［摘要］目的探究幽門螺桿菌感染對老年胃癌病理組織miR-217表達(dá)水平的影響及預(yù)后情況。方法選取武警安徽省總隊醫(yī)院2019年2月～2020年2月收治的108例老年胃癌患者進(jìn)行回顧性分析，據(jù)術(shù)后病理組織幽門螺桿菌檢測結(jié)果分為陽性組（74例）及陰性組（34例）。采用qRT-PCR法檢測miR-217表達(dá)水平，比較不同臨床病理特征幽門螺桿菌陽性胃癌患者癌組織miR-217的表達(dá)水平，ROC曲線評估癌組織miR-217對幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后的影響，比較miR-217不同表達(dá)水平與幽門螺桿菌陽性胃癌患者生存預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果陽性組癌組織miR-217的表達(dá)水平高于陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；腫瘤直徑≥5cm、分化程度為低中分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幽門螺桿菌陽性胃癌患者癌組織miR-217的表達(dá)水平較高（P＜0.05）。癌組織miR-217預(yù)測預(yù)后的曲線下面積為0.712（95%CI：0.590～0.834，P=0.003），截斷值為4.667，靈敏度為70.80%，特異度為62.00%。癌組織miR-217高表達(dá)者（miR-217＞4.667）的死亡率高于miR-217低表達(dá)者（P＜0.05）。結(jié)論幽門螺桿菌感染陽性胃癌患者癌組織的miR-217表達(dá)水平較高，與幽門螺桿菌感染陽性胃癌病理特征有關(guān)，同時癌組織miR-217對患者的預(yù)后具有預(yù)測價值。

［關(guān)鍵詞］幽門螺桿菌感染；老年胃癌；miR-217；診斷；預(yù)后

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2023.04.012

EffectofHelicobacterPyloriInfectionontheExpressionofMiR-217inGastricCancerinOlderPatients

TangWeizhi1，ChenHao2**，ZhengDuoan1

1DepartmentofGeneralSurgery，AnhuiProvincialArmedPoliceCorpsHospital，Hefei230041；2DepartmentofGeneralSurgery，theFirstAffiliatedHospitalofUniversityofScienceandTechnologyofChina（AnhuiProvincialHospital），Hefei230000

**Correspondingauthor：ChenHao，email：287003069@qq.com

［Abstract］ObjectiveToinvestigatetheeffectsofHelicobacterpyloriinfectiononthelevelofmiR-217inthetissuesofgastriccancerandpatient′sprognosis.MethodsAretrospectivelyanalysiswasconductedontheclinicaldataof108olderpatientswithgastriccancertreatedinAnhuiProvincialArmedPoliceCorpsHospitalfromFebruary2019toFebruary2020.AccordingtotheHelicobacterpyloriexaminationinpostoperativepathologicaltissues，thepatientsweredividedintoanpositivegroup（74cases）andanegativegroup（34cases）.TheexpressionofmiR-217wasmeasuredbyqRT-PCR，andwascomparedincancertissuesofHelicobacterpylori-positivegastriccancerpatientswithdifferentclinical-pathologicalfeatures.Receiveroperatingcharacteristic（ROC）curvewasusedtoevaluatetheeffectofmiR-217onprognosisofgastriccancerpatientswithHelicobacterpyloriinfection.TherelationshipbetweendifferentlevelsofmiR-217andsurvivalinHelicobacterpylori-positivegastriccancerpatientswascompared.ResultsThelevelofmiR-217incancertissuesinthepositivegroupwashigherthanthatinthenegativegroup（Plt;0.05）.ThelevelofmiR-217washigherincancertissuesofHelicobacterpylori-positivegastriccancerpatientswithtumorsize≥5cm，low-mediumdifferentiation，TNMstageⅢtoⅣ，andlymphnodemetastasis，andthedifferenceswerestatisticallysignificant（Plt;0.05）.ROCcurveshowedthattheareaundercurve（AUC）ofmiR-217inpredictingtheprognosiswas0.712（95%CI：0.590-0.834，P=0.003），thecut-offvaluewas4.667.Thesensitivityandspecificitywere70.80%and62.00%，respectively.ThemortalityrateinthepatientswithhighlevelofmiR-217（miR-217＞4.667）wassignificantlyhigherthanthatinthepatientswithlowlevelofmiR-217（miR-217≤4.667）（Plt;0.05）.ThemediansurvivaltimeofhighexpressiongroupofmiR-217wassignificantlyshorterthanthatoflowexpressiongroup，thedifferencehadastatisticallysignificant（Plt;0.05）.ConclusionThelevelofmiR-217ishighinpatientswithHelicobacterpylori-positivegastriccancer，anditisrelatedtothecharacteristicsofHelicobacterpylori-positivegastriccancer.ThelevelofmiR-217incancertissueshaspredictivevaluefortheprognosisofpatients.

