與氨甲蝶呤片聯(lián)合用藥組,療效更加顯著?，F(xiàn)有研究證明,黑骨藤追風活絡膠囊與洛索洛芬鈉、氨甲蝶呤片聯(lián)合用藥后,輔以針刺療效更優(yōu)。王可博等[17]在上述條件下輔以針刺后,臨床效果優(yōu)于服藥組;呂曉薇[18]在上述服藥條件下,得到黑骨藤追風活絡膠囊與洛索洛芬鈉、氨甲蝶呤片聯(lián)合用藥并結合針法,較單獨服用西藥療效更顯著。

3.2 治療關節(jié)炎(OA)

盧云[12]研究發(fā)現(xiàn),予美洛昔康、鹽酸氨基葡萄糖膠囊聯(lián)合黑骨藤追風活絡膠囊的治療效果優(yōu)于單獨服用美洛昔康、鹽酸氨基葡萄糖膠囊。古金華等[13]研究了黑骨藤追風活絡膠囊治療風寒濕痹型膝骨關節(jié)炎的臨床效果,結果說明,黑骨藤追風活絡膠囊可顯著緩解風寒濕痹型膝骨關節(jié)炎疼痛及功能障礙,并有利于軟骨修復。

4 Q-Marker預測分析

質量標志物(Q-Marker)是劉昌孝院士提出的新型概念,指存在于中藥材和中藥產品(中藥飲片、中藥煎劑、中藥提取物、中成藥制劑等)中固有的或加工制備過程中形成的,與中藥的功能屬性密切相關的化學物質,作為反映中藥安全性和有效性的標志性物質進行質量控制[19]。近年來,諸多學者基于此概念對保元湯[20]、痹祺膠囊[21]、桃紅四物湯[22]、當歸補血湯[23]、玉泉丸[24]等復方藥物進行了質量標志物的預測分析。

中藥質量標志物具有有效性高度關聯(lián)、整體且多元質控的特點[24],中藥復方藥的質量標志物是基于質量傳遞與溯源、成分特有性、成分與藥效關聯(lián)、復方配伍環(huán)境、成分可測性[25]等5項原則預測。研究路徑見圖2。

圖2 基于“五原則”的黑骨藤追風活絡膠囊Q-Marker研究路徑

4.1 基于質量傳遞與溯源的Q-Marker預測分析

筆者通過搜索中國知網、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風活絡膠囊、苗藥追風傘的藥代動力學研究尚未見報道,因而調研了制劑中黑骨藤與青風藤的入血成分,以此作為分析該膠囊Q-Marker的依據(jù)。

4.1.1 黑骨藤 根據(jù)現(xiàn)有藥代動力學研究,黑骨藤共有17個入血成分,其中,10個為原型成分,7個為代謝產物。經鑒定,7個原型吸收入血成分為3-O-咖啡?；鼘幩?綠原酸)、4-O-咖啡酰基奎寧酸(隱綠原酸)、5-O-咖啡酰基奎寧酸(新綠原酸)、3,4-O-二咖啡酰基奎寧酸(異綠原酸B)、3,5-O-二咖啡酰基奎寧酸(異綠原酸A)、4,5-O-二咖啡?；鼘幩?異綠原酸C)和杠柳毒苷[26-30]。

4.1.2 青風藤 青風藤入血成分有7種:4-hydroxy-3,6-dimethoxyl-17-methyl-morphinan-7-one、尖防己堿、青藤堿、丁香苷、土藤堿、青風藤堿、木蘭花堿,其中,青藤堿、土藤堿、青風藤堿、木蘭花堿為原型吸收入血成分[31-32]。

新學期不少年輕教師要組建運動隊（以田徑隊為例）進行業(yè)余訓練，新團隊的凝聚力培養(yǎng)是團隊建設與管理的關鍵環(huán)節(jié)，是對年輕教師執(zhí)教能力的考驗與管理能力的挑戰(zhàn)。年輕教師要善于學習與借鑒優(yōu)秀教師的管理藝術，從團隊建設的幾個關鍵點著手，加強團隊凝聚力的培養(yǎng)和引導，運動隊管理才能取得良好的效果。

根據(jù)現(xiàn)有文獻推測,綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、杠柳毒苷、4-hydroxy-3,6-dimethoxyl-17-methyl-morphinan-7-one、尖防己堿、青藤堿、丁香苷、土藤堿、青風藤堿、木蘭花堿這些成分可能是黑骨藤追風活絡膠囊發(fā)揮藥理作用的有效成分。

4.2 基于成分特有性的Q-Marker預測分析

4.2.1 青風藤特有成分分析 青風藤是防己科植物青藤Sinomeniumacuturn(Thunb.)Rehd.et Wils.及毛青藤Sinomeniumacutum(Thunb.)Rehd.et Wils.Var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥藤莖。青風藤中主要含有生物堿、三萜、木脂素等成分[33-34],其中,生物堿是其主要的活性成分,如青藤堿、木蘭花堿等。現(xiàn)有研究證明,青風藤中的青藤堿是治療RA的有效成分之一[35-37],特征性較強。