［Keywords］Helicobacterpyloriinfection；Gastriccancer；MiR-217；Diagnosis；Prognosis

胃癌作為臨床上一類發(fā)病率較高的消化道惡性腫瘤多發(fā)生在中老年人群，對患者的生命健康可造成較大的影響。據(jù)研究資料顯示，胃癌的發(fā)生發(fā)展受到多種因素的影響，其中幽門螺桿菌在胃癌進(jìn)展期間發(fā)揮重要的作用［1］。通過幽門螺桿菌感染對胃癌的作用機(jī)制研究在延長幽門螺桿菌陽性胃癌患者的生存時間方面具有重要的臨床意義。microRNA是一類重要的非編碼性內(nèi)源性RNA，在細(xì)胞增殖、分化、遷移以及凋亡等多種生物學(xué)行為中起到了重要的調(diào)控作用，在近年來的報道中也證實，microRNA在胃癌發(fā)生發(fā)展中呈現(xiàn)出較為異常的表達(dá)水平［2］。既往有臨床資料通過對TCGA數(shù)據(jù)庫篩查出胃癌組織中特異性高表達(dá)的分子miR-217在胃癌診斷中具有較高的臨床價值，同時可作為預(yù)測胃癌患者死亡的可靠生物標(biāo)記物［3］。不過尚無大量研究證實miR-217與幽門螺桿菌陽性胃癌的關(guān)系，及其對預(yù)后可能造成的影響，本研究就幽門螺桿菌感染對老年胃癌病理組織miR-217表達(dá)水平及對預(yù)后的影響進(jìn)行評價。

1對象與方法

1.1研究對象

選取武警安徽省總隊醫(yī)院2019年2月～2020年2月收治的108例老年胃癌患者進(jìn)行回顧性分析，根據(jù)術(shù)后病理組織幽門螺桿菌檢測結(jié)果分為陽性組（74例）及陰性組（34例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床癥狀及體征、影像學(xué)以及病理檢查后確診為胃癌，胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《胃癌診治難點中國專家共識（2020版）》［4］，幽門螺桿菌陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《幽門螺桿菌感染基層診療指南（2019年）》［5］；②年齡＞65歲；③術(shù)前尚未接受放化療治療；④具有完整的隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腫瘤；②接受過幽門螺桿菌根除治療；③合并嚴(yán)重的高血壓、糖尿病等重要慢性疾病史；④妊娠及哺乳期婦女；⑤合并精神類疾病或存在意識障礙者；⑥因各種原因?qū)е碌呐R床資料缺失者。

1.2方法

1.2.1幽門螺桿菌感染檢測方法檢查前未口服抗生素以及抑酸藥物等服用史，術(shù)中取適量的胃癌組織以及癌旁組織進(jìn)行檢測，采用生理鹽水對組織進(jìn)行清洗，改用Giemsa染色法與快速尿素酶試驗法對幽門螺桿菌進(jìn)行測量。2次試驗均呈現(xiàn)出陽性則認(rèn)定為幽門螺桿菌感染，反之則是無幽門螺桿菌感染。

1.2.2miR-217表達(dá)水平測量方法切取0.1g的胃癌組織標(biāo)本放入到小燒杯內(nèi)，將組織剪碎，轉(zhuǎn)移至玻璃勻漿管中，充分研磨后，獲取100μL的組織勻漿放入EP管中，加入900μL的Trizol試劑，依次加入氯仿、異丙醇以及無水乙醇，從而獲得組織總RNA，采用微量紫外線分光光度計對RNA的濃度及純度進(jìn)行檢測。配制qRT-PCR反應(yīng)體系，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性20s，95℃變性30s，60℃退火30s，70℃延伸10s；共40個循環(huán)［6］。以U6為內(nèi)參。miR-217引物序列，正向：5'-GATAACAGGCAAGCTTTGAGG-3'，反向：5'-CTGCAAAGATTGTTTGCGAGA-3'。采用2-ΔΔCt法計算miR-217mRNA的相對表達(dá)量。重復(fù)實驗3次。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布計量資料以±s表示，采取t檢驗和單因素方差分析檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，Kaplan-Meier法繪制生存曲線（組間比較采用Log-rank檢驗），ROC曲線評估癌組織miR-217對預(yù)后的預(yù)測價值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1幽門螺桿菌陽性及陰性患者癌組織miR-217的表達(dá)水平比較陽性組癌組織miR-217的表達(dá)水平（4.68±0.19）高于陰性組（1.66±0.42），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=51.725，P＜0.001）。

2.2不同臨床病理特征的幽門螺桿菌陽性胃癌癌組織中miR-217的表達(dá)比較

腫瘤直徑≥5cm、分化程度為低中分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幽門螺桿菌陽性胃癌患者癌組織miR-217的表達(dá)水平較高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.3ROC曲線評估癌組織miR-217對幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后的影響

隨訪400d，生存50例，死亡24例。繪制ROC曲線，癌組織miR-217預(yù)測預(yù)后的曲線下面積為0.712（95%CI：0.590～0.834，P=0.003），截斷值為4.667，靈敏度為70.80%，特異度為62.00%，見圖1。

2.4癌組織miR-217不同表達(dá)水平的幽門螺桿菌陽性胃癌患者的生存情況比較

按照ROC曲線獲得的截斷值對胃癌患者進(jìn)行分組，miR-217≤4.667為低表達(dá)組（38例）、miR-217＞4.667為高表達(dá)組（36例），高表達(dá)組的死亡率［47.22%（17/36）］高于低表達(dá)組［18.42%（7/38）］，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.998，P=0.008）。經(jīng)Log-rank檢驗，miR-217高表達(dá)組的累積生存率小于低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.418，P=0.022），見圖2。

3討論

30年間胃癌始終是我國發(fā)病首位的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有較高的侵襲率以及轉(zhuǎn)移率，隨著人們生活質(zhì)量的提高，胃癌發(fā)病率不斷升高，其中老年作為胃癌的主要發(fā)病人群，確診多已經(jīng)為中晚期［7］。臨床資料顯示，因絕大多數(shù)的胃癌已經(jīng)進(jìn)入晚期，傳統(tǒng)手術(shù)治療方法相對較差，術(shù)后5年生存率低［8］。報道顯示，胃癌的發(fā)生發(fā)展可受到多種因素的影響，如幽門螺桿菌感染、消化系統(tǒng)疾病、飲食習(xí)慣等，其中幽門螺桿菌感染被認(rèn)為是誘發(fā)胃癌的重要因素之一［9］。有臨床資料顯示，幽門螺桿菌感染后多寄居在患者的胃竇小凹部位，并在該部位繁殖，誘發(fā)腸上皮化生以及不典型增生等疾病，也是導(dǎo)致胃癌發(fā)生發(fā)展的常見部位［10］。加之幽門螺桿菌的長期存在也會對胃黏膜產(chǎn)生刺激作用，促使其分泌大量的炎癥因子，進(jìn)而引起粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞出現(xiàn)一系列的浸潤，最終產(chǎn)生慢性炎癥疾病，導(dǎo)致胃黏膜萎縮或者不典型增生。因此，幽門螺桿菌也被認(rèn)為是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的重要危險因素。

miRNAs是一類小的內(nèi)源性非編碼RNA，由約22個核苷酸組成，是一類關(guān)鍵的基因表達(dá)調(diào)節(jié)分子，其作用機(jī)制在于能夠通過與mRNA的3′UTP結(jié)合而抑制轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而影響癌基因和抑癌基因的表達(dá)，從而促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移［11］。2001年，學(xué)術(shù)界將這類廣泛存在于動植物中含有約22個核苷酸的非編碼蛋白質(zhì)的小RNA命名為miRNA，其在進(jìn)化上是一類高度保守、非編碼、單鏈的小RNA，長度約為21～22nt，廣泛分布于各種真核細(xì)胞內(nèi)，位于編碼基因的外顯子、內(nèi)含子和基因間區(qū)域，主要通過抑制mRNA翻譯或促進(jìn)其

降解調(diào)控基因表達(dá)從而發(fā)揮功能，在既往臨床工作中已經(jīng)被證實其與諸多腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展具有密切的相關(guān)性［12］。miR-217作為其中一個常見的RNA類型，與諸多腫瘤疾病的病理生理活動具有密切的相關(guān)性，但與幽門螺桿菌陽性胃癌患者之間的關(guān)系尚無定論［13］。在本研究中，幽門螺桿菌陽性組的癌組織miR-217的表達(dá)水平高于陰性組，腫瘤直徑≥5cm、分化程度為低中分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幽門螺桿菌陽性胃癌患者的癌組織miR-217表達(dá)水平較高，通過該結(jié)果證實了miR-217的表達(dá)與幽門螺桿菌陽性胃癌的發(fā)生發(fā)展具有一定的關(guān)系，可作為對此類患者診斷的靶向指標(biāo)。行ROC曲線可見，癌組織miR-217對幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后的影響的曲線下面積為0.712（95%CI：0.590～0.834，P＜0.05），可見癌組織miR-217對幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后影響的預(yù)測具有顯著價值。且癌組織miR-217高表達(dá)組的死亡率要明顯高于低表達(dá)組，進(jìn)一步證實了miR-217表達(dá)水平的升高不僅與幽門螺桿菌陽性胃癌患者細(xì)胞增殖、侵襲及病情惡化有關(guān)，同時還可用于評估患者的預(yù)后［14-15］。

綜上所述，幽門螺桿菌感染陽性胃癌患者中的癌組織miR-217的表達(dá)水平較高，且該指標(biāo)與幽門螺桿菌感染陽性胃癌病理特征有關(guān)，同時癌組織miR-217對幽門螺桿菌陽性胃癌患者的預(yù)后具有預(yù)測價值。

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（2023-02-14收稿）