4.2.2 黑骨藤特有成分分析 黑骨藤為蘿藦科杠柳屬植物黑龍骨PeriplocaforrestiiSchltr.的干燥根或全株,主要含有黃酮類、苯丙素類、甾體等成分[38],其中的咖啡?；鼘幩犷惓煞质侵委烺A的有效成分[39-40],且含量較高[41],具有特征性。

4.2.3 追風傘特有成分分析 追風傘為報春花科植物狹葉落地梅LysimachiaparidiformisFranch.var.Stenophylla.Franch.和落地梅LysimachiaparidiformisFranch.的全草。追風傘主要含有黃酮、甾體、苯丙素及揮發(fā)油等主要成分[42],其中,總黃酮具有生物活性[43],具有特征性。

4.3 基于成分與藥效關聯(lián)的Q-Marker預測分析

質量控制的最終目的是提升藥效。因此,“有效”是Q-Marker的核心要素。本研究調研發(fā)現(xiàn),有關黑骨藤追風活絡膠囊研究多集中于藥理作用、臨床病例觀察研究,對其抗RA作用的具體化學成分尚未見報道,因此本課題組后續(xù)也將在此領域展開研究。

青風藤其味苦、辛,性平,歸肝、脾經,具有祛風濕、通經絡、利小便之功,可用于風濕痹痛、關節(jié)腫脹、麻痹瘙癢,常用于治療類風濕關節(jié)炎,現(xiàn)被收載于2020版《中華人民共和國藥典》[44]。青風藤治療類風濕性關節(jié)炎的有效成分為生物堿類,其中,青藤堿與青風藤堿抗炎活性較好[35-36];黑骨藤有祛風除濕、通經活絡之功效,用于治療風濕關節(jié)痛、跌打損傷、乳腺炎、閉經等病癥[45]?，F(xiàn)有研究表明,黑骨藤治療RA的關鍵成分可能為咖啡?；鼘幩犷惓煞?其中,以綠原酸、1,3-O-二咖啡?；鼘幩岬捏w外抗RA效果最好[39-40];追風傘具有祛風通絡、活血止痛之功效,用于治療風濕痹痛、四肢拘攣、半身不遂、小兒驚風、跌仆、骨折[46-47]。目前,追風傘具體有效成分尚不明晰。根據(jù)現(xiàn)有文獻,追風傘所含有的黃酮類成分刺槐素(又稱金合歡素)、槲皮素、山柰酚、木犀草素具有抗RA的作用[48-52]。其中,木犀草素對關節(jié)起保護作用[52],其苷類成分具有抗炎作用[53-54]。

綜上所述,推測黑骨藤追風活絡膠囊抗RA的Q-Marker可能為青藤堿、青風藤堿、3-O-咖啡?；鼘幩?綠原酸)、刺槐素、槲皮素、山柰酚、木犀草素及其苷類成分。

4.4 基于復方配伍環(huán)境的Q-Marker預測分析

4.5 基于成分可測性的Q-Marker預測分析

“成分可測性”是質量標志物應用的必備條件,包括指標成分、指示性成分、類成分和全息成分[55]。《中國藥典》2020版規(guī)定青風藤含量測定的成分為青藤堿[44];安蘭蘭等[41]已建立HPLC測量黑骨藤咖啡?；鼘幩犷惓煞趾康姆椒?追風傘中綠原酸、蘆丁、異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素及刺槐素相關含量測定也已見報道[56]。

在Q-Marker的預測過程中,應將上述5點相結合,選取方便檢測、有藥效且特征明顯的成分,綜合推斷綠原酸、1,3-O-二咖啡?；鼘幩?、木犀草素、刺槐素、青藤堿、青風藤堿可作為黑骨藤追風活絡膠囊的Q-Marker。

5 結語

中藥復方藥質量評價較為復雜,學界對少數(shù)民族經驗用藥研究尚有限,許多藥物的化學成分、有效成分、藥理作用、藥代動力學研究較為空缺,這更加增加了評價民族藥復方藥質量評價的難度。

以黑骨藤追風活絡膠囊為例,其作為上市多年的苗藥,深受廣大類風濕性關節(jié)炎患者的好評,但其仍存在藥效基礎不明確、質量標準低等不足。單味藥是組成復方藥的基礎,黑骨藤追風活絡膠囊中的追風傘,學界對其研究較少,今后應分析其有效成分。因此,黑骨藤追風活絡膠囊今后的研究方向或將集中于化學成分、藥代動力學、研究量效關系控制等方面。

本研究基于質量傳遞與溯源、成分特有性、成分與藥效關聯(lián)、復方配伍環(huán)境、成分可測性等原則,推斷黑骨藤追風活絡膠囊治療類風濕性關節(jié)炎的Q-Marker可能為綠原酸、1,3-O-二咖啡?；鼘幩?、木犀草素、刺槐素、青藤堿、青風藤堿。今后將著重研究以上成分是否能作為評價黑骨藤追風活絡膠囊抗類風濕性關節(jié)炎的質量標志物。